Определение фосфора липидов

Определение содержания фосфолипидов осуществляется на основании анализа содержания липидного (липоидного) фосфора, т. е. фосфора, определяемого в экстракте липидов. Для этих целей возможно использовать многие методы, поскольку липиды во всех случаях подвергаются минерализации. Существенным моментом является лишь трудность минерализации образцов, в которых фосфолипиды составляют лишь небольшую долю в сравнении с триглицеридами. Часто для ускорения минерализации используют хлорную кислоту [2], однако, увеличив время минерализации, можно применять и серную. Полученные величины содержания липидного фосфора умножают на усредненный лецитиновый коэффициент 25 и находят суммарное количество фосфолипидов. [c.217]

Определение фосфора липидов [c.405]

Осадок на фильтре промывают малыми порциями 3% раствора НС1О4 3-4 раза. Этот осадок затем используют для определения фосфора липидов и пр. (см. блок-схему на с. 401). [c.404]

Определение по фосфору считается наиболее надежным методом оценки количества нуклеиновых кислот, так как его процентное содержание в наименьшей степени зависит от нуклеотидного состава для ДНК оно составляет 9,8—10,1%, для РНК —9,1—9,6 26. При определении фосфора нуклеиновых кислот в тканях необходимо предварительно удалить свободные нуклеотиды, неорганический фосфат, а также все фосфорсодержащие соединения ненуклеотидной природы, в частности липиды. [c.163]

Составные компоненты фосфолипидов для количественного анализа вначале обрабатывают концентрированной серной кислотой, затем снимают слой силикагеля и сжигают для определения фосфора. Для этого хроматограммы опрыскивают 18 н. раствором серной кислоты, нагревают при 110° до обугливания пятен пятна соскабливают в пробирку. Рядом с последней фракцией соскабливают в пробирку пустой участок, равный обугленному. Добавляют 1 мл H IO4 (уд. вес 1,70), вводят две стеклянные бусины и нагревают на песчаной бане 3 часа. Охлаждают, вводят 5 мл дистиллированной воды, нагревают и фильтруют через ватман № 44. Пробирки и фильтр дополнительно смывают 1 мл теплой дистиллированной водой. Охлаждают и проводят реакцию молибденовой сини. Для этого добавляют 1 мл 2,5% раствора молибдата аммония и 0,4 мл восстанавливающего раствора (1-амино-2-нафтол-4-суль-фоновая кислота), перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение 7 минут. Фотометрируют при 830 ммк. Стандартная кривая строится в пределах 0,5—5 мкг фосфора. Наилучшие результаты получены при оптимальных условиях развития окраски [194], т. е. после нагревания растворов с концентрацией 1 н. раствора фосфора на кипящей водяной бане в течение 5 минут. Тонкослойная хроматография с успехом применяется для анализа липидов крови у больных с поражением печени [147] и др. [c.90]

При использовании почти всех методов определения нуклеиновых кислот тонко измельченную ткань экстрагируют кислотой— обычно трихлоруксусной (ТХУ), хлорной или серной кислотой,— а затем органическими растворителями для удаления липидов (в некоторых случаях используют сначала органические растворители, а затем кислоту). При экстрагировании линидов необходимо соблюдать специальные предосторожности, чтобы избежать потерь РНК и белка [52]. Полученный остаток содержит кислотонерастворимый нелипидный фосфор, который состоит [c.99]

Митохондриальные фосфолипиды характеризуются особенно высокой степенью ненасыщенности в сердечной мышце на каждый атом фосфоли-нидного фосфора приходится в среднем 3,2 двойной связи. Эта ненасыщен-ность, видимо, имеет определенное функциональное значение, так как каталитическая активность любого из четырех комплексов при экстракции липидов жировыми растворителями резко снижается, а при добавлении ненасыщенных фосфолипидов (например, липидов из митохондрий, лецитина из яиц, мяса и сои или же синтетического о леи л лецитина) снова восстанавливается. При этом чем больше степень ненасыщенности добавляемых липидов, тем резче выражен их активирующий эффект. Роль фосфолипидов, по-видимому, двояка 1) они стабилизируют активные конформации белков дыхательной цепи, как каждого в отдельности, так и их комплексов, и 2) они способствуют взаимодействию активных белков с другими важнейшими компонентами — коферментом Q, факторами, необходимыми для окислительного фосфорилирования, а также со структурными белками. [c.392]

Как можно видеть из данных табл. 4 и рис. 26 и 28, смесь фосфолипидов семян сои на пластинках с закрепленным слоем силикагеля делится на 13 пятен. Эти липиды были идентифицированы нами при помощи метчиков (фосфатидная кислота, фосфатидилэтаноламип, фосфатидилхолин, фосфатидилинозит, сфингомиелин) и при проведении специфических реакций (опрыскивание нингидрином для обнаружения азотсодержащих фосфолипидов, раствором Драгендорфа — для обнаружения фосфолипидов, содержащих холип, и т. д. см. стр. 30). Определение содержания фосфора в пятнах хроматограммы показало, что главными фосфолипидами семян сои являются фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламип. [c.39]

Н — вес материала, взятого для анализа (г) у — процент влаги в анализируемом веществе. Полученный препарат сырого жира может быть использован для дальнейших исследований. Он может быть подвергнут фракционированию на отдельные группы соединений, относящиеся к классу липидов (глицериды, жирные кислоты, лецитины, кефалины, стериды, инозит-фосфатиды, фосфатидные кислоты и др.). Такое фракционирование проводится на основании различной растворимости этих соединений в органических растворителях, а также при использовании хроматографических методов. Суммарный препарат жира или отдельные компоненты, входящие в его состав, используют также для более детальной йх химической характеристики определения кислотного числа, йодного числа, числа омыления, перекисного числа, а также определения углерода, водорода, фосфора и азота. [c.99]

Определение липидного фосфора в крови. С этой целью необходимо извлечь из крови содержащие фосфор липнды, что достигается обработкой крови смесью спирта с эфиром. В экстракте после предварительной минерализации определяют Р — титр и метрически или колориметрически. Прн осаждении белков трихлоруксусной кислотой липиды увлекаются вместе с белками поэтому их можно извлечь смесью спирта с эфиром и из белкового свертка после осаждения [c.228]

Определение. В пробирку 12 Х120 мл вносят 1 мл бензольного раствора липидов (50—100 жирных кислот). Растворитель отгоняют, как при липидном фосфоре — можно отгонять сразу в 6 пробирках. Слишком долго не нагревать, чтобы не изменились жирные кислоты. Когда растворитель отогнан, досушивают в эксикаторе с серной кислотой и высоким вакуумом. После этого можно хранить несколько часов без изменений. [c.235]

Определение жирных кислот фосфатидов. Поглощение на силикагель. Готовят колонку с внутренним диаметром 4,5 см, суженную книзу, длиной около 10 см, сверху расширенную в небольшой резервуар. На дно помещают кусочек гигроскопической ваты, хорошо извлеченной бензолом. Взвесь силикагеля в безводном бензоле выливают прямо на ватку, чтобы высота столбика в колонке была около 12 мм, и немного всасывают насосом. Как только бензол дойдет до слоя силиката, вливают 1 мл раствора липидов в бензоле. Потом колонку промывают 2 мл безводного бензола и пропускают 3 порции по 5 мл бензола, чтобы извлечь стероиды и глицериды. Время — около 45 минут, и можно одновременно обрабатывать 6 проб. Извлечение не содержит фосфора и связанных с ним жирных кислот — тоже, а стероиды и глицериды находятся в экстракте. Растворители почти отгоняют, остаток переносят в пробирки, где определяют жирные кислоты, как описано раньше. Работать нужно всегда с одним сортом бензола и определять выход (г-е-соуегу) с пробой глицеридов, гак как бензол дает небольшую прибавку окраски. Разность между общими жирными кислотами и содержанием их в этом экстракте — жирные кислоты фосфатидов. [c.236]

Из безазотистых минеральных солей на рост микроорганизмов и накопление липидов наиболее сильное влияние оказывают фосфаты. Установлено, что нормальное накопление липидов возможно только при наличии в среде определенных доз усваиваемого фосфора. Недостаток фосфора приводит к неполному использованию источника углерода среды, а его избыток изменяет направление процесса в сторону накопления нелипидной фракции. Такое действие солей фосфора объясняется участием их в метаболических процессах микробной клетки. Недостаток фосфора в среде влияет на процессы, связанные с ассимиляцией углеводов, с одной стороны, и с синтезом белка — с другой. Избыточное снабжение фосфором ведет к повышенному синтезу белка, а недостаток фосфора в среде усиливает липидообразование. Таким образом, влияние фосфора аналогично действию азота. На состав синтезируемых липидов фосфор практически не оказывает влияния. [c.340]

Что касается содержания липидов в крови, то имеющиеся доказательства большой изменчивости этого признака достаточно убедительны. Мэн и Джилди [39], изучая изменение содержания липидов в крови после всасывания у здоровых людей, проводили повторное определение у одних и тех же индивидов в течение различных сроков — от 3 месяцев до 4 лет. Для каждого пз 4 исследованных мужчин и 6 женщин наблюдался определенный, характерный для них уровень содержания липидов. У одного из 4 мужчин постоянно был самый низкий минимум и самый низкий максимум содержания холестерина, липоидного фосфора и титруемых жирных кислот. Другой представитель группы Мужчин имел наивысшие показатели для этих веществ. Одна из 6 женщин практически во всех случаях имела наиболее низкие минимальные и максимальные значения по сравнению с другими женщинами этой группы. [c.76]

Другой колориметрический метод, который можно применить к фосфолипидам, заключается в следующем образец растворяют в хлорной кислоте и определяют содержание фосфора с помощью раствора молибдата аммония. Курри и др. [161] обрабатывали пятна на силикагеле 0,4 мл 70 %-ной хлорной кислоты в специальной пробирке, осторожно выпаривая на маленьком огне до полного высушивания. Остаток растворяли в 12 %-ной хлорной кислоте и нагревали 10 мин на бане с кипящей водой. Такая обработка затрагивает не только фосфолипиды в результате ее силикагель переходит в нерастворимое состояние. После охлаждения определяли содержание фосфора по методу Вагнера [153, 264, 265] к пробе добавляли 0,3 мл 2,5 %-ного раствора молибдата аммония и 0,3 мл свежеприготовленного 10 %-ного раствора аскорбиновой кислоты. Смесь тщательно встряхивали и выдерживали 2 ч при 38°С, после чего раствор центрифугировали и определяли его коэффициент поглощения при длине волны 820 нм. Робинсон и Филлипс [266, 267] вместо аскорбиновой кислоты использовали в качестве восстановителя 1-амино-2-нафтол-4-сульфоновую кислоту, а Растоджи и др. [268]—раствор 2,4-динитрофенилгидразина в соляной кислоте. Дойзаки и Зиве [269] применили для подобных определений несколько другой метод они обрабатывали липиды серной кислотой с добавкой пероксида водорода. [c.99]

Химическое отделение Заведующий J. I. G. adogan Направление научных исследований спектры ИК и комбинационного рассеяния электронный парамагнитный резонанс соединения галогенов и элементов группы фосфора реакции и стереохимия неорганических соединений фосфора, мышьяка и сурьмы катализируемые металлами реакции обмена дейтерия механизм термической и фотолитической деградации неорганических полимеров реакции свободных радикалов и атомов в газовой фазе кинетика термического разложения органических соединений с целью определения энергии связи электрофильное замещение в органических соединениях и кислотно-основной катализ реакции ароматических и гетероциклических соединений фосфорорганические соединения жиры и жирные кислоты липиды. [c.271]

Полле и др. [682] описали метод микроанализа липидов мозга, основанный на двумерной ТСХ, с использованием многократного элюирования. Первичный экстракт липидов сначала подвергали тех в системе хлороформ — метанол — вода (35 15 2), что позволяло разделить липиды на фракции, содержащие соединения различных классов. Однако исключение составляли фосфатидилхолины, фосфатидилсеринь и фосфатидилинозиты, образующие одну фракцию. Это же относится и к смеси ганглиозидов и протеолипидов, которые также составляют одну фракцию. Последующая хроматография во втором направлении в двух элюирующих системах хлороформ — метанол (1 4), а затем хлороформ — метанол (2 1) и, наконец, повторная хроматография в первом направлении в системе хлороформ — метанол (2 1) позволяла разделить остальные компоненты. Разделенные зоны на хроматограмме окрашивали иодом и проводили количественную опенку с помощью химических методов. Такое определение можно проводить, не превращая фосфат в неорганический фосфор [683, 684]. Широко практикуется карбонизация липидов с последующей денситометрией [681, 685, 686], однако методы требуют стандартизации [687, 688]. [c.205]

Фосфолипиды (фосфатиды) представляют собой группу липидов, содержащих в качестве обязательного компонента фосфорную кислоту. По природе входящего в фосфолипиды спирта их разделяют на глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды. Общую концентрацию фосфолипидов определяют по содержанию в них липидного фосфора, на долю которого приходится 4% молекулярной массы фосфолипидов. В качестве унифицированного предложен метод определения общих фосфолипидов сыворотки по содержанию общего фосфора в липопротеинах, осаждаемых трихлоруксусной кислотой (способ Зильверсмита и Даниса, 1950). (У здорового взрослого человека концентрация липидного фосфора составляет 1,97-4,68 ммоль/л.) [c.238]

Главные элементы, участвующие в фотосинтезе (С, Н, О), а также азот, сера и фосфор составляют основные строительные блоки тела растения. Например, клеточные стенки, формирующие скелет растения, состоят почти исключительно из углеводов и близких к ним соединений, содержащих С, Н и О. Белки, главные органические компоненты цитоплазмы, построены преимущественно из С, Н, О и N и небольшого количества 3. В состав нуклеиновых кислот, присутствующих в ядрах и в некоторых органеллах цитоплазмы, входят С, Н, О, N и Р. Липиды, содержащиеся в изобилии во всех мембранах, состоят преимущественно из С, Н и О, а также незначительного количества N и Р. Из 12 элементов, источником которых служит материнская порода, четыре используются растением главным образом для структурных целей. Сера является компонентом нескольких ами нокислот (цистеин, цистин и метионин)—структурных единищ из которых в конечном счете образуются белки. Хотя клеткам растения необходимо относительно малое количество серы, почти вся она выполняет важную структурную функцию. Без серу-содержащих аминокислот не могли бы синтезироваться многие важные белки клетки. Сера присутствует также в глутатионе,. широко распространенном веществе, который, как полагают, играет определенную роль в окислительно-восстановительных реакциях благодаря своей способности к обратимому превращению из восстановленной, или сульфгидрильной, формы (—5Н), в окисленную, или дисульфидную, форму (—-8—8т-), [c.209]

Накопление липидов возможно только при наличии в среде определенных доз фосфора. Его недостаток ведет к неполному использованию источника углерода, а избыток — к накоплению нелипидных продуктов. На фракционный состав липидов изменение содержания фосфора практически влияния ие оказывает. Воздействие остальных макро- и микроэлементов питательной среды сказывается прежде всего на интенсивности роста дрожжей и скорости утилизации источника углерода, что косвенным образом сказывается на количестве синтезируемых липидов, практически не изменяя их состава. [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология