Световая микроскопия приготовление препаратов

Фотографирование препарата в электронном микроскопе. Приготовленные препараты предварительно просматривают в световом микроскопе при небольшом увеличении (80—100 раз) для того, чтобы выбрать сетки с наиболее чистой и ровной пленкой. Отобранные препараты исследуют в электронном микроскопе. Работу на электронном микроскопе проводят в присутствии преподавателя и оператора. [c.198]

Л.2. Приготовление и окраска препаратов-мазков для световой микроскопии [c.11]

Для того чтобы с помощью микротома получить очень тонкий срез, необходимо, чтобы материал бьш залит в соответствующую опорную среду. При приготовлении препаратов для световой микроскопии объекты заливают в пара- [c.213]

Описанная процедура приготовления препаратов в основном сходна как для светового, так и для электронного микроскопов, хотя существуют некоторые различия в деталях (они перечислены в табл. 5.6). [c.215]

Книги по световой микроскопии и фотографии в микроскопии легко доступны — от энциклопедий до брошюр в бумажной обложке. Однако в книгах можно найти лишь основные принципы микроскопирования. Научиться удовлетворительно работать с микроскопом можно только под чьим-то непосредственным руководством, приобретая практический навык, немалую часть которого составляет искусство приготовления хороших препаратов. Микроскопии бактерий посвящено множество различных книг, но ее принципы универсальны. В приводимом ниже перечне (1 —10) представлены различные типы опубликованных по данному вопросу работ. [c.43]

Глава 2 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ [c.45]

Готовят влажные препараты из молодых бульонных культур (т. е. находящихся в экспоненциальной фазе роста), выращенных при двух различных температурах (например, 37 и 20°С). В некоторых случаях на средах, содержащих глюкозу, подавляется образование жгутиков [15]. Методы исследования с помощью светового микроскопа описаны в разд. 3.3.4. Влажные препараты изучают сразу после приготовления. При исследовании анаэробов лучше всего рассматривать среднюю часть препарата, а при исследовании аэробов — области около воздушных пузырьков и у края препарата. Не все клетки должны быть подвижными. Для того чтобы штамм бактерий был признан подвижным, необходимо обнаружить хотя бы одну клетку, меняющую свое положение по отношению по меньшей мере к двум другим клеткам [12]. Примечание подвижность следует отличать от броуновского движения (беспорядочного покачивания клеток) и от пассивного движения за счет потоков, образующихся под покровным стеклом. [c.32]

В препарате, приготовленном указанным способом, под поляризационным микроскопом просматриваются осколки кристаллов исследуемого вещества, причем наблюдение перемещения световой полоски (полоски Бекке) производится при двух взаимно-перпенди-кулярных положениях погасания. Для этого определения исследуемый кристаллический осколок путем вращения столика микроскопа приводится в положение погасания, после чего выводится анализатор на границах исследуемого кристаллического осколка наблю- [c.118]

Ценность электронного микроскопа заключается в его способности разрешать объекты, которые не разрешаются оптическим микроскопом в видимом или ультрафиолетовом свете. Короткая длина волны электронов, которая уменьшается в прямой зависимости от подаваемого ускоряющего напряжения, позволяет разрешать, т. е. различать как отдельные объекты, отстоящие друг от друга всего на 2А (0,2 нм или 0,0002 мкм) или даже меньше, в то время как предел разрешения световой оптики лежит вблизи 0,2 мкм (он зависит от длины волны используемого света). На практике самые лучшие современные электронные микроскопы просвечивающего типа в самых оптимальных условиях работы (т. е. при при соответствующих вакууме, центрировке линз, ускоряющем напряжении, чистоте прибора, физической стабильности и качестве приготовленного образца) дают разрешение в диапазоне 0,5—1,0 нм. Но биологические образцы имеют вполне определенную толщину реально предел разрешения для срезов достигает около 2,5 нм, а для негативно контрастированных препаратов — около 1,0 нм. Чтобы улучшить разрешение, нужны мастерство и хорошо налаженный прибор. Образцы и поддерживающие пленки-подложки с большой толщиной увели- [c.92]

Фотографирование препаратов в. электронном микроскопе. Приготовленные препараты предварительно просматривают в обычном световом микроскопе при небольшом увеличении (80—100 раз), для того чтобы оценить их качество и выбрать сетки с наиболее чистой и ровной пленкой. Отбирают по указанию преподавателя лучшие препараты и вставляют их в объок годержатель для наблюдения в электронном микроскопе. Работу па электронном микроскопе проводят в присутствии преподавателя и оператора. [c.194]

Исследование реплик в электронпом микроскопе. Приготовленные препараты предварительно просматривают в световом микроскопе прп небольшом увеличении (80—100 раз) для того, чтобы выбрать реплики с наиболее чистой поверхностью. Отобранные реплики последуют в электронном микроскопе. Для этого реплики вставляют в объектодержатель, который устанавливают в колонну микроскопа, и просматривают их при разных увеличениях (начиная от 2000 до 6000—8000). Выбирают наиболее характерные участки, которые фокусируют и фотографируют. Длительность экспозиции от 1 до 4 с, в зависимости от освещенности поля зрения. Полученные снимки проявляют и печатают обычным способом. [c.203]

Исследование реплики в электронном микроскопе. Приготовленные препараты предварительно просматривают в световом микроскопе при небольшом увеличении (80—100 раз) для того, чтобы выбрать реплики с наиболее чистой поверхностью. Отобранные реплики исследуют в электронном микроскопе. Для этого реплику вставляют в объектодержатель, который устанавливают в колонну микроскопа, и просматривают ее при разных увеличениях (начиная от 2000 до 6000-8000). [c.201]

Приготовленные препараты предварительно просматривают в световом микроскопе при увеличении 30—100 раз и выбирают сетки с наиболее чистой, ровной и нерастрескавшейся пленкой. Затем препа )аты исследуют с помощью электронного микроскопа. (Работу на электронном микроскопе проводят под руководством преподавателя.) [c.126]

Микроскопические исследования препаратов из кристаллов с неструктурной примесью проводились на оптических (МП, МБИ, МБС) и электронном (УЕМ-6А) микроскопах. Предварительные визуальные наблюдения показали, что обнаруживаемый в некоторых отожженных молочно-белых кварцевых пластинках шелковистый блеск обусловлен светорассеянием на трещинах размером примерно 0,2 мм. В процессе исследования под оптическими микроскопами специально приготовленных препаратов (пластины толщиной от 1 до 0,1 мм ориентировались параллельно различным кристаллографическим плосткостям) при интенсивном боковом освещении было установлено, что в молочно-белом кварце присутствуют скопления микроскопических закономерно ориентированных трещин размером от 1 до 0,005 мм. Были изучены микрофотографии, которые дают представление о морфологических особенностях и распределении трещин в объеме различных пирамид роста. Подавляющее большинство трещин имеет размеры от 0,01 до 0,1 мм и ориентировано параллельно граням ромбоэдров. Реже встречаются системы, параллельные плоскостям х, с, з н образованные более крупными трещинами. Размеры трещин уменьшаются с увеличением их числа. Поэтому визуально они обнаруживаются лишь в зонах с пониженной концентрацией неструктурной примеси. Обычно эти системы параллельны плоскости базиса, что определяется по величине угла отражения светового пучка. Полученные данные подтверждают вывод Д. П. Григорьева, сделанный в 1967 г., о проявлении нескольких направлений спайности в кристаллическом кварце. Трещины, параллельные плоскости х, были встречены только в секторе <+х>. При увеличениях порядка 80—400 было обнаружено, что мельчайшие трещины, параллельные граням основного положительного ромбоэдра, имеют эллипсовидную форму и почти соприкасаются друг с другом, образуя сет- [c.121]

Микроскопия. Исследование является простым и доступным, имеющим наибольшее значение в диагностике урогенитального хламидиоза. Для ориентировочного определения хламидий в материале готовят препараты для световой микроскопии, для подтверждения и дифференциации обнаруженных возбудителей — прямую РИФ. Поскольку количество возбудителя в материале часто бывает небольшим, важно, чтобы в пробу попадало как можно больше клеток. С этой целью исследуют преимущественно соскобы, а не мазки с пораженных тканей. Для концентрирования клеток материал центрифугируют и для приготовления микропрепаратов берут осадок. [c.244]

Та типичная клетка, которую мы до сих пор рассматривали и которая изображена схематически на фиг. 4, представляет собой клетку эукариотического типа. Такая клетка является основной единицей не только всех высших, многоклеточных животных и растений, но также и таких низших, одноклеточных организмов, как грибы, простейшие и водоросли. Изобретение в 30-х годах электронного микроскопа, разрешающая способность которого Б сто раз превышает разрешающую способность светового микроскопа, и последующее появление более тонких методов окрашивания и приготовления препаратов дали возможность разглядеть гораздо больше деталей строения эукариотической клетки. На фиг. 20 показана электронная микрофотография ядра и окружающей его цитоплазмы клетки летучей мыши. На этой фотографии хорошо видна двухслойная структура ядерной мембраны, а также отверстия, или поры, в этой мембране, через которые ядро сосбшается с цитоплазмой. Можно видеть, что находящиеся в цитоплазме митохондрии, как и ядро, окружены мембраной. Но самсе важнее, что те цитоплазматические структуры, которые на основании данных световой микроскопии принято было называть вакуолями , оказались на электронных микрофотографиях сетью удлиненных, тонких образованных мембранами структур. Эта сеть, названная ждоплазматической сетью, представляет собой сложную систему впячиваний наружной мембраны. Таким образом, полость вакуоли на самом деле непосредственно связана с внеклеточной средой. Темные точки, которые, как можно видеть, выстилают эндоплазматическую сеть, — это рибосомы, маленькие частипы, состоящие примерно из одинаковых количеств белка и РНК. В рибосомах локализовано около двух третей всей цитоплазматической РНК. [c.44]

Одна из наиболее важных областей применения радиоактивных изотопов в биологии клетки - )то определение локализации радиоактивных соединений в срезах клеток или живых тканей методом радиоавтографии. При использовании этого метода живые клетки подвергают кратковременному (импульсному) мечению с последующей инкубацией в течение различных промежутков времени в нерадиоактивной среде. Затем клетки фиксируют и обрабатывают для проведения световой или электронной микроскопии. Каждый приготовленный препарат покрывают тонким слоем фотоэмульсии и оставляют на несколько дней в темноте - время, в течение которого происходит распад радиоактивного изотопа. Затем фотоэмульсию проявляют. Местоположение радиоактивных молекул в каждой клетке можно определтгть по расположению темных зерен серебра. Если инкубировать клетки с радиоактивным предшественником ДНК С Н-тимидином), то можно увидеть, что ДНК синтезируется в ядре и там же остается. И наоборот, мечение клеток радиоактивным предшественником РНК СН-уридииом) показывает, что РНК исходно синтезируется в ядре и затем быстро накапливается в цтгтонлазме клеток. [c.223]

Фото 46. Электронная микрофотография микроструктуры ультратонкого шлифа метеорита Orgueil (гл. XVII, [29]). Перед приготовлением препарата пробу в течение 1 ч кипятили в 6 п. растворе H I. Объекты, сфотографированные через электронный микроскоп, труднее идентифицировать, чем те. которые сделаны с помощью светового микроскопа (см. фото 43 и 45). Может быть, здесь перед нами организованный элемент , по возможно, что это какой-то устойчивый к кислоте земной микроскопический объект или даже артефакт, возникший в процессе обработки препарата. На эту возможность указывает Надь в своей работе (гл. XVII, [29]). [c.454]

Основным прибором цитологических исследований является световой микроскоп, до сих пор не утративший своего значения при изучении клетки. Существуют самые разнообразные модели световых микроскопов. Для каждого способа микроскопирова-ния необходимы свои методы приготовления препаратов. При изучении клетки под световым микроскопом многие ее структурные компоненты остаются незамеченными. Кроме того, при этом методе исследования живую клетку приходится обычно фиксировать (умерщвлять), дифференцированно ее окрашивать для выделения отдельных структур, что позволяет получить постоянные препараты хорошего качества, на которых отчетливо видно строение растительной клетки Однако в некоторых случаях фиксирующие агенты (спирт, кислоты, формалин, соли металлов) и красители могут исказить истинную картину клеточной структуры, заменив ее артефактами (структуры, созданные фиксирующим веществом). Б этом случае наряду с постоянными препаратами следует параллельно изучать живые клетки. Последние чаще всего окрашивают нейтральными красителями — цитоплазму, янусом зеленым — митохондрии, метиленовым синим — комплекс Гольджи. Используют и некоторые другие красители, сравнительно легко проникающие в живые клетк й. [c.7]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология