Азотистая кислота, определение свободных аминогрупп

Реакция с азотистой кислотой. Дезаминирование белков азотистой кислотой (метод Ван-Слайка) является одним из наиболее удобных приемов определения количества свободных аминогрупп в белках или степени замещения этих групп в их модифицированных производных. Дезаминирование белков проводят в 0,5 М ацетатном буфере (pH 4) при температуре 0° раствором 1 М азотистокислого натрия в течение различных промежутков времени. В этих условиях легче всего реагируют концевые -аминогруппы белка, значительно медленнее — е-аминогруппы и совсем медленно — гуанидиновые группы. [c.71]

Классическим методом определения освобождающихся во время гидролиза свободных аминогрупп является метод Ван-Слайка [18]. Этот метод основан на способности свободных аминогрупп реагировать с азотистой кислотой с образованием газообразного азота по следующему уравнению [c.26]

Из реакций а-аминокислот, которые протекают только по аминогруппе, следует в первую очередь остановиться на взаимодействии их с азотистой кислотой. Свободные аминокислоты, как и первичные алифатические амины (см. разд. 7.2), реагируют с азотистой кислотой с выделением азота. При этом аминогруппа заменяется на гидроксильную. Измерение количества выделяющегося при этом азота используют для количественного определения аминокислот. [c.458]

Поскольку при воздействии азотистой кислоты свободные аминогруппы образуют гидроксилы, эта реакция также была использована для определения свободных л-аминогрупп в белках и белковых гидролизатах [32]. Этим методом было обнаружено, что ни глутаминовая кислота, ни глутамин, входящие в состав белков, не обладают свободными аминогруппами [33]. [c.126]

Сущность метода. Определение первичных ароматических аминов в сырых легких пиридиновых основаниях заключается в проведении реакции превращения аминогруппы в диазосоединение при действии нитритом натрия в соляной кислоте. Экв ивалентная точка фиксируется по скачку потенциала индикаторного вольфрамового электрода в момент изменения качественного состава титруемого раствора при появлении свободной азотистой кислоты в конце реакции диазотирования, протекающей по уравнению [c.67]

Реакция дезаминирования азотистой кислотой лежит в основе общеизвестного метода определения аминогрупп по Ван-Сляйку он описан выше. Если соответствующим образом учитывать ограничения этого стандартного метода и тщательно контролировать условия реакции, то он окажется наиболее удобным способом определения количества свободных аминогрупп в белках. Легче всего реагируют концевые, а-аминогруппы, несколько медленнее—е. -аминогруппы и уже весьма постепенно выделяют азот гуанидинные группы. Тот факт, что количество свободных аминогрупп, определенных по методу Ван-Сляйка, превосходит содержание лизина, рассчитанное на основании аналитических данных, является первым доказательством наличия М-концевых групп в белках. Реакция с азотистой кислотой протекает быстро и количественно она нашла широкое применение для определения степени замещения аминогрупп в модифицированных белках. В последнее время предпочтение стали отдавать нингидринному методу. [c.313]

Газометрическое определение основано на реакции первичной аминогруппы аминокислот с азотистой кислотой и выделении при этом свободного азота согласно реакции [c.185]

Бремнер [7] изучил реакцию взаимодействия лигнина с азотистой кислотой, чтобы установить, сколько азота в почвенных гуминовых кислотах встречается в виде свободных аминогрупп. Многие считают, что лигнин входит в гуминовую фракцию органического вещества почвы (см. Флэг [13]). Кроме того, он исследовал поведение азота в лигнинных продуктах реакции при определении аминогрупп по Ван-Слайку. [c.355]

При изучении кристаллической структуры пуринов и пиримидинов пришли к выводу, что цитозип и гуанин должны образовывать три водородные связи, причем третья водородная связь связывает 2-аминогруппу гуанина с 2-кетогруппой цитозина [250]. Это подтверждается в известной степени большей стабильностью водородных связей между гуанином и цитозином по сравнению со связями между аденином и тимином, но изучение реакции азотистой кислоты с нативной и денатурированной ДНК с последующим гидролизом получепиых продуктов до свободных оснований приводит к иному выводу [251 [. По сравнению с полимером, депатури-рованным нагреванием, в нативной ДНК из зобной железы наблюдалось ингибирование реакции 6-аминогрупп цитозина и аденина с азотистой кислотой, что, по-видимому, является результатом наличия водородных связей (хотя определенное значение могут иметь и стереохимические факторы) в то же время в случае аминогруппы гуанина подобного эффекта не наблюдалось. Результаты титрования ДНК также позволяют предположить, что аминогруппа аденина не участвует в образовании водородной связи, но и это доказательство не является убедительным [197, 202]. Осцилло-графическая полярография высокополимерной ДНК указывает на то, что 2-аминогруппа гуанина, а не цитозиновый остаток, участвует в реакции [252]. Однако в апуриновой кислоте цитозин дает осциллополярографическую волну. [c.579]

Реакция с азотистой кислотой. Эта реакция положена в основу проверенного временем метода Бан-Слейка для определения свободных первичных аминогрупп [c.317]

Из организмов человека и млекопитающих животных выделяется в виде конечного продукта обмена белков и других азотистых веществ мочевииа. Данные о механизме образования мочевины изложены на стр. 413, здесь же укажем, что в синтезе мочевины участвуют глютаминовая и аспарагиновая кислоты. Один из двух атомов азота, входящих в состав молекулы мочевины — С0(ЫНа)2, доставляется аспарагиновой кислотой, которая в свою очередь образуется путем перенесения аминогруппы от глютаминовой кислоты на щавелевоуксусную кислоту. При синтезе мочевины аминогруппа аспарагиновой кислоты используется без промежуточного выделения аммиака. Это обстоятельство дает основание предполагать, что при синтезе мочевины в определенном объеме (до бО/о) используется не свободный аммиак, а аминогруппа глютаминовой кислоты. В этом процессе снова проявляется значение реакций переаминирования аминокислот. [c.355]