Пептиды состав гидролизата

Из триптического гидролизата альдолазы были выделены пептиды, содержащие остатки цистеина. Аминокислотный состав и частичная последовательность пептидов В, Ыц и N12 приведены ниже. Пептид В, возможно, идентичен пептиду триптического гидролизата, содержащему остаток лизина, который участвует в образовании шиффова основания с диоксиацетонфосфатом [10]. Следует отметить, что остаток цистеина, который находится в непосредственной близости к активному остатку лизина, может быть блокирован без потери ферментативной активности. Пептид Ыц, [c.369]

Разделение ДНС-аминокислот. Разделение проводят на пластинках размером 6x6 см, которые предварительно активируют в термостате при 120°С в течение 30 мин. Анализируемые образцы наносят тонким капилляром в угол пластинки на расстоянии 1 см от ее краев. Диаметр наносимых пятен не должен превышать 0,3—0,5 мм. Объем проб — около 0,5 мкл. На первую пластинку наносят 4-часовой гидролизат, на вторую — 16-часовой, на третью пластинку — смесь ДНС-аминокислот- свидетелей . Обычно берут стандартные растворы ДНС-производных тех аминокислот, которые входят в состав данного пептида. Пластинки помещают в камеру и проводят разделение вос- [c.151]

ДНФ-фр акцию, полученную из смесей с известным количеством белка или пептида, хроматографируют вместе с определенным количеством контрольных ДНФ-аминокислот, после чего ДНФ-аминокислоты элюируют из бумаги и определяют их содержание фотометрически по калибровочной кривой, построенной для ДНФ-аминокислот. Таким способом можно определить концевые группы белков и пептидов, число полипептидных цепей белков, минимальный молекулярный вес белков и аминокислотный состав белковых гидролизатов. [c.272]

Для установления строения пептида прежде всего определяют его аминокислотный состав. С этой целью пептид расщепляют на составляющие аминокислоты (как правило, путем кислотного гидролиза) и гидролизат анализируют методом бумажной хроматографии, электрофореза или ионообменной хроматографии. Для точного анализа этими методами требуются весьма малые количества пептидов (порядка десятых долей миллиграмма). [c.811]

Вопрос 12.6. В пептидном гидролизате обнаружены четыре аминокислоты в соотношении Gly Ala Phe Ser=2 1 1 3 молекулярная масса пептида около 1500. Каков аминокислотный состав этого пептида [c.268]

Электрофоретическое разделение НЬА и НЬ8 по методу подвижной границы показывает, что разница между зарядами этих молекул составляет один элементарный заряд на половину молекулы. Вполне возможно, что эта разница обусловлена заменой всего лишь одной аминокислоты в а- или р-цепи. Для того чтобы дать точный ответ, нужно было бы иметь данные полного анализа аминокислотной последовательности в обеих цепях. Однако установить участок, в котором два вида молекул гемоглобина различаются по аминокислотному составу, можно и без полного определения последовательности аминокислот. Протео-литический фермент трипсин гидролизует пептидные связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы остатков лизина и аргинина. И лизин, и аргинин имеют сравнительно длинные неразветвленные боковые цепи с положительным зарядом на конце. В каждой половине молекулы гемоглобина на 287 аминокислотных остатков приходится около 26 остатков лизина и аргинина. Таким образом, трипсиновый гидролизат половины молекулы гемоглобина должен содержать около 28 пептидов (поскольку в каждой половине имеются две различные цепочки), каждый из которых содержит в среднем немногим больше 10 остатков. В действительности при таком гидролизе отщепляется устойчивое ядро , содержащее около четверти аминокислотного состава половины молекулы. Анализ состава этого ядра , отделенного центрифугированием от прочих пептидов, показывает, что в НЬА и в НЬЗ оно имеет одинаковый аминокислотный состав и, вероятно, одинаковую последовательность аминокислотных остатков. [c.223]

Комбинируя 20 природных аминокислот любыми возможными способами, теоретически можно, получить 20 пептидов, содержащих п остатков, например 400 дипептидов, 8000 трипептидов и т. д. Конечно, Же вое теоретически возможные сочетания встречаются >а практике, так как открытая цепь из N остатков может дать только (N — п- - 1) пептидов с п остатками например, для цепи из 100 остатков могут быть получены 99 дипептидов, 98 трипептидов и т. д. Таким образом, общее число различных веществ (исходный белок, пептиды, аминокислоты), -которые могут находиться в гидролизате, равно (N/2) (N- 1), причем это количество является максимальным, поскольку здесь е принимается во внимание тот факт, что отдельные продукты распада могут быть одинаковыми. Возможность образования одинаковых молекул тем больше, чем короче пептиды. Сложность состава гидролизата [329] очень быстро возрастает от единицы (исходный белок) в начале гидролиза до большой величины, а затем прогрессивно убывает до 20 (20 природных аминокислот). Таким образом, при неспецифическом гидролизе имеются две веские причины стремиться к получению небольших пептидов 1) такие пептиды легче идентифицировать и 2) состав смеси менее сложен. [c.177]

Помимо ионов тяжелых металлов в состав сред могут входить и другие ингибиторы биосинтеза лимонной кислоты - это уксусная кислота и некоторые пептиды в мелассе, сульфит, фурфурол, уксусная и муравьиная кислоты в гидролизатах древесины [30]. Концентрация углеводов в среде должна составлять 10—20%. - [c.340]

Реагенты, подобные кф1цертрированным кислотам, которые неизбирательно атакуют все пептидные связи, имеют лишь ограниченное значение для расщепления полипептидов с длинной цепью, так как- состав гидролизата по мере удлинения цепи значительно усложняется. Общие вопросы гидролиза полипептидов подробно рассмотрены в обзоре Сэнджера [266]. Следует отметить, что до начала работы по разделению полученной в результате гидролиза смеси пептидов и аминокислот необходимо, чтобы продолжительность гидролиза исследуемого белка или полипептида была оптимальной. [c.177]

Гидролиз белков кислотами в более мягких условиях, чем это необходимо для полного гидролиза до аминокислот, широко используется в белковой химии как ценный метод фрагментации пептидных цепей. Основная задача при применении этого метода состоит в выборе условий, позволяющих получить возможно менее сложную смесь пептидов. К сожалению, математические подходы к решению вопроса слишком сложны как отметил Сэнджер, в ходе кислотного гидролиза, за исключением момента приближения его к концу, нет такой фазы, когда состав гидролизата не был бы сложным. [c.117]

Эти выражения, если бы их можно было применить к гидролизу бечка как в. приведенной выше, так и в дифференциальной форме, были бы в высшей степени полезными, поскольку они дают возможность знать общий состав гидролизата в каждый данный момент и, следовательно, заканчивать гидролиз в наиболее благоприятной точке. К сожалению, строение белковых молекул не соответствует большинству предположений, на которых основаны эти выводы. В частности, аминокислотные остатки вовсе не одинаковы и их химические свойства оказывают влияние на прочность соседних с ними связей. Кроме того, прочность данной связи зависит от структуры того пептида, которому она принадлежит и, следовательно, непрерывно изменяется в ходе гидролиза. Если учесть указанные факторы, то расчеты становятся слишком затруднительными [411, 412] и в настоящее время следует довольствоваться результатами, полученными опытным путем. Несмотря на все это, было бы интересно сделать некоторые предположения и затем проверить, насколько расчет, отвечающий каждому такому предположению, совпадает с опытными данными. [c.167]

Структуры всех 20 нормальных аминокислот (компонентов, выделенных из гидролизатов белков) были установлены к 1935 г. самым первым Браконно в 1820 г. был охарактеризован глицин, самым последним — треонин. Хотя цистеин входит в состав многих пептидов и белков как таковой, Однако их функционирующие формы содержат окисленный продукт — цистин, дисульфидные мостики которого могут образовываться как внутри-, так и межмолекулярно. За исключением глицина, все кодируемые аминокислоты белков оптически активны и одинаково хиральны при асимметрическом ос-углеродном атоме. По аналогии, с обычной номенклатурой для углеводов, их обычно рассматривают как соединения, обладающие -конфигурацией, при этом -серин считают родоначальным соединением. За исключением цистеина, конфигурация всех аминокислот соответствует S-конфигурацни по системе Кана-Ингольда-Прелога положение серы в цистеине таково, что -цистеин имеет / -конфигурацию. Изолепцин и треонин имеют по второму центру асимметрии при -углеродных атомах найденные в белках (2S, 35)-2-амино-3-метилвалериановая и (2S, 3/ )-2-амино-3-гидроксимасляная кислоты являются стереоизомерами. [c.227]

Другие паразитические прокариотные организмы удается выращивать на искусственных средах, но состав таких сред необычайно сложен. Они содержат, как правило, белки или продукты их неглубокого гидролиза (пептиды), полный набор витаминов, фрагменты нуклеиновых кислот и т.д. Для приготовления питательных сред такого состава используют мясные гидролизаты, цельную кровь или ее сыворотку. Формы, способные расти при создании подходящих условий вне клетки хозяина, называют ф а-культативными паразитами. [c.83]

Что касается пептидов, то из входящих в их состав аминокислот наибольшее сродство к гелям сефадекса придает им триптофан. Триптофансодержащие пептиды из частичных (например, триптических) гидролизатов белков (например, цитохрома с-551 из Pseudomonas) всего сильнее удерживаются гелем и элюируются в виде отдельной зоны [123]. Классическим примером подобного явления служит разделение тироцидинов. Эта группа циклических декапептидов, обладающих антибиотической активностью, состоит из трех компонентов, один из которых (тиро- [c.191]

D-Глутаминовая кислота встречается в гидролизатах L. arabinosus [364] и в полипептиде, входящем в состав капсулы клеток В. anthra is и родственных организмов (стр. 72). D-Пролин выделен из кислотных гидролизатов алкалоидов спорыньи еще в 1935 г. [379] это наблюдение воспроизведено другими исследователями [380]. Однако в настоящее время имеются данные, свидетельствующие о том, что в самих алкалоидах спорыньи, до их гидролиза, пролин имеет L-конфигурацию [381]. алло-И-Изолейцин, найденный в гидролизатах актиномицина [382, 383], также, вероятно, возникает во время гидролиза в результате энимеризации L-изолейцина, входящего в состав этого пептида [384]. [c.68]

Определение аминокислотной последовательности — задача очень трудоемкая. Однако ее можно было бы значительно облегчить, если бы удалось выработать приемы для фрагментации длинных пептидных цепей на относительно небольшие пептиды, содержащие от 10 до 15 аминокислотных остатков, и на другой ряд более длинных пептидов, с тем чтобы можно было установить места перекрывания небольших пептидов. Такая идеальная возможность редко встречается. Практически проблема решалась несколькими путями. История изучения инсулина, рибонуклеазы и гемоглобина отражает три различных подхода. В первых исследованиях, проведенных на инсулине, изучали частичные кислотные гидролизаты динитрофепилированных пептидов (см. гл. 6), а ферменты были использованы на второй стадии работы для получения более крупных пептидов. Быстрое установление структуры рибонуклеазы оказалось возможным благодаря усовершенствованию анализа аминокислот. Аминокислотный состав пептидов, полученных [c.113]

Изучение последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе практически началось с работ К. Анфинсена и его сотрудников, которые в 1954 г. при помощи метода динитрофенилирования установили, что ее молекула представляет собой одиночную пептидную цепь, на М-конце которой имеется следующая последовательность аминокислотных остатков лиз.глу.-тре.ала. [1]. Немного позже к изучению химической природы рибонуклеазы приступила группа исследователей Рокфеллеровского института в США, во главе которой стояли Мур, Стейн и Хирс. Группа этих ученых провела определение химического состава рибонуклеазы и установила, что составляющая ее полипептидная цепь содержит 124—126 аминокислотных остатков, которые были определены количественно [413]. Следующим этапом изучения химического строения рибонуклеазы явилось окисление ее надмуравьиной кислотой при низкой температуре, что исключало возможность модификации тирозина. При этом происходил разрыв дисульфидных связей с образованием восьми сульфоновых групп и переход четырех остатков метионина в соответствующее сульфоновое производное. После гидролиза трипсином изучали тринадцать наиболее крупных пептидов, содержавших все 124 аминокислотных остатка, входивших в состав рибонуклеазы [255]. Для выяснения порядка соединения этих пептидов друг с другом было проведено параллельное исследование пептидов пептического и химотриптического гидролизатов, что позволило построить неполную формулу окисленной рибонуклеазы, которая была дополнена сведениями о расположении амидных групп глютаминовой и аспарагиновой кислот [39]. [c.136]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Для установления общей последовательности белка пептиды одного типа гидролиза должны быть перекрыты пептидами, полученными из другого гидролизата. Некоторые комбинации протеолитических фрагментов, такие, как трипсин и химотрипсин или трипсин и стафилококковая протеаза, хорошо дополняют друг друга в этом отношении, в то время как комбинация трипсин + протеаза из А. mellea или химиотрипсин + пепсин менее выгодны, поскольку они образуют значительное число фрагментов, отличающихся только на один аминокислотный остаток (табл. 10.1). Нет необходимости определять полную структур/ всех пептидов второго набора, обычно ограничиваются получением таких характеристик, как аминокислотный состав, N-концевые аминокислоты, электрофоретическая подвижность, но, безусловно, должна быть установлена аминокислотная последовательность перекрывающих областей и тех участков цепи, корректность структуры которых вызывает сомнение. Перекрывающая последовательность должна захватывать. по крайней мере два С-концевых остатка одного пептида и два N-концевых другого. Если установление структуры белка не завершено в значительной степени, то более короткие перекрывающие по следовательности, чем указанные, должны быть подтверждены дополнительными данными. Если же структура установлена почти полностью, то вероятность конкурирующей последовательности для неубедительного перекрытия снижается и пептиды могут быть ориентировочно размещены по цепи. Стратегия [c.359]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология