Гемагглютинин получение

На протяжении истории человечества среди людей не раз возникали заболевания в результате мутаций в гемагглютинине вирусов гриппа А. Клинические и эпидемиологические черты прошлых и современных эпидемий очень похожи. Это наводит на мысль что минувшие эпидемии были вызваны антигенно отличающимися вирусами, подобно современным штаммам, изучаемым в настоящее время. Такое предположение подкрепляется серологическими и недавно полученными молекулярно-генетическими доказательствами возвращения, или рециркуляции, вариантов вируса, которые существовали в прошлом. Таким образом, современное изучение генетики вирусов гриппа имеет не только ретроспективное, но и прогностическое значение для оценки этого рециркулирующего вируса. [c.11]

После обработки танином устойчивость эритроцитов, взвешенных в изотоническом растворе хлорида натрия, снижается. Поэтому для приготовления стойкой взвеси пользуются стабилизатором — раствором нормальной сыворотки кролика. Сыворотку, полученную от кроликов-доноров, инактивируют при температуре 56°С в течение 30 мин, истощают от неспецифических гемагглютининов, прибавляя к 1 мл инактивированной сыворотки 0,5 мл осадка отмытых нормальных эритроцитов. Смесь выдерживают 30 мин при комнатной температуре, центрифугируют, отсасывают сыворотку и непосредственно перед использованием разводят ее в 100 или 250 раз. [c.125]

Получение и концентрирование вирусного гемагглютинина из монослойных культур клеток [c.91]

Полученный этим методом гемагглютинин можно хранить практически неопределенное время при —70 °С или несколько месяцев при 4°С. [c.92]

Еще одна до сих пор нерешенная проблема заключается в вариабельности вируса при серийном пассировании в одном и том же хозяине или при смене хозяина. Известно, что многие тогавирусы в клетках комаров дают персистентную инфекцию, в то время как в клетках млекопитающих персистенция может и не наблюдаться. Вирус, образующийся при таких персистентных инфекциях, часто имеет сниженную вирулентность для мышей и для человека. Возможность подобных изменений нужно иметь в виду, например, при получении гемагглютинина из длительно культивируемых зараженных клеток (см. выше). [c.105]

Хотя подход с использованием синтетических пептидов обладает значительными потенциальными возможностями, остается неразрешенным ряд реальных или теоретических препятствий. Слабая антигенная активность большинства синтетических пептидов вынуждает для усиления иммунного ответа использовать в экспериментальных исследованиях на животных адъювант Фрейнда. В связи с тем что на людях адъювант Фрейнда использовать нельзя, для клинического применения синтетических пептидов необходимо обнаружение или разработка эффективных адъювантов, пригодных для человека. Не исключено, что одного пептида будет недостаточно для индукции резистентности, так как большие поверхностные антигены обычно содержат несколько различных иммунологических доменов, вызывающих защитный гуморальный и (или) клеточный ответ [15, 197]. Иногда идентификация небольших защищающих пептидов может оказаться невозможной, как, например, пептидов гемагглютинина вируса гриппа А, которые стимулировали бы образование антител, эффективно нейтрализующих инфекционность вируса [58, 70, 119]. Можно также предсказать трудности в стимуляции иммунного ответа к эпитопам, которые сформированы в результате сближения разных участков линейной белковой молекулы. Наконец, ожидаемому анти-тельному ответу у значительной части населения может препятствовать полиморфизм антигенов гистосовместимости класса II, контролирующих ответ на синтетические антигены [168]. Однако, поскольку уже достигнута защита на одной экспериментальной модели, можно надеяться на получение иммуногенных препаратов, активных в отношении других вирусов. [c.154]

Реовирусы всех серотипов вызывают агглютинацию эритроцитов человека [47], но только вирусы типа 3 агглютинируют эритроциты быка [68]. Как показывают генетические исследования, гемагглютинином реовирусов является поверхностный белок al [338]. Характер гемагглютинации реассортантных реовирусов, полученных в результате смешанной инфекции вирусами типов 1 и 3, определяется природой гена S1. Вирусы, несущие ген S1 типа 3, агглютинируют эритроциты и человека, и быка, а несущие ген S1 типа 1 — только человека [338]. Пустые вирионы содержат вирусный гемагглютинин и способны агглютинировать эритроциты [84]. [c.283]

С помощью искусственного мутагенеза получен делеционный вариант гена НА, утративший область, ответственную за синтез гидрофобного карбоксильного конца белковой молекулы. Этот гидрофобный домен относится к субъединице НА2 и заякоривает гемагглютинин в вирусной оболочке. Клетки, трансфицирован- [c.469]

Иммунные сывороточные препараты, полученные из крови животных, называют гетерологичными, а из крови людей — гомологичными. Активность сывороточных препаратов выражают в титрах антител — антитоксинов, гемагглютининов, комплемент-связывающих, вируснейтрализующих и т. д. [c.191]

Технология получения гемагглютинина из гриппозных вирионов заключается в следующем накопленный вирусный материал в аллантоисной жидкости куриного эмбриона сепарируют, подвергают микрофильтрации и фильтрационному концентрированию примерно в 50 раз, при необходимости дополнительно очищают ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы концентрированный вирионный материал обрабатывают катионным ПАВ и отделяют гемагглютинины ультрафильтрацией с последующими диализом и стерилизующей фильтрацией. На последней стадии стандартизируют и контролируют с ъединичную вакцину (особенно — на отсутствие живых гриппозных вирусов). [c.486]

Соотношение токсина к гемагглютинину как 1 4 или 1 9. Гемаг-лютинин получен в трех различных молекулярных формах с молекулярными массами 290 ООО 500 ООО 900 ООО дальтон. Все эти формы обладают гемагглютинируюш ей активностью. [c.359]

Большое внимание было уделено изучению различных белковых компонентов наиболее интересного из миксовирусов — вируса гриппа и различных его штаммов. По имеющимся данным, молекулярный вес белка нуклео-капсида этого вируса (38% от суммарного белка) составляет примерно 40 000 [283]. Пептидные карты, полученные в результате триптического гидролиза капсидиого белка из различных штаммов этого вируса, очень сходны между собой. В отличие от этого гемагглютинин оболочки (37%) у разных штаммов сильно различается. Он состоит, но-видимому, из пептидных цепей с аспарагиновой кислотой на N-конце средний молекулярный вес составляет в этом случае 60 ООО. Почти ничего не известно о химической природе нейраминидазы этого вируса. Ее константа седиментации намного выше, чем у соответствующих белков бактерий или клеток куриного эмбриона (9S против 5,5 и 3S) [97, 542]. Локализация этих белков в вирионе и их биологическая роль будут рассматриваться ниже (см. гл. VII). [c.84]

Исследованные гликопротеины были высокоактивными (гликопротеин подчелюстной железы овцы) и низкоактивными (фетуин, орозомукоид, гликопротеин подчелюстной железы овцы, частично переваренный трипсином) ингибиторами вирусных гемагглютининов. Константа равновесия К = = k2lki, в молях) составляла для гликопротеина овцы 1-10", для фетуина 9-10 , для орозомукоида 2-10 и для сиалогликопептидов, полученных обработкой гликопротеина овцы трипсином в контролируемых условиях, [c.248]

В описанном ниже методе для получения гемагглютинина используют монослой клеток Vero, В нашей лаборатории метод дает хорошие результаты в случае альфа- и флавивирусов при использовании среды с очень низким содержанием сыворотки. Однако высокие выходы гемагглютинина могут быть получены и на других линиях клеток млекопитающих и комаров. Ранее использовали антиген из мозга мышат-сосунков, который перед постановкой реакции обрабатывали органическими растворителями. Эти методы очень четко описаны Кларком и, Казалсом [c.91]

Дальнейшее приближение к вакцинам против практически важных заболеваний получено на примере вируса гриппа [223]. Синтетический пептид, соответствующий последовательности 91-108 гемагглютинина этого вируса, присоединен к столбнячному токсоиду и полученный конъюгат введен животным в полном адъюванте Фрейнда. Продуцируемые в ответ антитела показали заметную кросс-реактивность к интактному вирусу штамма А/Тех/77 и ингибировали гемагглютинацию эритроцитов вирусом. Эти, а также некоторые другие результаты указывают на эффективность конъюгата в стимуляции противогриппозного иммунного ответа. Аналогично построенная вакцина получена на основе синтетических пептидных фрагментов субъединицы В холерного токсина и столбнячного ток- [c.146]

Для изучения генетической природы толерантности экспериментально полученных трансгенных мышей, у которых островковые клетки поджелудочной железы экспрессировали вирусный антиген, гемагглютинин (ГА) вируса гриппа, а Т-клетки — ТкР, специфичный к этому антигену, (дважды трансгенные мыши), скрещивали с мышами, отличающимися по генам не-МНС, т. е. по генетической основе. У мышей одной линии (генетическая основа BALB/ ) Т-клетки, реактивные по отношению к ГА, продуцировали большие количества ИЛ-4 и ИФу признаков воспалительного процесса в поджелудочной железе у этих мышей не было. ГА-реактивные Т-лимфоциты мышей другой линии (генетическая основа B10.D2) продуцировали лишь цитокины, свойственные Тх1-клеткам, и были способны инфильтрировать островки поджелудочной же-.тезы, вызывая диабет. Очевидно, что иммунное отклонение здесь контролировали гены, составляющие генетическую основу многие из этих генов совместно регулируют чувствительность к аутоиммунному заболеванию. [c.267]

После первоначального успешного получения иммуногенных пептидов РМОУ возникли надежды, что с пептидами других вирусов успех будет столь же быстрым. Однако этого не случилось результаты опытов оказались разнородными были успешные, были и неудачные. Например, пептиды многих гидрофильных участков гемагглютинина вируса гриппа, включая главные антигенные детерминанты, стимулировали образование антител, которые связывались с гемагглютинином, но эти антитела не нейтрализовали вирусную инфекционность и не обеспечивали статистически значимой защиты от заражения в опытах на хомячках [58 Мэрфи, неопубликованные данные]. Аналогичные исследования на мышах выявили только частичную защиту [5]. Однако пептид HBsAg, содержащий групповые и подгрупповые детерминанты, несмотря на низкий уровень антител, индуцируемых им у шимпанзе, полностью защитил одно животное из трех от заражения вирусом гепатита В и придал частичную устойчивость другому [54]. Кроме того, пептиды, состоящие из 16 и 23 аминокислот и соответствующие З -концевым участкам генома Н8У-1, вызвали значительную устойчивость у мышей к заражению их летальной дозой Н8У-2 [32]. [c.153]

Природные изоляты реовирусов серотипа 3 различаются как по вирулентности, так и по наивысшему титру, достигаемому в ходе мозговой инфекции, но одинаковы по топографии и характеру вызываемого заболевания [122]. Антигенные варианты этих вирусов, полученные в результате отбора с применением антител против белка al (гемагглютинин), значительно менее вирулентны. Они отличаются от вирусов дикого типа и по характеру индуцируемых ими патологических изменений поврежде- ия захватывают лишь часть областей, поражаемых вирусами дикого типа. В основном повреждается гиппокамп в меньшей степени поражаются лимбические области, включая септум и мамиллярные тела, а кора практически не затрагивается [293] (рис. 20.7). [c.313]

Эффективность метода очистки. Обычно для показания степени очистки выражают увеличение биологической активности вируса в виде соотногпения титра инфекционности или гемагглютининов к какой-либо единице, например объема, сухого веса или содержания азота, общего белка п фосфора нуклеиновой кислоты. Это наиболее распространенный и доступный способ оценки качества полученных препаратов. [c.149]

Таблица 15.1. Экспрессия гена гемагглютинина вируса гриппа гибридными бакуловнрусами, полученными с помощью плазмид интеграции

Справочник химика 21

Химия и химическая технология