Время инкубации

Скорость ферментативной реакции зависит от концентрации субстрата (субстратов), pH, температуры, присутствия активаторов или ингибиторов, природы буфера, его ионной силы и др. Ряд факторов оказывает влияние на стабильность фермента, вызывая необратимые-изменения его нативной конформации. Это необходимо учитывать, подбирая условия измерения активности (pH, температура, время инкубации). Подробное исследование стабильности ферментов описано, ниже. [c.206]

Скорость ферментативной реакции повышается в 1,5—2,2 раза с повыщением температуры на 10° С. Поэтому такого понятия, как температурный оптимум активности , не существует. Вместе с тем в условиях эксперимента существует определенное значение температуры, при котором активность фермента максимальна дальнейшее увеличение температуры приводит к снижению скорости реакции. Следует иметь в виду, что это происходит в результате денатурации части фермента. Чем короче время инкубации, тем выше кажущийся температурный оптимум. На рис. 32 видно, что при времени реакции 1 активность максимальна при 70° С, а при времени /2 — при 50° С. Оптимальная температура действия фермента зависит от соотношения между влиянием температуры на скорость ферментативной реакции, с одной стороны, и на скорость денатурации фермента - с другой. [c.211]

Поскольку длительность прямолинейного участка кинетической кривой от опыта к опыту несколько изменяется, время инкубации должно составлять не более 70 % и не менее 20 % времени соответствующего прямолинейного участка. [c.26]

При исследовании растительного материала, содержащего менее активную инвертазу, чем дрожжи, соответственно увеличивают навеску от 5 до 10 г и время инкубации до 20 ч. [c.85]

На графике отмечают период времени, в течение которого скорость реакции находится в линейной зависимости от времени инкубации. Именно этот участок графика и будет соответствовать условиям, при которых измеряется начальная скорость реакции. В пределах этого участка выбирают время инкубации, которое необходимо использовать при дальнейших кинетических исследованиях этого фермента. [c.59]

Скорость ферментативной реакции, как и любых других, увеличивается при повышении температуры. Но так как ферменты являются белками, повышение температуры может ускорить их денатурацию и привести к снижению скорости реакции. Денатурация тем значительнее, чем выше температура и чем больше время инкубации. Чтобы избежать неточности, вызванной денатурацией, рекомендуется измерять активность фермента при 25 °С, часто ее измеряют и при 37 °С. [c.59]

ООО и больше). Разбавление проводят следующим путем . В мерную колбу емкостью 100, 500 или 1000 мл наливают посредством сифона (чтобы в колбу не попадали пузырьки воздуха) разбавляющую воду до половины колбы, прибавляют точно отмеренное пипеткой количество исследуемой воды (например, 10 мл) и доливают до метки разбавляющей водой. Колбу закрывают пробкой, и ее содержимое тщательно перемешивают несколько раз. Если требуется большее разбавление, то из полученного объема жидкости опять отбирают пипеткой отмеренное количество жидкости и таким же путем разбавляют до 1 в другой колбе. Это приходится иногда повторять несколько раз (при анализе сильно загрязненных вод), пока введенного с разбавляющей водой кислорода не будет достаточно на все время инкубации. При разбавлении необходимо следить за тем, чтобы разбавляющая вода и полученная в результате разбавления смесь имели температуру 18—20 °С, а pH смеси был не больше 8,3 и не меньше 7,5. [c.50]

Правильность разбавления контролируют следующим образом. После всего периода инкубации концентрация кислорода в жидкости должна быть не меньше 3—4 мг л и потребление кислорода за все время инкубации должно быть также не меньше 3—4 мг л. [c.50]

Все три колбы помещают в термостат при 37°С на 4 2 —5 часов. Для увеличения чувствительности реакции время инкубации опытной колбы увеличивается до 16—18 часов. [c.161]

При проведении исследований применяют либо стеклянные, либо пластмассовые чашки одноразового использования (для культур). При применении стеклянных чашек Петри во время инкубации необходимо поддерживать влажную среду для предотвращения потерь в результате испарения, так как эти чашки имеют неплотно прилегающие крышки. Чаще пользуются одноразовыми пластмассовыми чашками с плотно прилегающими крышками, уменьшающими опасность дегидратации. Если требуется повторное использование чашек, их следует обработать путем погружения 70%-ный раствор этилового спирта в течение 30 мин, высушивания на воздухе и повторной сборки. [c.73]

Ю 15 20 Время инкубации 8 сутках [c.145]

Для предотвращения частичной ренатурации ДНК во время инкубации с сефарозой было предложено вести посадку в 90%-ном формамиде. 20 мл Br N-активированной сефарозы суспендировали в 90%-ном водном растворе деионизованного с )ормамида, содержащем [c.388]

Иногда в эксперименте во время инкубации необходимо добавлять в опытную смесь реактивы. В этих случаях пользуются сосудиками с пришлифованными и вращающимися на шлифе реторточками (рис. 2, № 3, 4). Весьма удобными и наиболее универсальными являются сосудики с двумя пришлифованными реторточками и внутренним кольцевым желобом для щелочи, поглощающей СО2 (рис. 2). Срсудики этой формы широко применяются для одновременного определения поглощенного О2 и образовавшегося во время работы СО2. [c.12]

При обработке иммобилизованных тетрамеров дегидрогеназ 8 М раствором мочевины могут быть получены ковалентно связанные с сефарозой мономеры. Однако в процессе длительной инкубации в мо= чевине они теряют активность из-за денатурации. Подбирая концентрацию мочевины и время инкубации, можно провести избирательную денатурацию всех субъединиц тетрамера дегидрогеназы, за исключением той, которая связана с матрицей ковалентно, так как за счет стабилизирующего действия матрицы именно эта субъединица является наиболее устойчивой к действию мочевины. [c.302]

Сравнивается АТФазная активность миозина в двух рядах проб. В первом ряду порядок смешивания растворов следующий сначала к раствору миозина добавляется раствор ПХМБ, а после взаимодействия белка с модификатором, продолжающегося в течение 5 мин, добавляется инкубационная среда, содержащая АТФ. Время инкубации — 25—30 мин. [c.401]

В общем случае ферментативный гидролиз протекает тем специфичнее, чем короче время инкубации с протеазой. При этом большое значение имеет чистота выбранного фермента. Для удаления из трипсина последних остатков химотрипсина применяют, например, селективно ингибирующие вещества, такие, как дифеиилкарбамилхлорид или Ы1-тозиламидо-2-фенил)-этилхлорметилкетон. [c.365]

Определение автолитической активности пшеничной муки. Методика опыта. К 50 г пшеничной муки приливают 500 мл дисти лированной воды (pH = 7,0) и 0,5 мл толуола. Смесь инкубиру] в термостате 1 ч при температуре 37° С. Во время инкубации см тщательно перемешивают. Затем доводят объем до 1 л, фильтруют в фильтрате определяют азот аминокислот формольным или потенщ метрическим титрованием. Параллельно ставят контрольный опь в котором формольное титрование проводят до инкубирования. [c.70]

Все реакционные смеси аккуратно перемешивают и одновременно помещают на 60 мин в водяную баню или термостат с тем-Перату1юй 37 °С. Следует избегать вибрации и ударов во время инкубации. По истечении указанного срока результаты регистрируются только как положительные или отрицательные. Положительная реакция характеризуется образованием плотного геля, который не разрушается при переворачивании пробирки на 180°. При отрицательной реакции такой гель не образуется. [c.311]

Строят график изменения скорости реакции в зависимости от времени. На графике отмечают период времени, в течение которого скорость реакции линейно зависит от времени инкубации. На этом участке выбирают удобное время инкубации, в течение которого измеряется н а ч а л ь н а я скорость аргиназной реакции. Этим временем инкубации пользуются при дальнейших кинетических исследованиях аргиназы. [c.58]

Время инкубации, мин Объем 0,01 моль/л NaOH. пошедшего на титрование, мл [c.147]

Полоски извлекают из аппарата, высушивают в шкафу при 100 С, смачивают 0,1 %-ным раствором нин-гидрина, помещают еще раз в сушильный шкаф на 5 мин. На полоске с опытной пробой наблюдают появление двух пятен, принадлежащих глутаминовой и -аминомасляной кислотам, так как за время инкубации полного декарбоксилирования обычно не наступает (рис. 26). [c.172]

В качестве исходных данных для конструкции реактора послужили условия реакции аминокислот с нингидриновым реагентом и скорость элюирования. Скорость подачи реагента (15 мл/ч) определяется скоростью подачи элюата (30 мл/ч) и соотношением объемов элюата и реагента (2 1). Суммарная скорость потока (45 мл/ч) и время инкубации смеси при 100 °С (15 мин) позволяют рассчитать объем реактора (равный 11,5 мл). Однако при таком объеме реактора неизбежно должно наступить смешивание зон, если использовать трубку слишком большого диаметра. Опытным путем было показано, что перекрывание зон наступает лишь при внутреннем диаметре более 1 мм. Поэтому спираль реактора представляет собой тонкий тефлоновый капилляр с внутренним диаметром 0,7 мм и длиной 30 м. Электрические нагревательные элементы термостата обеспечивают равномерное кипение воды, а конденсация паров осуществляется в обратном воздушном холодильнике. [c.317]

Если концентрация органических веществ в пробе превыщает в расчете на ХПК 1600 мг/л, пробу частично заменяют дистилли-рованной водой и при расчете результата учитывают сделанное разбавление. Вводят раствор жидкого стекла в расчете 100 мг SiOj на 1 л жидкости и приводят в движение мешалку прибора. Через 15—20 мин отбирают пипеткой 5 мл смеси как указано в разд. 5.8.1) для определения начального ХПК и еще по 5 мл в ряд склянок вместимостью 500 мл для проведения инкубации. Склянки плотно закрывают пробками и проводят инкубацию при 20 °С. При такой большой вместимости склянки и содержании в ней всего 5 мл жидкости присутствующего кислорода достаточно на все время инкубации. Через 3 суток определяют ХПК смеси в одной из склянок, через 5 суток — в другой, через 7 суток — в третьей, и т. д. Когда результаты двух последовательных определений практически совпадут, считают ицкубацию законченной и в одной из оставшихся склянок определяют ХПК жидкой фазы, отделив фильтрованием осадок биомассы. Это ХПКк.ж, необходимое для расчета указанного выше показателя Л, характеризующего содержание в пробе органических веществ, биохимически не окисляющихся. [c.89]

Смотреть страницы где упоминается термин Время инкубации: [c.51] [c.54] [c.66] [c.289] [c.290] [c.360] [c.363] [c.373] [c.391] [c.399] [c.402] [c.153] [c.139] [c.258] [c.266] [c.48] [c.56] [c.57] [c.394] [c.81] [c.265] [c.283] [c.208] [c.22]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология