ДНК, выделение протопластов

В жизнеспособности выделенных протопластов большую роль играет физиологическая полноценность исходного растительного материала. Суспензионные культуры наиболее приемлемы для этих целей, будучи в конце логарифмической фазы роста (размножения). [c.516]

Протопласты выделяют из каллусных, суспензионных клеток или из клеток листьев, меристем, стеблей. При выделении протопластов из листьев сначала удаляют эпидермис, лист нарезают на сегменты и затем подвергают энзиматической обработке пектиназой и целлюлозой (рис. 3.20). [c.155]

Мягкая осмотическая обработка применяется также при выделении протопластов и мембранных везикул грамположительных бактерий. Выделенные с ее помощью препараты чрезвычайно полезны при изучении транспорта веществ через бактериальную мембрану. Способы их получения обсуждаются и описываются в следующей главе (разд. 19.3). [c.381]

Эластичность клеточной стенки не влияет на набухание выделенных протопластов, часто используемых в работах по транспорту, и, по-видимому, мало влияет на сферопласты, у которых сохраняются остатки стенок. Если, однако, протопласты заставить набухать медленно, так чтобы их мембраны не разрывались, мембрана может стать упругой и степень набухания нельзя будет предсказать с помощью уравнения Вант-Гоффа — Бойля [27]. [c.462]

В сравнении с механическим методом ферментативное выделение протопластов имеет определенные преимущества , 0 одновременно можно выделить большое количество прото пластов [c.31]

См. приложение 2 [II и V] —растворы для выделения протопластов и культуральные среды.) [c.145]

Раствор ферментов для выделения протопластов, 20 мл, X2. [c.146]

Эта смесь ферментов может быть использована только для выделения мезофильных протопластов табака. Подходящий ферментный коктейль при выделении протопластов из нового типа эксплантата, нового вида растения или даже разновидности каждый раз приходится составлять заново. В целом, изменение для растения условий роста предусматривает и изменение в смеси ферментов, необходимой для хорошего выхода жизнеспособных протопластов, способных к образованию клеточной стенки и делению. [c.147]

Растворы для выделения протопластов табака [c.178]

Выделение протопластов из измельченных кусочков листа [c.179]

Подобные стандартные растворы плазмид приготавливают таким образом, чтобы получить определенное число копий векторной плазмиды по отношению к числу выделенных протопластов (1 мли. ). 4 мкл каждого [c.209]

Материалы для выделения протопластов из мезофилла листа (разд. 2.7) или суспензионной культуры (приложение 3[П). [c.258]

Методы выделения протопластов были успешно разработаны целом ряде лабораторий. [c.165]

Материал для выделения протопластов [c.165]

Для выделения протопластов обычно используют молодое расте-<е, еще не начавшее цветение. Имеют значение также и условия о выращивания интенсивность освещения, фотопериод, влажность температура. Большое число протопластов удается получить из ра- ений, выращенных в стерильных условиях. [c.165]

Томасу (Thomas, 1981) удалось получить культуры побегов тетраплоидного картофеля сорта Maris Bard, которые использовались как исходный материал для выделения протопластов [c.385]

Выделение, культивирование и слияние изолированных протопластов. Для применения методов соматической гибридизации необходима разработка соответствующих технологий получения протопластов, способных делиться и регенерировать растения. Выделение протопластов растительных клеток путем их плазмолизирования и механического разрушения клеточной стенки было осуществлено еще в конце XIX в. Однако метод изолированных протопластов получил развитие лишь после того, как И. К. Коккинг (1960) впервые осуществил ферментативное разрушение клеточной стенки и выделил голые протопласты. [c.154]

Пазушные почки стерилизовали с поверхности раствором гипохлорида натрия и культивировали затем на среде Мурасиге и Скуга (Murashige, Skoog, 1962), содержащей, кроме того, сахарозу (30 г/л), агар (6 г/л) и 6-бензиламинопурин (6-БАП, 0,5 мг/л), pH 5,8. В ходе инкубации при 26°С при освещенности - 400 люкс (16 ч днем, 8 ч ночью) за 3—5 нед образовывались ростки длиной около 3 см. Их можно было использовать для дальнейшего размножения на той же среде, но без 6-БАП, для чего брали короткие (3—8 мм) отрезки стебля с листом и пазушной почкой. Рост продолжался три недели, после чего побеги можно было опять использовать для размножения или же выделения протопластов. Цельные проростки (но не взятые отдельно листья) давали жизнеспособные протопласты, которые могли длительное время делиться в культуре. [c.386]

В первичной клеточной стенке на долю основного структурного компонента — целлюлозы — приходится до 30% от сухой массы и столько же на пектиновые вещества, белки и липиды 40% составляют гемицеллюлозы. В клетках разных типов ткани в зависимости от функциональных особенностей, возраста, наличия вторичных утолщений эти соотношения могут варьировать. Например, в клетках из колеоптилей овса клеточная стенка на 25% состоит из целлюлозы, а в молодых волокнах хлопка она составляет 50% от общей массы клеточной стенки (по D. Evans, J. Bravo, 1983). Поэтому комбинации ферментных препаратов и их соотношение специфичны для каждого типа клеток. Наиболее адекватная составу клеточной стенки комбинация обеспечивает успех выделения протопластов. Так, для получения протопластов из плацентарной ткани плодов пасленовых, которые, как правило, имеют высокое содержание пектина, особенно подходящ ферментный препарат пектиназа. Процедура выделения протопластов из плодов состоит из трех этапов 1) обработка ферментом [c.32]

Оптимальные условия для выделения протопластов очень индивидуальны для разных тканей. В каждом случае необходима предварительная работа по подбору состава ферментов, их концентрации и соотношения, а также временч обработки. Важна продолжительность обработки клетки и ткани ферментами. Выделяющиеся протопласты должны находиться в контакте с ферментом минимальное время и затем тщательно отмыты от них. Стерилизацию раствора ферментов производят через бактериальные фильтры. [c.33]

Пролиферативная способность клеток, возникающих из протопластов. Формирование клеточной стенки осуществляется легче, чем дальнейшая пролиферация клеток. Р. Г. Бутенко (1979—1981) выделяет следующие факторы, которые определяют пролифера-тивную способность клеток, возникших из изолированных протопластов 1. Видовая специфичность и физиологическое состояние исходной ткани растений. 2. Способ и условия выделения протопластов. 3. Плотность высева протопластов. 4. Состав пита- [c.41]

Изолированные протопласты за то короткое время, пока они не образовали клеточной стенки, могут сливаться между собой. Слияние может быть спонтанным. Оно происходит чаще при одноступенчатом способе выделения протопластов и если используются протопласты, изолированные из молодых тканей или суспензионных культур. По мнению Е. Кокинга (1972), спонтанное слияние осуществляется пассивно путем расширения плазмодесм, которыми связаны клетки в растительной ткани. [c.42]

Растительный протопласт — это по существу клетка с удаленной клеточной стенкой. При правильном культивировании протопласты табака, например, будут заново синтезировать клеточную стенку н вступят в митоз. Таким образом, культивирование протопластов — это удобный путь получения популяций, состоящих из отдельных клеток. Процедура выделения протопластов зависит от вида растения и природы исходного материала (например, мезофилл листа, срезы проростков илн культивируемые в суспензии клетки). Протопласты обычно высвобождают из растительных тканей путем расщепления клеточной стенки смесью пектиназ, целлюлаз и гемицеллюлаз, растворенных в среде с высоким осмотическим давлением. Такая среда сдерживает тургор и не дает клеткам лопнуть. [c.143]

Методики выделения протопластов многих видов растений описаны в литературе [26, 32]. На рис. 2.13 представлена общая схема выделения протопластов из растительных тканей. У многих видов культурных растений не определены благоприятные условия для восстановления клеточной стенки и последующего деления выделенных протопластов. В случае других — сообщалось о низкой частоте деления. Отметим, что для трансформации необходимо использовать достаточно жизнеспособные протопласты, чтобы они могли пережить совместное культивирование с агробактериями или физические методы введения ДНК, например микроинъекцию, электропорацию и химически индуцированный эндоцитоз (гл. 3). Напомним, что разработка эффективной системы получения протопластов у ранее неизучен- [c.143]

Удаление нижнего эпидермиса — это трудоемкая и требующая большого мастерства процедура. Награда за терпение заключается в том, что полученные при этом популяции протопластов, как правило, содержат высокий процент жизнеспособных клеток. Описаны альтернативные способы быстрого выделения протопластов, в которых используют мелко нарезанные кусочки листа стерилизованных выращенных в теплице или размножаемых in vitro растений. С одной из таких методик читатель может ознакомиться в приложении 2 [VI]. Популяции протопластов, выделенных быстрыми методами, обычно содержат много мертвых клеток и деб-рис, однако, тем не менее, вполне пригодны для трансформации путем совместного культивирования с агробактериями. [c.147]

Существуют два метода выделения протопластов. Один состоит механическом удалении клеточной стенки в среде, содержащей мотический стабилизатор. В этом случае получается незначитель-эе число протопластов, и в основном источником их служат вакуоли-1рованные клетки паренхимного типа. Этот метод сейчас используйся редко. Другой метод связан с энзиматическим удалением теточной стенки. При правильно подобранных условиях изолиро-1НИЯ и культивирования можно получить большое число прото-тастов, которые длительное время сохраняют жизнеспособность, менно этот метод является общепринятым в настоящее время [2]. [c.165]

Наиболее пригодна для выделения протопластов рыхлая, не дифференцированная ткань, образующая небольшие агрегаты клеток при переводе в жидкую среду. При добавлении ферментов агрегаты легко распадаются на отдельные клетки. Чаще для выделения протопластов применяют суспензионные культуры клеток. Обычно они имеют небольшое число клеток с уплотненными стенками, не разрушающимися при действии целлюлитических ферментов, и их легко удалить фильтрованием. Кроме того, суспензии удобны для разных манипуляций фракционирования клеток, введения изотопов, получения синхронных популяций. [c.166]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология