Иммуноглобулины кроличьи

Кроличий иммуноглобулин G Секреторный иммуноглобулин А [c.292]

Эффективный метод получения кроличьей антисыворотки к мышиному иммуноглобулину заключается в следующем [c.78]

Различия во включении тимидина, обусловленные культуральной средой, особенно те, которые выявляются при стимуляции культур ЛПС и кроличьими антителами против иммуноглобулинов кур, наблюдаются также при культивировании лимфоцитов периферической крови. Как было показано в ряде опытов, полная среда со всеми добавками обеспечивает диффе- [c.416]

Большинство коммерческих кроличьих антисывороток оказались вполне пригодными для нсследовання в ОПЛГ-СБА человеческих и мышиных клеток, секретирующих иммуноглобулины Кроличьи антналлотипические сыворотки тоже с успехом при меняются для выявления Ig-секретирующих клеток кролика. [c.225]

Планшет инкубируют 30 мин при 37°С во влажной атмосфере, а затем из каждой лунки осторожно отсасывают антитела. Каждую лунку трижды промывают PBS (250 мкл на 1 лунку) и добавляют в них по 10 мкл разбавленных, конъюгированных с флуоресцеином антител против мышиных иммуноглобулинов (кроличьих либо других в зависимости от используемых первых антител). Флуоресцирующая сыворотка должна быть предварительно адсорбирована клетками HeLa. Для этого отмытую суспензию клеток HeLa инкубируют 18 ч на холоду с флуоресцирующими антителами в присутствии ингибиторов протеаз. Готовые для работы антитела, не дающие фоновой флуоресценции, получают центрифугированием (500 g, 5 мин) инкубационной смеси и фильтрацией супернатанта через нитроцеллюлозный фильтр с диаметром пор 300 мкм. [c.268]

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации по Мильгрому и по Проому. [c.117]

Синтез ТЕМПО-дихлоротриааина и снин-мечение им кроличьего суммарного иммуноглобулина 1 0 оСуш ествляли по методу [13]. Измерения проводили в фосфатном буфере (0,1 М, pH 7,1). [c.243]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Разработанные сравнительно недавно методы работы с рекомбинантными ДНК (обсуждаемые в гл. 9) позволили сравнить нуклеотидные последовательности индивидуальных мРНК, кодирующих некоторые известные эукариотические белки, с соответствующими фрагментами последовательностей в хромосомной ДНК. Благодаря использованию этих методов в 1977 г. было сделано сенсационное открытие. Оказалось, что внутри кодирующих областей некоторых эукариотических генов содержатся нетранслируемые фрагменты последовательности. Так, некодирующие внутренние нуклеотидные последовательности были обнаружены в структурных генах р-цепей кроличьих и мышиных гемоглобинов, легких цепей иммуноглобулинов и куриного овальбуми-на (основного компонента яичного белка). На сегодняшний день ясно, что наличие внутренних некодирующих последовательностей является типичным, хотя и не обязательным свойством эукариотических генов. На карте структурной организации гена овальбумина (рис. 11.17) показано, как семь протяженных внутренних некодирующих участков последовательности (интронов) разделяют смысловую последовательность, кодирующую зрелую мРНК, на восемь фрагментов (экзонов). [c.55]

Антиглобулины (кроличьи антитела к мышиным иммуноглобулинам), конъюгированные с пероксидазой хрена (DAKO), разбавленной 1 1000 PBS, содержащим 10% СЭК. [c.186]

Промойте пять раз PBS. Инкубируйте в течение 3 ч со связанными с пероксидазой хрена кроличьими антимышиными иммуноглобулинами, разбавленными 1 100 PBS, содержащим 1% БСА, 10% СЭК. [c.187]

Желательно предварительно истощить антитело второго порядка экстрактом ли-зированных клеток Е. соН табл. 6.2). Антитела второго порядка должны быть специфичными по отношению к животному, служившему хозяином при получении антител, ис-иользовавшихся при скрининге, например кроличий антимышиный иммуноглобулин, связанный с пероксидазой хрена (DAKO) или антикроличьи иммуноглобулины козы, и т. д. [c.188]

Первый щаг к пониманию строения иммуноглобулинов был сделан английским исследователем Р.Портером в 1959 г. Он продемонстрировал, что обработка кроличьих антител IgG-класса ферментом папаином расщепляет молекулу на два основных фрагмента с мол. массами 45 кД и 50 кД. Один из этих фрагментом сохранял способность связывать антиген и в силу этого получил название Fab-фрагмента (от англ. antigen binding ). Второй фрагмент не взаимодействовал с антигеном. Его удалось легко кристаллизовать, что и послужило основанием для его обозначения как F -фрагмента (от англ. с1у81аШ2аЫе ), В количественном отно- [c.53]

Овцы, как н кролики, дают хорошие титры антител к Ig человека всех классов. От овец получены преципитирующие антисыворотки, специфичные к подклассам IgG человека, что, по-видимому, свидетельствует о способности этих животных распознавать тонкие структурные различия иммуноглобулинов других млекопитающих. Обычно от овцы и кролика получают одинаково хорошую антисыворотку к изотипам иммуноглобулинов крыс и мышей, а кроме того, как от филогенетически отдаленных видов, и к иммуноглобулинам друг друга. Например, в методах с использованием первых антител кроличьего происхождения вторыми антителами могут быть иммуноглобулины овцы к иммуноглобулину кролика, и наоборот. Очищенные с помощью аффинной хроматографии кроличьи и овечьи антитела стабильны при хранении. В дополнение ко всему вышесказанному Fab- и Р( аЬ)2-фрагменты могут быть получены из овечьих и кроличьих антител по хорошо описанной и легко воспроизводимой методике [И], [c.42]

Антитела, распознающие минимальные структурные различия между родственными молекулами одного вида животных, часто трудно получить при ксеноиммунизации, поскольку иммунный ответ преимущественно направлен против сильных антигенных различий донора и реципиента. Иногда удается индуцировать специфическую толерантность ио отношению к им-мунодоминантным эпитопам и, таким образом, изменить специфичность гуморального ответа. Данный метод может использоваться для получения как поликлональных, так и моноклональных антител. Мы успешно получали овечью антисыворотку ко всем аллотипическим антигенам локусов а я Ь кроличьих иммуноглобулинов,. вводя -в/в новорожденным ягнятам 500 мг пула очищенного ультрацеитрифугированием кроличьего IgG, лишенного какой-либо одной аллотипической детерминанты в возрасте трех месяцев эту аллель вводили с ПАФ внутримышечно. [c.54]

Антисыворотки к иммуноглобулинам -могут быть получены и без предварительной очистки (см. разд. 3.2.3). Например, для получения антисыворотки к кроличьему IgM 0,5 мл IgM-фракцци свободной от комплемента сыворотки к эритроцитам барана 10 мин перемешивали с 5 мл 10%-ной (объем на объем) суспензии эритроцитов. Затем эритроциты 5 раз отмывали PBS, клетки смешивали с ПАФ и вводили в/м. Через 3 нед повторяли введение в три разные точки, а спустя [c.79]

При иммунизации гетерологичным иммуноглобулином преимущественно образуются антитела к изотипическим и ал-лоти пическим детерминантам чужеродного антитела. Это требует проведения абсорбции. В данном случае успешной абсорбции достигают при повторном пропускании кроличьей ан- [c.87]

Специфичность антиглобулинов является критическим моментом во многих иммунологических исследованиях. Антигены-иммуноглобулины дают перекрестную реакцию между изо-типами и видами, поэтому чтобы добиться специфичности антисыворотки к иммуноглобулину данного вида, класса и подкласса, необходима тща тельная абсорбция. Одна из наиболее распространенных ошибок начинающих исследователей — это представление о том, что аитисыворотка, специфичная, например, к IgG кролика (т. е. не связывающаяся с кроличьим IgM или IgA), не будет взаимодействовать с IgG других видов. Чаще всего такое взаимодействие будет наблюдаться, если сыворотка не была истощена IgG этих видов. [c.101]

Вторые антитела (антиглобулины), например конъюгированные с пероксидазой хрена антитела барана, к мышиным иммуноглобулинам, антитела барана к кроличьим IgG, антитела ролика к IgG барана. [c.231]

Клеткн селезенки (Н.В21) культивировали в 200 мкл среды в луиках панелей для микротитроваиия ( ostar 3596) при начальной плотности 1-10 жизнеспособных лимфоцитов на лунку прн 40 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% Oi. Н-Тимидин (I ыкКн/мл) добавляли на 8 ч через 40 ч после начала культивирования. Проводили четыре параллельных измерения в независимых лунках. Отклонение от среднего значения не превышало 10%. Кр-анти-KIg — кроличьи антитела против иммуноглобулина кур ИСК — нормальная сыворотка кровн кролика. [c.417]

В чашку Петри 100X20 мм (Fal on, номер по каталогу 1005) пипеткой наливают 6 мл раствора антител, содержащего кроличьи антитела против иммуноглобулинов овцы (10 мкг белка/мл) и кроличьи IgG (70 мкг белка/мл), и инкубируют чашку Петри при 4°С в течение ночи. (Антитела против иммуноглобулинов овцы можно использовать повторно.) Включение в смесь неспецифических кроличьих IgG уменьшает связывание имеющих поверхностные иммуноглобулины В-клеток с поверхностью чашки Петри, что способствует их легкому освобождению при промывке струей раствора из пипетки на этапе 7 описываемой процедуры. [c.460]

Лизис нагруженных белком А эритроцитов можно использовать при анализе у Xenopus клеток, образующих иммуноглобулины, по описанным в литературе методикам. Для такого анализа, так же как и для обратного локального гемолиза, необходимо определение оптимальных разведений (титрованием) кроличьих антител против иммуноглобулинов Xenopus. Например, нашу антисыворотку для использования в тесте с нагруженными белком А эритроцитами нужно разводить 1 80, а для обратного гемолиза 1 256. Вероятно, антисыворотка обеспечивает более прочное связывание антител низкой аффинности с клетками-мишенями. Ни одни из известных моноклональных антител против IgY не дают присущего кроличьим антисывороткам усиливающего эффекта. [c.503]

Рис. 4, Анализ иммулоглобулииов, секретируемых клетками гибрид( мы. Условия биосинтетического включения метки в секретнруемые белки же, что указаны в подписи к рис. 2, По 1 мл надосадочной жидкости от каждой культуры инкубировали с 20 мкл кроличьей антисыворотки к иммуноглобулинам мыши (4 С, 2 ч). Затем добавляли примерно 50 мкл осевших гранул геля сефарозы, нагруженных белком А, и инкубировали еще 15 мин, непрерывно перемешивая. Специфически сорбированные иммуноглобулины исследовали методом ДСН-ПАГЭ, как описано в тексте. Т и Л — тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов I и 1 — соответственно окрашенные электрофоре граммы и радиоавтографы одних и тех же гелей.

П. Моноклональные мышиные антитела к антигенам клеточной поверхности добавляют к экстракту мембраи, солюбилизированных с помощью Ф-40 (примерно 25 мкл асцитной жидкости иа мембраны, выделенные из 10 клеток), и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем добавляют оптимальное (по данным предварительного титрования) количество кроличьих илн бараньих антител к иммуноглобулинам мыши и смесь инкубируют 16 ч при 4 С для осаждения иммунных комплексов. Иммунные преципитаты отмывают дважды 0,5%-ным раствором ЫР-40 в ЗФР н один раз 0,5%-ным раствором ЫР-40 [c.63]

Приготовление эритроцитов быка (ЭБ), нагруженных кроличьими антителами к иммуноглобулинам мыши. Бычью кровь хранят в растворе Олсвера и используют в период от 1 до 4 недель после взятия. Для получения эритроцитов ее цент- [c.202]

Выделение кроличьих антител к иммуноглобулинам мыши на иммуносорбенте. Кроличью антисыворотку к IgG мыши прогревают 30 мин при 56 С и наносят на колонку мышиного IgG, иммобилизованного на сефарозе. Специфические антитела, связавшиеся с мышиным иммуноглобулином, элюируют 0,05 М НС1-ГЛИЦИИ0ВЫМ буфером с pH 2,5. Элюат нейтрализуют 0,2 М триС буфером с pH 8 и сразу же наносят на колонку сефадекса G-50, уравновешенного ФР. Концентрацию антител в элюате доводят до 800 мкг/мл и хранят полученный реагент мелкими порциями в замороженном состоянии. [c.203]

Полный адъювант Фрейнда (ПАФ) (фирма Dif o) Проявляющие антисыворотки кроличьи антисыворотки к различным изотипам мышиных иммуноглобулинов (Gronowi z et al,, 1976 см. также гл. 9) [c.242]

Смотреть страницы где упоминается термин Иммуноглобулины кроличьи: [c.288] [c.292] [c.383] [c.208] [c.168] [c.314] [c.87] [c.88] [c.79] [c.84] [c.234] [c.141] [c.273] [c.417] [c.464] [c.492] [c.492] [c.46] [c.46] [c.49] [c.81] [c.178] [c.203] [c.217]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология