Ультрацентрифугирование солевые растворы

Обычное ультрацентрифугирование. Частицы седиментируют в чистом растворителе или достаточно разбавленных солевых растворах. Плотность растворителя или солевого раствора практически одинакова во всей кювете (рис. 8.19, а). Наиболее быстро движущиеся частицы собираются на дне, однако они всегда загрязнены примесями более медленно осаждающихся частиц. Молекулы, которые движутся медленнее, количественно отделить не удается. [c.129]

ВЫХ оснований или нуклеотидов, полученных после расщепления полимера (подробнее — см. стр. 58). С нуклеотидным составом ДНК однозначно связаны два физических свойства двухцепочечных комплексов, которые часто используются для характеристики полученных препаратов 2 . 2в Одно из них — так называемая температура плавления Гщ — это температура, при которой происходит распад двухцепочечного комплекса на одноцепочечные молекулы этот процесс легко наблюдать по изменению УФ-поглощения или оптического вращения раствора (подробнее см. в гл. 4). Другая характерная константа ДНК — плавучая плотность р — может быть определена из результатов равновесного ультрацентрифугирования Такое центрифугирование проводят обычно в растворах солей, обладающих высокой плотностью чаще всего применяют хлорид или сульфат цезия. При длительном центрифугировании устанавливается градиент плотности раствора, а ДНК собирается в узкой зоне, где существует равновесие между центробежной силой и выталкивающей силой, которая определяется разностью плотности осаждаемого вещества и применяемого солевого раствора в данной зоне. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности Сз С1 может служить не только аналитическим методом для характеристики препарата ДНК, но и полезным препаративным методом для разделения ДНК, различающихся по нуклеотидному составу. Подобным же образом препаративное ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы используется для разделения молекул ДНК, различающихся по скорости седиментации. [c.31]

В концентрированном растворе низкомолекулярного вещества, в частности в солевом растворе, при длительном ультрацентрифугировании устанавливается градиент концентрации, или, что то же самое, градиент плотности ёроМх. Если поместить в такой раствор, служащий здесь растворителем, макромолекулы, то в силу пропорциональности 5 и (1 — 1 ро), где ро — по-прежнему плотность растворителя, они будут располагаться в той части кюветы, в которой 5 = О, т. е. Рро = 1, или ро = рм- Иными словами, макромолекулы локализуются в той области кюветы, где плотность концентрированного солевого раствора совпадает с плотностью макромолекул и, значит, плотность рм можно измерить непосредственно. Гетерогенная смесь макромолекул [c.153]

Необходимо указать, что при калибровке аппаратуры раствором типа людокс должны быть соблюдены следующие условия 1) тщательная очистка раствора ультрацентрифугированием 2) введение поправки на эффект разбавления [48, 53], например изменение интенсивности падающего и рассеянного пучков относительно длины пробега пучка путем определения мутности при различных концентрациях и экстраполяции соотношения г/ до к нулевой концентрации [48] 3) введение поправки на вторичное рассеяние. Для того чтобы получить воспроизводимые результаты, разбавление (когда это необходимо) надо производить солевыми растворами, а не водой [55]. [c.391]

Именно поэтому с конца 1963 г. О. 11. Самарина в нашей только что созданной лаборатории Института молекулярной биологии АН СССР развернула исследования по выяснению вопроса, в какой форме дРНК, или гяРНК (гетерогенная ядерная РНК), присутствует в ядре. О. П. Самарина имела шансы на успех, поскольку еще в нашей совместной работе 1960 г. из ядер с помощью экстракции разбавленными солевыми растворами с последующим дифференциальным ультрацентрифугированием были извлечены частицы, активно включавшие in vivo метку в РНК-Эти частицы содержали РНК, по нуклеотидному составу промежуточную между рРНК и ДНК, т. е. они явно содержали и гяРНК. [c.195]

Чтобы преодолеть эту трудность, необходимо создать градиент плотности. Это можно осуществить и в умеренно разбавленных солевых растворах, применяемых в аналитическом ультрацентрифугировании, если исследуемый материал первоначально находится в более разбавленном растворе. Когда слой с исследуемым материалом нанесен на поверхность основного объема растворителя, из-за быстрой диффузии малых молекул образуется пологий градиент плотности (рис. 11.16, Б). Перепад плотности от мениска до дна ячейки может составлять всего так что это почти не влияет на скорости седиментации. При центрифугировании градиент остается стабильным (и даже увеличивается), поскольку молекулы соли имеют ббльшую, чем у воды, плотность. Большие силы в ультрацентрифуге могут влиять даже на небольшие ионы. Однако градиенты в разбавленных солевых растворах недостаточно стабильны вне центрифуги. Бели вы захотели бы извлечь очищенный материал соответствующей зоны, вам пришлось бы отсасывать его, пока ротор еще крутится. Это возможно, но в большинстве случаев существует более простое решение. [c.250]

Долгое время для определения нуклеотидного состава ДНК и РНК использовали разделение нуклеотидов, нуклеозидов или свободных азотистых оснований, полученных в результате деструкции исследуемых нуклеиновых кислот, при помощи хроматографических методов с последующим спектрофотометрическим анализом природы и содержания каждого из оснований. Однако в последнее время классические методы анализа нуклеотидного состава нуклеиновых кислот заменены физическими методами. Так, содержание ТЦ-пар в составе ДНК сейчас находят по температуре плавления ДНК и по ее плавучей плотности. В первом случае содержание ГЦ-пар связано с температурой плавления ДНК следующей зависимостью ГЦ (мол. %) = ( пл—69,3)-2,44. Эта зависимость справедлива, если ДНК растворена в стандартном солевом растворе (0,15 моль КаС1 и 0,015 моль цитрата натрия в 1 л, pH 7,0). Во втором случае содержание ГЦ-пар прямо пропорционально значению плавучей плотности ДНК, определяемой при ее ультрацентрифугировании в градиенте плотности С8С1. [c.202]

ЗЕИН — белок группы проламинов, содержится в зернах кукурузы (3—7%). 3. нерастворим в воде и водных солевых р-рах, хорошо растворим в спирте. Нри электрофорезе и ультрацентрифугировании 3. ра.зделяется на несколько фракций. Иэоэлектриче-ская, точка 3. находится при pH 6,2, коэфф. седиментации 1,9 S (единиц Сведоерга), мол, в. ок. 50 000. Ориентировочный химич, состав гидролизатов 3. (в %) общий азот 16,2 аммиак 3,0 аланин 11,5 серин 7,8 треонин 3,0 валин 3,0 лейцин 24,0 изо- [c.52]