Ферменты извлечение из тканей

Цитохромоксидаза служит примером фермента, прочно связанного с клеточной структурой. При извлечении ферментов из ткани она остается в нерастворившемся остатке. Кроме того, цитохромоксидаза — фермент, очень чувствительный к нагреванию и действию различных реактивов. Он инактивируется уже при нагревании до -Ь55°С, при высушивании и при действии ацетона и спирта. [c.57]

Из всего сказанного выше ясно, что любая ткань животного или растительного организма может служить материалом для получения ферментов. Однако содержание ферментов в различных тканях далеко не одинаково практически для извлечения ферментов удобнее использовать лишь те ткани и органы, которые богаты данным ферментом. Особенно важное значение при выборе подходящего объекта для получения ферментов имеют данные, характеризующие прочность связи фермента со структурными элементами клетки. Чем прочнее связан фермент с тканью, тем труднее использовать эту ткань как материал для получения ферментов. [c.132]

В зависимости от источника технология получения ферментных препаратов имеет свои особенности. При извлечении ферментов из растительного сырья и животных тканей технология сводится к экстракции энзимов и очистке их от сопутствующих балластных веществ. Технология ферментных препаратов микробного происхождения более сложная, так как дополнительно включает этапы культивирования микроорганизмов — продуцентов ферментов, в том числе этапы получения посевного материала и производственной культуры соответствующего микроорганизма. [c.76]

Познакомимся теперь с важнейшими методами извлечения ферментов из животных и растительных тканей. [c.124]

Первым этапом препаративного выделения ферментов является извлечение их из природных источников, клеток и тканей, а также перевод в растворимое состояние. Для этого в первую очередь необходимо тщательно измельчить исходный материал ( ферментное сырье ) или извлечь фермент иным способом, в частности разрушив клеточные оболочки. Для этой цели применяется ряд методов, но ни один из них не является универсальным, [c.139]

Для извлечения ферментов, находящихся в большей степени в адсорбированном на клеточных структурах состоянии, применяют измельчение тканей в гомогенизаторах и ступках с последующей экстракцией фермента из разрушенных клеток водой, слабыми солевыми растворами, спиртом, глицерином и другими реагентами. [c.134]

Вскоре после убоя животного или извлечения рыбы из воды начинается посмертное окоченение тканей, которое продолжается сутки и более, в зависимости от температуры, активности ферментов, предубойного содержания животных и других факторов. В мышечной ткани под влиянием ферментов происходит ряд изменений в углеводном и белковом комплексах. [c.54]

Методы получения и очистки ферментов. Ферменты получают обычно путем извлечения их из органов и тканей при помощи воды или глицерина. Если же они оказываются нерастворимыми, то материал тонко измельчают и сохраняют в виде сухого порошка. Следовательно, н вытяжки, и порошки содержат большое количество всевозможных примесей. Чтобы освободиться от низкомолекулярных веществ, например солей, аминокислот, сахаров, вытяжки подвергают диализу. Кроме того, в настоящее время используют фракционированное высаливание, адсорбцию с последующей элюцией, ультрацентрифугирование, электрофорез, а также хроматографическую абсорбцию. [c.339]

Молекула жира состоит из трех остатков жирных кислот, присоединенных эфирными связями к молекуле глицерола. Такие триацилглицеролы (триглицериды) неполярны и практически нерастворимы в воде - в цитозоле они образуют жировые капельки (рис. 7-9). В адипоцитах — клетках жировой ткани - одна большая капля жира занимает почти весь клеточный объем крупные жировые клетки специализированы для хранения жира. Мелкие жировые капельки обычны для таких клеток, как волокна сердечной мышцы, использующие энергию расщепления жирных кислот жировые капли в этих клетках часто бывают тесно связаны с митохондриями (рис. 7-Ю). Во всех клетках ферменты наружной и внутренней мембран митохондрий участвуют в переносе жирных кислот, извлеченных из молекул жира, в митохондриальный матрикс. В матриксе каждая молекула жирной кислоты (в виде ацил-СоА) полностью расщепляется в цикле реакций, за каждый оборот которого она укорачивается с карбоксильного конца на два атома углерода и образуется одна молекула ацетил-СоА (рис. 7-11). Дальнейшее окисление ацетил-СоА происходит в цикле лимонной кислоты. [c.435]

Вышеописанные операции обычно не приводят к цели, когда из тканей хотят извлечь ферменты, прочно связанные со структурными элементами клетки. В этих случаях извлечение ферментов из тканей может быть достигнуто лишь в результате разрушения клеточных структур. Последнее достигается растиранием ткани с кварцевым песком (метод, предложенный Манассеиной) или в специальных приборах — гомогенизаторах, применением прессования под большим давлением (метод Бухнера, предложенный им для получения дрожжевой зимазы), аутолиза ткани (самопереваривания), мацерации (метод Лебедева) и др. [c.126]

Извлечение ферментов из тканей является важным этапом работы и с него начинают при очистке ферментов от сопутствующих (балластных) веществ. При дальнейшей работе для удаления сопутствующих веществ прибегают к различным приемам. Низкомолекулярные вещества могут быть удалемы из экстрактов путем диализа. Этот прием пригоден для всех однокомпонентных ферментов и для тех двухкомпонентных ферментов, у которых оба составляющих (белковый и небелковый) крепко связаны друг с другом и не расчленяются при диализе. [c.176]

В масле полностью созревших семян свободные жирные кислоты отсутствуют, но в процессе извлечения его из сырья и хранении они образуются вследствие гидролиза. При хранении жиров скорость гидролитического распада увеличивается под воздействием фермента липазы, содержащегося в жирах или вырабатываемого некоторыми микроорганизмами. Животные и растительные ткани всегда содержат в большем или меньшем количестве этот жирорасщепляющий фермент. При получении масел и жиров, особенно при их плохой первичной очистке, в жиры часто попадают тканевые элементы, содержащие липазу. Поэтому плохо профильтрованные влажные жиры могут при хранении расщепляться, в результате чего кислотное число их увеличивается. Это особенно заметно при хранении нерафинированного влажного касторового масла. В очень влажном жире могут развиваться плесени и дрожжи, которые вырабатывают два фермента липазу и липоксидазу. Липаза гидролизует жиры, а липоксидаза окисляет жирные кислоты и глицериды. При повышенной влажности активность ферментов не прекращается даже при температуре ниже 0°С. Липаза легко разрушается при нагревании жира до 80°С. [c.100]

B более ранних работах я показал, что восстановление нитратов и красителей в тканях животного организма обусловливается одновременным действием фермента и кофермента, не оказывающих в отдельности никакого действия. В свежем молоке этот фермент существует без кофермента и вызывает совместно с коферментом, извлеченным из тканей или с альдегидами, такие же восстановительные реакции, как и в тканях. Кофермент может быть извлечен из тканей кипящей водой. Он находится также и в продажных пептонах и в белках, расщепленных до аминокислот. Последние исполняют роль кофермента только постольку, поскольку из них образуются альдегиды по реакции, аналогичной открытой в 1862 г. Штре-кером (действие аллоксана на аминокислоты) [c.513]

Меллет и Вудс [166] не могли достаточно полно выделить введенный тиоТЭФ пз тканей, даже если эти ткани быстро замораживали и подвергали анализу. Добавление к системе ряда ингибиторов ферментов не улучшало извлечения, н эти авторы пришли к выводу, что тиоТЭФ реагирует химически и почти мгновенно с веществами внутри клеток. [c.171]

Оптимальной, на наш взгляд, схемой получения устойчивых к Са + дифференцированных клеток сердца является разработка Нага и соавторов [19], учитывающая преимущества более ранних методик. Извлеченное сердце гепаринизированной перед забоем (1000 ед гепарина на 1 кг массы) крысы (200—300 г) помещают в 10 мл охлажденного до О °С бескальциевого физиологического раствора Кребса—Рингера (РКР) на фосфатном буфере, pH 7.4, содержащем 5 10 М глюкозы и 1 % бычьего сывороточного альбумина. Перфузионный аппарат наполняют 50 мл бескальциевого РКР, предварительно оксигенированного продуванием смесью 95 % Ог и 5 % СО2. Через аорту (извлекая сердце, сохраняют ее участок длиной около 5 мм) вводят канюлю и промывают сердце РКР в течение 15 мин при 37 °С (на эту процедуру обычно расходуется около 25 мл физиологического раствора) при этом сердце часто сохраняет.сократительную активность. Перфузию продолжают оксигенированным РКР, содержащим 0.1 % коллагеназы, 0.1 % гиалуронидазы и 1 % бычьего сывороточного альбумина (к этому времени сокращения миокарда прекращаются). После окончания перфузии размягченную и потерявшую упругость ткань разрезают на 4 кусочка, удалив предсердия и крупные сосуды, затем повторно по 10— 15 мин до 3—4 раз инкубируют в растворе ферментов в РКР, отделяя клетки легким встряхиванием. Полученные фракции объединяют и отмывают центрифугированием (3—5 мин при 37 °С, 800 об/мин) на настольной центрифуге. Сходная методика получения изолированных клеток для культивирования описана Клэйкомом и Лэнсо-ном [14]. [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология