Карбоксипептидаза устойчивость

Неспособность карбоксипептидазы переваривать белок еще не указывает на отсутствие С-концевого остатка. Подобная устойчивость к действию карбоксипептидазы может быть обусловлена структурой белка. В этом случае необходима предварительная денатурация белка [39]. Устойчивыми являются также С-концевые амидные остатки и /)-формы любых аминокислот. Так же, как и в случае лейцинаминопептидазы, для получения однозначных результатов белок должен быть высокой степени чистоты, а карбоксипептидаза свободна от примеси эндопептидаз. Эндопептидазы могут быть инактивированы добавлением диизопропил-фторфосфата, который не влияет на активность карбоксипептидазы [62, 144]. [c.406]

Ингибирование ферментов определяется также природой иона металла. Большинство ферментов включает металлы 4-го периода. При координировании ионами тяжелых металлов возможно полное подавление ферментной активности. Особенно ядовиты для ферментов ионы Hg2+, например, Н + полностью подавляет активность карбоксипептидазы А. Ртуть обладает исключительным сродством к сере, и поэтому стремится образовать максимально устойчивые комплексы с аминокислотами, содержащими серу (цистеин, цистин, метионин). Ингибирование фермента ионами Hg2+ используется для идентификации (хотя не очень надежной) меркапто-групп [56]. [c.589]

Оксиаминокислоты, в которых гидроксильные группы находятся не в р-ноложении, относительно устойчивы в условиях кислотного гидролиза. Содержание тирозина в гидролизатах карбоксипептидазы [35], желатина [37] и кератина [38] не уменьшается при продолжительном гидролизе. Однако для инсулина наблюдается уменьшение на 1,8% при нагревании в интервале между 24 и 48 час и дальнейшее уменьшение на 8,2% между 48 и 96 час [34]. Пиц и сотр. [46] обнаружили значительные потери тирозина при гидролизе коллагена. Некоторое разложение тирозина в горячем раство- [c.128]

Пролин и оксипролин полностью устойчивы к действию фермента.- Цистеин в продуктах расщепления не был обнаружен. Полуцистин, если он присутствует в продуктах расщепления, мог образоваться за счет разрыва пептидной связи при этом связь с полипептидной цепью дисульфидным мостиком сохраняется. Окисление остатков цистина в цистеиновую кислоту не должно давать способную отщепляться под действием карбоксипептидазы группу, так как она содержит заряженную боковую цепь, но восстановление и алкилирование до --S H2 ONH2-rpynn приводят к образованию нейтрального остатка. Такой остаток был недавно обнаружен [198] в гидроЛизатах, полученных при действии карбоксипептидазы на восстановленный и алкилированный пролактин, что свидетельствует о присутствия С-концевого полуцисти нового остатка. [c.233]

Как в белках, так и в пептидах имеются устойчивые пептидные связи, например связи в пролилпептидах не расщепляются карбоксипептидазой. [c.293]

В 1949 г. для гидролиза белков впервые применили карбокси-пептидазу, которая специфически гидролизует С-концевые пептидные связи [99]. В дальнейшем было показано, что на скорость расщепления карбоксипептидазой влияют многие факторы, причем наиболее важным является характер боковой цепи С-концевой аминокислоты и до некоторой степени природа соседней с ней аминокислоты [57]. Легче всего отщепляются С-концевые аминокислоты, содержащие ароматическую боковую цепь, за ними следуют аминокислоты с большой алифатической боковой цепью и затем аминокислоты с алифатической боковой ценью меньшего размера. Еще больше уменьшается скорость отщепления при наличии в боковой цепи кислотных или основных групп С-концевой нролин и оксипролин устойчивы к отщеплению. [c.406]

Соединения (2) иДЗ) удалось различить только с помощью хроматографии на тонком слое окиси алюминия в системе вгор-бутанол/3%-ный аммиак (100 44), а также путем электрофореза на носителе при pH 2,1 или 9,1. Разделение этих соединений в препаративном масштабе было достигнуто хроматографией на нейтральной окиси алюминия в системе метанол/2 н. водный аммиак (I I). Строение октапептида (3) установлено его расщеплением трипсином, в результате которого образовалась смесь гексапептида (4) и дипептида (5), а структура последнего в свою очередь доказана сравнением с синтетическим образцом H-Asp-p-Arg-OH. До сих пор не установлено, в какой степени процесс транспептидации сопровождается рацемизацией. А5р -р-Уа1 -Ангиотензин II оказался на 50% активнее УаР-ан-гиотензина II в тесте на повышение кровяного давления у крыс с удаленными почками (ср. [10876]). Гросс [868] высказал предположение, что повышенная активность и пролонгированное действие А8р -р-Уа1 -ангиотензина II объясняются его большей устойчивостью к инактивации, которая вызывается не только эндопептидазами и карбоксипептидазами, но и аминопептида-зами. Точно таким же образом можно объяснить более высокую [c.65]

Оптическую чистоту гексадекапептида (G 1—16) проверяли при его гидролизе лейцинаминопептидазой. Карбоксипептидаза В отщепляет от мкмоль G 1 —16 1,97 мкмоль лизина следовательно, одновременно с отщеплением защитных групп происходит гидролиз С-концевой амидной группы (ср. -АКТГ), так как последняя устойчива к действию фермента. [c.276]

Были сделаны попытки определить места присоединения ионов металлов к большим белкам путем сравнения констант устойчивости комплексов модельных лигандов с теми же ионами металлов. Пожалуй, наиболее характерный пример представляет ме-таллофермент карбоксипептидаза А (КПА), который в естественном состоянии содержит ион Zn + и около 300 аминокислотных остатков. Определены константы устойчивости комплексов Zn + и некоторых других ионов металлов с апоКПА (фермент, с которого удален ион металла) и сравнены с соответствующими константами устойчивости комплексов модельных лигандов. На основании константы устойчивости, а также спектральных и других [c.125]

В ЭТОМ фрагменте углеводная цепь присоединена к остатку аспарагиновой кислоты. Связь Туг — Asp, входящая в состав недеградированного белка, количественно расщепляется проназой-Р. Однако смесь гликопептидов, образующаяся при расщеплении белка папаином [19J, содержит связь Туг — Asp, устойчивую к действию проназы-Р [12]. Выделение гликопептидов из яичного альбумина иллюстрирует упомянутые трудности. Обработка белка проназой-Р или последовательно пепсином и трипсином вместе с химо-трипсином дает продукты, которые еще содержат различные, но относительно большие количества лейцина и меньшие количества серина и треонина. Эти аминокислоты можно удалить действием карбоксипептидазы, однако только после предварительного замещения свободной аминогруппы карбобензоксирадикалом [12, 20]. Аналогичные проблемы возникают при получении гликопептидов из других белков и, по-видимому, могут быть решены аналогичным путем. [c.241]

Как отмечалось выше, первая углевод-пептидная связь, природа которой была твердо установлена,— это углевод-пептидная связь в яичном альбумине. В результате параллельных исследований ученых СССР, Японии, США и Англии было показано, что связующее звено представляет собой 2-ацетамидо-1-(ь-р-аспартамидо)-1,2-дидезокси-р-в-глюкозу (том 2, рис. 1). В ряде ранних работ [7, 33—36] по составу гликопентидов, получаемых при ферментативном гидролизе яичного альбумина, было показано, что аминокислотой, непосредственно связанной с углеводным фрагментом этого гликопротеина, является аспарагиновая кислота. Однако все эти препараты давали при дальнейшем гидролизе переменные количества лейцина, треонина и серина, которые обычно присутствуют в меньших количествах, чем аспарагиновая кислота. Позднее Богданов и сотр. [2] показали, что устойчивость гликопептида к действию карбоксипептидазы можно уменьшить, предварительно защитив свободную аминогруппу остатка аспарагиновой кислоты. Это позволило получить гликопептид, содержащий лишь следы других аминокислот [24, 37]. Количество аспарагиновой кислоты ясно указывало, что моль гликопептида содержит один аминокислотный остаток. Ранние исследования действия щелочи на гликопептид показали, что послед- [c.280]

Иногда ферменты сохраняют свою активность в кристаллическом состоянии (например, рибонуклеаза [23, 24] и карбоксипептидаза А [25]). Сопоставление активности фермента в растворе и в кристаллическом состоянии является непростой задачей, поскольку диффузия субстратов внутрь кристаллов затруднена. Имеется, правда, один путь остроумного решения этой проблемы, состоящий в кристаллизации связанного с ферментом промежуточного соединения (индолилакрилоилхимотрипсина см. ниже разд. Г. 2) при таком значении pH, когда это промежуточное соединение устойчиво [26]. При изменении pH, приводящем к увеличению реакционной способности промежуточного соединения, оно гидролизуется, причем реакция характеризуется той же самой константой скорости первого порядка, что и в растворе. [c.26]

Аналоги, содержащие остатки а-метиламинокислот, устойчивы к протеолизу карбоксипептидазой А, химотрипсином и ренальной ацилазой (свиньи). Высокой ферментативной устойчивостью характеризуется также антибиотик аламетицин [48]. Фермент, превращающий ангиотензин [18], не ускоряет гидролиз связи между 7-м и 8-м аминокислотными остатками молекулы [ (а-Ме)РЬе ]-брадикинина (табл. 15). [c.52]

Исследовано влияние введения остатка дегидроаминокислот в последовательности Ьеи-энкефалина на его сродство к б- и [1-ре-депторам [181, 184]. Установлено, что (2)- конфигурация АРЬе существенно влияет на взаимодействие энкефалина с б-рецепторами [184]. Аналогам Ьеи-энкефалина, содержащим остатки дегидроаминокислот, присуща увеличенная селективность связывания с рецептором, более высокая устойчивость к ферментативному расщеплению по сравнению с насыщенными аналогами [181, 189]. Это выявлено при взаимодействии дегидроэнкефалинов с карбоксипептидазой V [180]. В случае использования [АРЬе Ьеи ]-энкефалина, Н-Туг-01у-С1у-АРЬе-Ьеи-0Н скорость гидролиза связи АРИе-Ьеи резко уменьшается по сравнению со скоростью гидролиза связи РЬе-Ьеи. Связь 01у-АРЙе полностью устойчива к ферментативному гидролизу. [c.121]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология