Конъюгат с бычьим сывороточным альбумином

Этим же методом удалось получать конъюгаты с бычьим сывороточным альбумином, яичным альбумином и ГЛТ (сополимер L-Glu L-Lys L-Tyr, 62 34 4). [c.158]

Смит II соавторы с помощью аффинной хроматографии очищали рецептор прогестерона человека. Содержание рецептора в матке составляет лишь 0,002% суммарного белка, и оп весьма лабилен. В качестве лиганда использовали 11-дезоксикортикостерон. Гормон сажали на Br N-активнрованную сефарозу 41 в виде конъюгата с бычьим сывороточным альбумином. Полученный таким образом аффинный сорбент инкубировали 18 ч с частично очищенным цитозолем матки, промывали 0,4 М КС1 и элюировали мкМ раствором меченного тритием прогестерона. Рецептор выходил в комплексе с гормоном. Операция обеспечивала очистку в 10 ООО раз. Вместе с предварительной 6-кратной очисткой цитозоля осаждением сульфатом аммония это позволило авторам получить гомогенный препарат рецептора [Smith et al., 1981). [c.434]

Методика проведения ИФА в лунках планшета. Первый этап ИФА — сорбция соответствующего разведения АТ или АГ (в концентрации 10 — 20 мкг/мл) в карбонатно-бикарбонатном буфере (в объеме 0,1 мл) на твердую фазу в течение 1 - 2 ч при 37 °С и 10 — 12 ч при 4 °С (сенсибилизация). Затем отмывают лунки (для удаления несорбированного на носителе АТ или АГ) водопроводной водой, отмывочным буфером с 0,05 % твина-20 в течение 5 мин (два раза) при комнатной температуре. После этого вносят в каждую лунку (твердую фазу) по 0,1 мл 1%-го раствора БСА (бычьего сывороточного альбумина) на КББ и инкубируют в течение I ч при 37 °С для закрытия участков поверхности лунок, оставшихся свободными после сенсибилизации. Лунку отмывают от несвязанного БСА и вносят исследуемый материал (АГ или АТ) по 0,1 мл в разведениях на фосфатно-солевом растворе (pH 7,2) с 0,05 % твина-20. Каждое разведение материала вводят в две лунки и помещают в термостат на 1 — 3 ч при 37 °С. Отмывают непрореагировавшие в иммунной реакции АГ или АТ и вносят по 0,1 мл коньюгированных АТ против исследуемого АГ или АТ в рабочем разведении на фосфатно-солевом растворе с 0,05 % твина-20. Затем их инкубируют в течение 2 ч при 37 °С. Несвязанный конъюгат трижды отмывают буфером. [c.79]

Изучение реакции Ы-замещенной изомочевины, конъюгированной сефарозой, с аминами и бычьим сывороточным альбумином [93] помогло понять расхождение между опубликованными данными о стабильности конъюгатов. Соединения, содержащие нуклеофилы, например амины или белки, расщепляют связи изомочевины согласно приведенной выше схеме. Если расщепление связей наблюдается в отсутствие таких соединений, то это происходит, вероятнее всего, благодаря освобождению адсорбированных молекул аффинного лиганда, которые были плохо отмыты. Количество освобождающегося лиганда в результате очень медленного гидролиза изомочевины обычно очень мало и не мешает нормальному процессу аффинной хрохматографии. Как показано в разд. 8.5, отщепление аффинного лиганда от специфического сорбента существенно главным образом в системах с высоким сродством или при выделении небольших количеств вещества. Шнапп и Шалитин [65] предотвращали отщепление аффинных лигандов под действием нуклеофилов после присоединения к сефарозе, активированной бромцианом, путем замены связи изомочевины более устойчивой связью гуанидина, для чего бромцианом активировали носитель, содержащий аминогруппы. [c.189]

Т и В из селезенки мыши Антигены (конъюгаты гаитен — бычий сывороточный альбумин, гемо-циан1ш подковообразного краба или конканавалин А) Найлоновые волокна 985 [c.293]

Мышей иммунизировали конъюгатом N1P-OA (N1P — гаптен 4-гидрокси-З-йод-5-нитрофенилуксусная кислота, ОА — овальбумин кур, использованный как носитель для гаптена). При переносе клеток селезенки примированных мышей в организм сингенного облученного хозяина развивается анти-КЧР-ответ только при использовании гомологичного антигена (NIP-овальбумина). Прсдукиия антител к NIP отсутствует, если в качестве носителя использован гетерологичный белок (бычий сывороточный альбумин — BSA, сывороточный альбумин человека — HSA). При введении интактным мышам клеток селезенки от мышей, примированных к NIP-OA и BSA, ответ развивается как к NIP-OA, так и к NiP-BSA. Р.сли из клеток селезенки мышей, иммунизированных BSA, удалить Т-клетки, то оставшаяся популяция В-клеток не способна отвечать на NIP-BSA, хотя реактивность к NIP-OA сохраняется. Сделан вывод о том, что Т-клетки реагируют на носитель, в то же время В-клетки отвечают на гаптен [c.245]

В процессе иммунизации у животных отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов (белков, полисахаридов и т. д.) достигается через 40—60 дней после первой инъекции. В том случае, когда иммуногеном являются клетки микроорганизмов, максимально высокий уровень антител наблюдается гораздо раньше (через 12—20 дней). После окончания первого цикла иммунизации животному в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию (2-й цикл иммунизации), включающую 1—3 внутривенные инъекции. Ниже приводятся схемы иммунизации морских свинок и кроликов инсулином и конъюгатом тироксин — бычий сывороточный альбумин (ВСА). [c.152]

Для того чтобы гаптен обладал иммуноген-ными свойствами, необходимо получить конъюгат гаптена с высокомолекулярным носителем. В качестве носителей обычно используют бычий сывороточный альбумин (БСА), альбумин сыворотки человека, овальбумин, тироглобулин и синтетические пептиды типа полилизина. Особых преимуществ у какого-либо носителя не отмечено и поэтому чаще всего им является наиболее доступный белок — БСА. Для хороших иммуногенных свойств конъюгата важно число молекул гаптена, конъюгированных с носителем. Показано, что слишком малое и слишком большое количество молекул гаптена, пришитых к носителю, ухудшает иммуногенные свойства. Для конъюгирования с БСА, по-видимому, наиболее оптимально вводить 10—20 молекул гаптена на молекулу носителя. [c.177]

В белки, содержащие свободные аминогруппы, метку вводят до простой одностадийной методике с помощью N-гидрокси кци-нимидного эфира VIII, Раствор последнего в 1,4-диоксане добавляют при осторожном перемешивании при комнатной температуре к раствору белка (1-20 мг/мл) в 0,1 М боратном буферном растворе (pH 8,5). С тем же успехом можно использовать и другие органические растворители, смешивающиеся с водой. При синтезе меченых антител конечная концентрация 1,4-диоксана должна быть ниже 5% по объему. В бычий сывороточный альбумин (БСА) можно ввести более 30 остатков ТХЛ-метки, если проводить реакцию в 33%-ном 1,4-диоксане. При этом конъюгат ТХЛ-БСА сохраняет способность растворяться в воде. [c.193]

Исходное лекарственное вещество и деметилнрованные метаболиты дают примерно одинаковый сигнал. Этот результат был достигнут при использовании антисыворотки барана, которого иммунизировали дезипрамином, соединенным Ы-карбокси-пропильной связью с белком-носителем — бычьим сывороточным альбумином. Наружу в этом конъюгате обращена циклическая структура, поэтому реакция вырабатываемой антисыворотки малочувствительна к заместителям в боковой цепи (рис. 3-4). [c.42]

Определение морфия. Индикаторную полоску, содержащую антитела против морфия (10 мкг/см ) и глюкозооксидазу (4 мМЕ/см ), погружают в 2 мл образца (буферного раствора или мочи) и инкубируют 1 мин. Переносят полоску в 2 мл проявителя (содержащего в 1 л 0,1 моль фосфата натрия 0,2 моль хлорида натрия 2 г бычьего сывороточного альбумина, 300 мг 4-хлорнафтола 50 ммоль глюкозы 0,25 г тритона QS-44 300 мг конъюгата пероксидазы с морфием), встряхивают 3—5 с и выдерживают 1() мин. Вынимают полоску, промокают ее для удаления остатков жидкости и измеряют интенсивность окраски с помощью отражательного спектрофотометра марки Ma beth . Следует отметить, что анализ по существу не зависит от объема образца или проявителя важно только, чтобы они полностью покрывали поверхность полоски. Все стадии анализа проводят при комнатной температуре. [c.134]

Ультразвуковой анализ хориогонадотропина человека. Смешивают 1 мл образца (мочи или буферного раствора) со 100 мкл реагента, приготовленного на 0,05 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,2, и содержащего в 1 л 0,1 моль хлорида натрия 0,25 г тритона QS-44 2,5 мг конъюгата антител с пероксидазой. Погружают в эту смесь индикаторную бумагу, воздействуют ультразвуком в течение 5 мин, переносят бумагу в проявитель (приготовленный на 0,05 М натрий-фосфатном буфере, pH 6,5,- и содержащий в 1 л 0,1 моль хлорида натрия 2 г бычьего сывороточного альбумина 300 мг 4-хлорнафтола 0,25 г тритона QS-44), инкубируют 10 мин при комнатной температуре и измеряют отражательную способность, как указано выше. [c.134]

Ферментативный иммунохроматографический метод. Добавляют 10—20 мкг образца (буферного раствора, сыворотки или цельной крови) к 1 мл ферментного реагента (приготовленного на 0,1 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0 и содержащего 0,2 моль хлорида натрия 0,2—1,0 мг конъюгата [теофиллин — пероксидаза] 100 мг глюкозооксидазы 2 г неиммунных IgG барана). В полученную смесь погружают край индикаторной полоски (4x90 мм), содержащей иммобилизованные антитела против теофиллина ( 30 мкг/см ),и дают растворителю подняться за счет капиллярных сил до противоположного края полоски (на это уходит 10 мин). Переносят полоску в проявитель (приготовленный на 0,01 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0, и содержащий в 1 л 0,02 моль хлорида натрия 0,5 г тритона QS-44 400 мг 4-хлорнафтола 0,05 моль глюкозы 2 г бычьего сывороточного альбумина). Через 5 мин на бумаге появляется голубая окрашенная область в форме ровной полосы или ракеты. Высота окрашенной области пропорциональна концентрации определяемого вещества. Для количественного анализа предварительно строят калибровочную кривую, отражающую зависимость высоты окрашенного фронта от концентрации теофиллина. [c.135]

Для создания цеоаенаправленного действующего дауномицина этот антибиотик был присоединен разными методами к антителам против бычьего сывороточного альбумина (модель) или к опухоль-специфическим антителам [147, 169]. Карбодиимидный метод и метод с глутаровым диальдегидом оказались неудачными из-за сшивания молекул антител друг с другом. Конъюгаты были лишены как противоопухолевой, так и иммунологической активности. Периодатное окисление углеводной насти антибиотика и восстановительное алкилирование антител образовавшимся диальдегидом привели к получению стабильного конъюгата, который содержал 2—5 моль антибиотика на моль белка. Производные дауномицина в основном сохраняли как противоопухолевое, так и иммунологическое действие, причем чем меньше было связано антибиотика, тем выше была его активность. Селективность токсичности по отношению к клеткам, к которым были специфичны антитела, оказалась невелика, а содержание антибиотика недостаточно для исследований in vivo. Антитела как носители противоопухолевых ФАВ имеют низкую емкость, так как увеличение степени замещения белка приводит к потере антителами специфичности [170]. Поэтому обычно используют промежуточный носитель, который объединяет в единое целое обе части ФАП — противоопухолевое ФАВ и антитело или другой целенаправляющий вектор . [c.127]

Состояние толерантности к доминантному аллергену отменяет его подавляющее влияние на другие антигены. Еще в 1969 г. S hwartz и Leskowitz показали это на модели кожных реакций замедленного типа к детерминанте Арс. Доминантными антигенами в их опытах служили бычий сывороточный гамма-глобулин или альбумин, вводимый в смеси с конъюгатом тирозина с азобензол-мышьяковистым ацетилом. [c.54]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология