Крыса, иммуноглобулины

Опыты с искусственными генными конструкциями, составленными из отрезков ДНК разного происхождения, выявили существование особого цис-действующего элемента регуляции генов эукариот, получившего название усилителя (энхансера) или активатора транскрипции. Энхансеры представлены короткими последовательностями ДНК, состоящими из отдельных элементов (модулей), включающих десятки нуклеотидных пар. Модули могут представлять собой повторяющиеся единицы. Энхансер увеличивает эффективность транскрипции гена в десятки и сотни раз. Впервые энхансеры были обнаружены в составе геномов животных ДНК-содержащих вирусов ( У40 и полиомы), где они обеспечивают активную транскрипцию вирусных генов. Извлеченные из вирусных геномов и включенные в состав искусственных генетических конструкций, они резко усиливали экспрессию ряда клеточных генов. Позднее были обнаружены собственные энхансеры генов эукариотической клетки. Особенность энхансеров состоит в том, что они способны действовать на больших расстояниях (более чем 1000 п. н.) и вне зависимости от ориентации по отношению к направлению транскрипции гена. Оказалось, что энхансеры могут располагаться как на 5 -, так и на З -конце фрагмента ДНК, включающего ген, а также в составе интронов (рис. 112, а). Например, энхансеры были выявлены в районе 400 п. н. перед стартом транскрипции генов инсулина и химо-трипсина крысы. В случае гена алкогольдегидрогеназы дрозофилы энхансер был локализован за 2000 п. н. перед промотором. Энхансеры обнаружены на 3 -фланге гена, кодирующего полипептидный гормон-плацентарный лактоген человека, а также в составе интронов генов иммуноглобулинов и коллагена. [c.203]

Аффинное фракционирование клеток наиболее часто применяется в анализе популяций лимфоидных клеток. Мэтьюз и др. [36] разработали метод разделения лимфоидных клеток из селезенки и тимуса крысы и селезенки мыши на сефарозе с прикрепленным к ней агрегированным иммуноглобулином крысы. [c.135]

Иммуноглобулины Е (IgE) Иммуноглобулин М нз сыворотки крысы и кролика г-Макроглобулин [c.291]

IV. Антисыворотки к иммуноглобулинам мыши и крысы. Для общих целей анти-IgG, получают путем иммунизации животных фракцией IgG, полученной в результате аффинной очистки на колонке с протеинА-сефарозой (разд. 10.6.1). Для удаления антител к другим классам иммуноглобулинов сыворотки сорбируют моноклональными антителами или сывороткой, лишенной IgG. [c.104]

В свете рассматриваемых положений можно объяснить ряд установленных ранее данных о регуляторной роли естественных антител. Впечатляющее по своим результатам исследование было выполнено J. Murray еще в 1967 г. Он проанализировал значение естественных антител против эритроцитов барана, содержащихся в сыворотке крыс, на продукцию этими животными антител против того же антигена (эритроцитов барана). Следует напомнить, что у человека и различных экспериментальных животных, не подвергавшихся иммунизации, в сыворотке крови содержатся в низких концентрациях естественные антитела как против эритроцитов барана, так и против ряда других антигенов и гаптенов. Эти естественные антитела, в том числе естественные антитела против эритроцитов барана, представляют собой комплексы / -белков определенной специфичности с циркулирующими иммуноглобулинами, причем последние выполняют только функцию носителя (см. гл. 5) [c.92]

Овцы, как н кролики, дают хорошие титры антител к Ig человека всех классов. От овец получены преципитирующие антисыворотки, специфичные к подклассам IgG человека, что, по-видимому, свидетельствует о способности этих животных распознавать тонкие структурные различия иммуноглобулинов других млекопитающих. Обычно от овцы и кролика получают одинаково хорошую антисыворотку к изотипам иммуноглобулинов крыс и мышей, а кроме того, как от филогенетически отдаленных видов, и к иммуноглобулинам друг друга. Например, в методах с использованием первых антител кроличьего происхождения вторыми антителами могут быть иммуноглобулины овцы к иммуноглобулину кролика, и наоборот. Очищенные с помощью аффинной хроматографии кроличьи и овечьи антитела стабильны при хранении. В дополнение ко всему вышесказанному Fab- и Р( аЬ)2-фрагменты могут быть получены из овечьих и кроличьих антител по хорошо описанной и легко воспроизводимой методике [И], [c.42]

ДЛЯ определения антигенов клеточной поверхности лимфоидных клеток мышей используют крысиные МА, применение непрямого варианта ИФМ с меченными флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) мышиными МА против иммуноглобулинов крыс обеспечивает достаточную чувствительность определения при этом практически не возникает проблем с неспецифическим фоновым связыванием. Связывание с F -фрагментом в этой системе не вызывало дополнительных затруднений, если предпринимались меры против образования агрегатов. [c.179]

ИФМ имеет ряд существенных преимуществ перед цитоток-сическими тестами, ELISA и РИА. Во-первых, с помощью ИФМ можно определять молекулы, присутствующие на клеточных поверхностях с плотностью до нескольких тысяч копий на клетку. Во многих случаях, когда методы ELISA на клеточных поверхностях, цитотоксические тесты или РИА оказываются недостаточно чувствительными, антигены плазматической мембраны удается определить с помощью ИФМ. Во-вторых, при исследовании ИФМ имеется возможность достаточно просто детектировать антитела практически всех классов иммуноглобулинов. Например, в настоящее время имеется несколько видов мышиных МА против каппа-легких цепей иммуноглобулинов крыс. Поскольку от 90 до 95% всех иммуноглобулинов крыс содержат каппа-легкую цепь, эти МА существенно улучшают возможности скрининга. В отличие от этого в цитотоксических тестах желательно, чтобы МА принадлежали к классу IgM, так как при этом фиксация комплемента обеспечивается с наибольшей эффективностью. В-третьих, при проведении ИФМ на проточном флуорометрическом клеточном сортере (ПФКС) для каждого определения связывания антител анализируется большое число клеток. Если для каждого образца имеется возможность просчитывать 5—10-10 клеток, то значительно уменьшается вероятность ошибок. [c.179]

Надосадочную жидкость удаляют из лунок, как описано в п. 4, и добавляют в лунки по 25 мкл меченных ФИТЦ мышиных антител против иммуноглобулинов крысы, разбавленных до соответствующего разведения. Если необходимо получить информацию только по связыванию флуоресцентного зонда с жизнеспособными клетками, то к мышиным антителам, меченным ФИТЦ, добавляют иодистый пропидий до конечной концентрации 10 мкг/мл. Мы использовали меченные ФИТЦ мышиные МА против легких каппа-цепей иммуноглобулинов крыс и (или) против F -фрагмента иммуноглобулинов крыс в концентрациях 5—10 мкг/мл. Конъюгаты ФИТЦ с МА имеют отношения флуоресцеин белок в диапазоне 1—3. После добавления меченых антител содержимое лунок ресуспендируют многоканальной пипеткой, как описано в п. 4. Панель инкубируют в ледяной бане 20—25 мин. [c.183]

В опытах используют мышей с перевиваемой плазмо-цитомой М0РС-21А, продуцирующей иммуноглобулин (y1 и-типа) и крыс. [c.293]

Иммуноглобулин мыши (ИГМ) выделяют из сыворотки мышей с плазмоцитомой по Поттеру с соавт. (Potter е. а., 1965), сывороточный альбумин (САК) — из сыворотки крыс по Корнеру ( orner, 1962). [c.294]

Одновременную инкубацию обоих конкурентов (меченого и немеченного миозина) с первичными антителами использовали Кларк и соавторы для отбора моноклональных гибридбм — продуцентов антител против миозина. Роль иммунной сыворотки в этих опытах каждый раз играли среды культивирования различных гибридом, полученных в результате слияния клеток селезенки крыс и мышей, иммунизированных миозином, и клеток миеломной линии P3-X63-Ag8. Инкубацию проводили в боратном буфере (pH 8,4), содержащем 40 мМ пирофосфата натрия, по 1% Тритона Х-100 и дезоксихолата, а также 2% нормальной сыворотки крысы или мыши. Эту сыворотку вводили опять-таки ради создания эквивалентного соотношения концентраций при последующем добавлении вторичных антител в составе анти сыворотки козы против иммуноглобулинов крысы или мыши Использовав для конкуренции миозин гомологичного и гетеро логичного происхождения, авторы выясняли степень специфич ности антител, синтезируемых гибридомами [ lark et al., 1980] [c.282]

В том же 1956 г. были обнаружены и внутривидовые различия в антигенных свойствах иммуноглобулинов кролика (Oudin, 1956). В этом случае аллотипы были обнаружены не с помощью аутоантител (агглютинаторов), а с помощью перекрестной внутривидовой иммунизации. Для этого иммуноглобулины, выделенные из сыворотки одного кролика, вводили другому кролику и, если между иммуноглобулинами этих двух животных существовали антигенные различия, то у кролика-реципиента вырабатывались антитела, специфически реагирующие с иммуноглобулинами кролика-донора. С помощью перекрестной внутривидовой иммунизации были обнаружены также и аллотипы иммуноглобулинов мыши и крысы, но здесь задача облегчалась наличием большого числа ин-бредных линий животных (Herzenberg, 1964 Рохлин и др., 1970). [c.42]

Генетические варианты легких цепей обнаружены для иммуноглобулинов человека, кролика и крысы. Известны четыре аллотипических варианта легких цепей иммуноглобулинов человека. Многочисленные данные о распределении этих вариантов в семьях, а также популяционные исследования различных рас показали, что эти варианты контролируются серией множественных аллелей одного локуса (Muir, Steinberg, 1967). [c.43]

Множественные аминокислотные различия обнаружены и между аллельными вариантами каппа-цепей иммуноглобулинов крысы (Vengerova е. а., 1972 Gutman е. а., 1975). В этом случае каппа-цепи различаются по 10 остаткам и одной делеции. Распределение положений, где наблюдаются аминокислотные замены, неслучайно по отношению к трехмерной структуре постоянной области каппа-цепей иммуноглобулинов крысы. Большая часть этих положений локализована на наружной части цепи, причем различия в положениях 153 и 155, с одной стороны, и в положениях 184, 185 и 188 с другой, пространственно аналогичны тем положениям, где наблюдаются замены между аллельными вариантами каппа-цепеи человека и изотипами ламбда-цепей. [c.45]

Различия между каппа-цепями иммуноглобулинов крысы не так велики, как между аллельными вариантами каппа-цепей кролика, но и в случае каппа-цепей крысы размах внутривидовых различий не укладывается в традиционный филогенетический ряд. Так, между постоянной областью каппа-цепей иммуноглобулинов мыши и крысы выявлено 26 аминокислотных замен, а между аллельными вариантами каппа-цепей крысы таких замен 11 (Gutman е. а., 1975). [c.45]

Таким образом, структурные н генетические исследования постоянной области легких полипептидных цепей иммуноглобулинов человека, кролика и крысы показали следующее 1) существуют наследственные внутривидовые различия в строении постоянных областей легких полигептидных цепей, и образование постоянной области контролируется соответствующими генами 2) в случае легких цепей иммуноглобулинов человека различия между аллельными вариантами определяются заменой одного аминокислотного остатка, тогда как между аллельными вариантами легких цепей иммуноглобулинов кролика и крысы наблюдаются множественные аминокислотные замены 3) образование постоянной области легких цепей каппа- и ламбда-типа контролируется разными несцепленными генами. [c.46]

Для гуморального типа иммунного ответа характерна выработка антител, которые являются показателями функциональной активности В-звена иммунной системы [87,98,99]. Общий пул иммуноглобулинов в сыворотке крови неиммунизированных крыс определяли методом двойной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле [100-101]. В лунки 24-х луночного планшета разливали по 2 мл 1,5% агара 01 ко, лунки вырезали шаблоном. В центральную лунку разливали по 20 мкл гиперим-мунной преципитирующей сыворотки производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, а в периферийные - по 20 мкл двухкратных разведении исследуемой сыворотки. После 24 часовой инкубации при комнатной температуре учитывали реакцию по количеству [c.226]

Смотреть страницы где упоминается термин Крыса, иммуноглобулины: [c.102] [c.560] [c.293] [c.94] [c.119] [c.24] [c.78] [c.204] [c.184] [c.177] [c.178] [c.182] [c.232] [c.248] [c.262] [c.315] [c.61] [c.61] [c.212] [c.180] [c.63] [c.74] [c.76] [c.93]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология