Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Негативное окрашивание

Рис. 12.2. Форма и размеры частиц гемоцианинов моллюсков, наблюдаемые через электронный микроскоп после негативного окрашивания, и соответствующие им коэффициенты седиментации. Рис. 12.2. Форма и <a href="/info/4442">размеры частиц</a> гемоцианинов моллюсков, наблюдаемые <a href="/info/105815">через электронный</a> микроскоп после <a href="/info/1345028">негативного окрашивания</a>, и соответствующие им коэффициенты седиментации.

    В качестве красителя, непроницаемого для электронов и избирательно комбинирующегося с белками, часто используют фосфорно-вольфрамовую кислоту. В этом случае часто прибегают к так называемому негативному окрашиванию (избыток краски отмывается неполностью). В результате на темном фоне неотмытой кислоты будут четко видны светлые изображения молекул белка. [c.111]

    Когда в учебнике бактерии описываются с помощью этих терминов, подразумевается, что природные ансамбли не нарушены. Вместе с тем при чрезмерном встряхивании, например, длинные цепи клеток могут разбиваться, а из одиночных клеток могут образовываться комки. Разрушение длинных цепей или других непрочных группировок клеток сводят к минимуму добавлением к культуре формальдегида до 1—2% (объем/объем) культуру инкубируют с формальдегидом 15 мин, затем ее центрифугируют и ресуспендируют в воде для приготовления пленок или негативного окрашивания. Эта процедура особенно рекомендуется для стрептококков. Следует также принимать во внимание последствия, связанные с возрастом культуры и составом среды. [c.65]

    Имеется несколько удовлетворительных методов для окрашивания эндоспор в бактериях. При использовании простейшего из них — негативного окрашивания — получают нефиксированные препараты, материал которых имеет негативный вид. Для осуществления метода взятый петлей 7%-ный (вес/объем) водный нигрозин смешивают на покровном стекле с набранной петлей культурой, смесь распределяют в виде тонкой пленки и высушивают на воздухе. Покровное стекло переворачивают пленкой вниз, помещают на предметное стекло и [c.73]

    Негативное окрашивание (контрастирование) — это процесс заключения бактерий или других частиц в тонкую пленку разбавленного раствора соли тяжелого металла, которая затем высыхает на стекле. В отношении используемых красителей и методов их применения (см. ниже) суш,ествует множество вариантов. Стандартная методика, применяемая в нашей лаборатории, включает два этапа — сначала нанесение образца, а затем окрашивание 2%-ным молибдатом аммония, как описано ниже. [c.100]

    Для негативного окрашивания суспензий существует несколько взаимозаменяемых методов. В одном из них смешивают равные объемы (можно использовать и другие отношения) красителя и суспензии, наносят одну каплю на сетку, а затем либо сразу, либо по прошествии определенного времени (например, 30 с) удаляют избыток жидкости. Обычно каплю лучше всего наносить сразу после смешивания, поскольку происходящее со временем взаимодействие частиц и красителя может приводить к нестабильным результатам. Иногда выгодно захватить тонкую пленку смеси платино-иридиевой петлей размером чуть больше площади сетки (например, диаметром 3,2 мм) и нанести ею смесь на сетку, лежащую на промокательной бумаге этим обеспечивается более равномерное распределение частиц. Сетку высушивают и просматривают. Если нанесенного материала больше, чем должно быть в тонкой пленке, то избыток следует удалить фильтровальной бумагой. [c.101]


    Другой метод негативного окрашивания заключается в том, что сетке дают возможность плавать последовательно по поверхности капли суспензии, капли фиксатора или другого агента, капли промывочной воды (несколько раз см. ниже Отмывка ) и капли с красителем, вслед за чем, как и обычно, сетку подсушивают фильтровальной бумагой (см. выше этап 6-й). Капли удобно наносить на пластинку зубного воска, сполоснутого дистиллированной или деионизованной водой для удаления пыли и растворимых солей. [c.101]

    В качестве красителей для негативного окрашивания используются различные соли тяжелых металлов. Наш опыт свидетельствует о том, что самой подходящей солью является молибдат аммония, так как он хорошо распределяется, не реагирует с белками и большинством других компонентов суспензии и его концентрацию легко регулировать для создания требуемой степени контраста [32]. Пожалуй, чаще других используются растворы фосфорновольфрамового натрия и калия, в целом удовлетворительные при нейтральных значениях pH. Широко применяются соли урана, поскольку их молекулы, обладающие небольшими размерами, хорошо проникают в поверхностные неровности и тем самым улучшают разрешение тонких деталей. Уранилацетат, который, как правило, имеется в электронно-микроскопических лабораториях, потому что его используют также при окрашивании срезов, дает хорошие результаты при концентрации 1 % или меньше. Но его растворы имеют очень низкий pH (около 2,5), и, даже будучи частично нейтрализованным непосредственно перед использованием, он начинает выпадать в осадок при pH выше 4,5. Некоторые структуры ура- [c.103]

    Метод выявления спор негативным окрашиванием. На предметном стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсушивают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3—5 мин наносят метиленовый синий или на 1—3 мин фуксин, после чего препарат осторожно промывают водой и подсушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией. [c.111]

    Мембрана саркоплазматического ретикулума имеет асимметричное строение и выглядит под электронным микроскопом при соответствующей обработке как трехслойная структура. При негативном окрашивании мембран на их внешней поверхности обнаруживаются выступы, соответствующие гидрофильным участкам молекул Са-транспортирующего фермента (рис. 16). [c.55]

    Обращенная к матриксу поверхность внутренней мембраны при негативном окрашивании tфактор сопряжения Р, иногда прикрепленными с помощью ножки [c.394]

    Гликопротеин представляет собой гибкие нити, и, согласно Максфилду, его можно рассматривать как до некоторой степени гибкий стержень. В другом исследовании [278] была обнаружена значительная гибкость и было высказано предполон<ение о существовании сетчатой структуры, которая действительно видна на некоторых фотографиях Максфилда. Недавно проведенное исследование с применением методики негативного окрашивания [279] показало, что при высушивании в условиях, необходимых для такой техники, образуется фибриллярная сетка, в которой каждая фибрилла состоит из ряда молекул, соединенных боковыми сторонами. Видны также некоторые внутренние детали структуры молекул. Некоторые более ранние электронные микрофотографии бронхиальной слизи [280, 281] интересны в том отношении, что на них также видна фибриллярная структура сходного тина, хотя и при меньшем увеличении. Капиллярные силы поверхностного натяжения, которые могут возникать во время высушивания раствора гликопротеина, могли приводить к формированию наблюдавшихся фибрилл. Поэтому не следует считать, что такой же тип структуры обязательно существует в растворе. Опубликованы некоторые более поздние электронные микрофотографии более жестких белков глобулярного типа [282]. В случае если отдельные молекулы легко различимы, электронная микрофотография позволяет определить степень нолидиснерсности по отношению к удобному для измерения параметру молекулы. Это обычно имеет значение только в том случае, если одно измерение очень велико. [c.95]

    Используя для контрастирования оттенение солями тяжелых металлов, можно наблюдать в электронный микроскоп изолированные макромолекулы, например, ДНК или большие белки (см. рис. 4-20), а после негативного контрастирования разрешению поддаются даже мельчайшие детали. При приготовлении образцов для негативного контрастирования исследуемые молекулы наносят на тонкую пленку углерода (практически прозрачную для электронов), затем ее смачивают концентрированным раствором солей тяжелых металлов, например, уранилапетата. После высушивания образца тонкая пленка солей тяжелых металлов равномерно покрывает углеродную подложку, за исключением участков, занятых адсорбированными макромолекулами. Вещество макромолекул более проницаемо для электронов по сравнению с прилежащими участками, покрытыми солями тяжелых металлов за счет этого возникает обращенное или негативное изображение молекулы. Негативное окрашивание используется особенно эффективно для наблюдения больших агрегатов макромолекул (вирусы, рибосомы) либо [c.188]


    Л. Окрашивание образцов. Существуют два типа окрашивания — позитивное и негативное. При позитивном окрашивании молекулы красителя (соли тяжелых металлов) присоединяются к тем или иным группировкам макромолекулы [12]. В случае негативного окрашивания , чаще называемого негативным контрастированием, макромолекулы заключаются в тонкую пленку контрастирующего вещества. На рис. 20.13 показапо, как при этом образуются области, недоступные для контрастирующего вещества и, следовательно, обладающие меньшей электронной плотностью [6, 8]. [c.553]

    Анализ реплик замороженных сколов мембран саркоплазматического ретикулума, предварительно обработанных ванада-том, показал, что на выпуклых полумембранах (см. рис. 16) возникают своеобразные вмятины, или углубления. Создается впечатление, что полипептид АТФазы был глубже утоплен в липидный матрикс. В то же время с помощью негативного окрашивания мембран установлено, что ножка АТФазы (см. рис. 16) после обработки саркоплазматического ретикулума ванадатом становится короче и основная часть фермента, выступающая в цитоплазму, локализуется ближе к мембране. Эти данные косвенно свидетельствуют о том, что при кон-формационном переходе АТФазы, связанном с изменением сродства к Са +, происходит ее перемещение в глубь мембраны. [c.61]

    На рис. 15 и 16 Са-АТФаза саркоплазматического ретикулума представлена в виде тетрамера. Вывод о тетрамерной организации фермента был сделан в результате сопоставления концентрации частиц, выступающих на внешней поверхности мембраны пузырьков и выявляемых при негативном окрашивании, и внутримембранных частиц, обнаруживаемых методом замораживания— скалывания. Первых частиц оказывается в 3—4 раза больше, чем вторых. [c.62]

    Указанных недостатков лишен иммуноанализ на основе цитолизина (рис. 9-4), в котором используют липосомы с одной полостью, образующиеся при удалении детергента диализом. Новый метод не требует ни присоединения лекарственного препарата к липосомам, ни использования комплемента и обеспечивает быстрый лизис везикул. Липосомы, применяемые для анализа по этому методу, при хранении в замороженном виде в атмосфере аргона устойчивы в течение одного года (т. е. непроницаемы для заключенной в них щелочной фосфатазы), нО теряют устойчивость при удалении из их состава холестерола. Как показала электронная микроскопия с негативным окрашиванием, средний размер везикул составляет примерно 0,2 мкм. Добавление к везикулам конъюгата [уабаин—мелиттин (20 нмоль/л) сразу же вызывает полный лизис, но лизиса не происходит в случае предварительной инкубации конъюгата с избытком антител против дигоксина (рис, 9-5). Проводя такую инкубацию в присутствии известных количеств дигоксина, можно построить калибровочную кривую (рис, 9-6). [c.127]

    На основании данных электронной микроскопии высокого разрешения, негативного окрашивания внутренней мембраны митохондрии и последующей их реконструкции, дифракции рентгеновских лучей на липидах со сравнительно большим содержанием воды в 60-х годах появился ряд моделей, таких, как модель миелиновой оболочки Дж. Фине-ана, модели Ф. Шестранда, Дж. Лаци, Д. Грина и Дж. Пердью, в которых предполагалось субъединичное строение мембран (см. рис. 1). Эти модели представляют интерес только с точки зрения истории развития идей о структуре мембраны. [c.36]

    Негативное окрашивание вывернутых субмитохондриальных пузырьков выявляет грибовидные выросты диаметром около 9 нм, располагающиеся по всей поверхности мембраны. Как показал Э. Ракер, выросты исчезают после сильного механического перемешивания суспензий пузырьков, что сопровождается потерей способности пузырьков синтезировать и расщеплять АТФ, а также появлением в растворах сферических частиц диаметром 9 нм и АТФаз- [c.132]

    Анализ белков вируса UUK показал наличие двух гликопротеинов, основного белка нуклеокапсида и минорных количеств большого белка [184, 185, 251]. Гликопротеины видны как хорошо различимые пустые цилиндрические морфологические единицы длиной 8—10 нм диаметром 10—12 нм и с центральной полостью размером 5 нм [209—211, 250]. Негативное окрашивание и фиксация препаратов UUK глутаральдегидом с последующим применением техники замораживания — скалывания показывает, что поверхностные единицы являются кластерами пептонов — гексонов, уложенных в икосаэдрическую решетку с 7= 12, Р = 3 и расстоянием между гексонами - 12,5—16 нм для окрашенных частиц и 17 нм для замороженных [250]. Анализ трансляции РНК in vitro позволяет предположить, что два гликопротеина происходят из общего предшественника [242]. [c.390]

    Метод негативного контрастирования Бреннера и Хорна (часто неправильно называемый негативным окрашиванием) заключается в заливке мелких частиц или макромолекул сплошным ело- [c.73]


Смотреть страницы где упоминается термин Негативное окрашивание: [c.92]    [c.60]    [c.406]    [c.338]    [c.59]    [c.273]    [c.305]    [c.273]   
Методы общей бактериологии Т.3 (1984) -- [ c.95 , c.108 , c.128 ]




ПОИСК







© 2024 chem21.info Реклама на сайте