Определение нуклеиновых кислот по фосфору

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПО ФОСФОРУ [c.163]

Определение нуклеиновых кислот по фосфору [c.28]

Применение. В гистохимии для выявления нуклеиновых кислот методом экстракции [I] при обработке 10%-ной хлорной кислотой при 4°С извлекается только РНК, а 5%-ной кислотой при 60 °С — РНК и ДНК [Пирс, 750]. В аналитической химии в качестве сильного окислителя и для определения кремния и фосфора, [c.432]

Определение содержания фосфора и азота всегда имело большое значение для анализа нуклеиновых кислот. Для идентификации и количественного определения пурина и пиримидина в продуктах гидролиза нуклеиновых кислот использовали полупрепаративные методы выделения, различные цветные реакции, а также полярографию и микробиологические методы. В настоящее время эти методы анализа, за редким исключением, представляют только исторический интерес. [c.437]

Другие исследователи [38, 40] также использовали регистрацию оптической плотности в ультрафиолете вместо проведения цветных реакций или определения содержания фосфора. Они усиленно рекомендуют этот метод, ссылаясь на его быстроту, простоту и специфичность. Однако при применении рассматриваемого метода допускается произвольная величина для е (Р), которая пригодна не для всех нуклеиновых кислот любой данной ткани. Поглощение нуклеиновых кислот изменяется также при нагревании их с кислотой. Вместе с тем Логан и его сотрудники [21] нашли, что кривые поглощения для РНК и ДНК, взятых в одинаковых концентрациях, пересекаются в области 268,5 ммк допускается, что при этой длине волны обе нуклеиновые кислоты характеризуются величиной е (Р), равной 9850. [c.105]

Если по измерениям радиоактивности отчетливо заметно различие в скорости распада новых и старых молекул, то по данным обычного количественного определения фосфора нуклеиновых кислот существенных различий между вариантами не наблюдалось (табл. 3). [c.65]

Распад нуклеиновых кислот в результате автолиза по данным колориметрического определения фосфора [c.65]

Выявление нуклеиновых кислот с помощью флуориметрии. В отличие от одноцепочечных двухцепочечные молекулы ДНК и РНК взаимодействуют с бромистым этидием [758]. Образующийся комплекс возбуждается под действием света с длиной волны 360 н.ч и излучает при этом свет с максимумом интенсивности при 580 нм [661]. Чувствительность определения составляет 50 нг для ДНК и 100 нг для РНК. Применение специфических нуклеаз позволяет различать ДНК и РНК. Бромистый этидий добавляют [645] к пробам до электрофореза в таком количестве, чтобы отношение бромистый этидий/фосфор ДНК составляло примерно 0,1. При этой концентрации он практически не влияет на подвижность нуклеиновых кислот. По окончании разделения гели можно сфотографировать, использовав подходящий источник света и оранжевый светофильтр 1176]. [c.184]

Определение фосфора нуклеиновых кислот [c.406]

Раствор из колбы Кьельдаля количественно переносят через стеклянную воронку без фильтра в мерную колбу объемом 100 см ополаскивая многократно колбу Кьельдаля малыми порциями горячей воды, охлаждают, доводят до метки и перемешивают. Раствор употребляют для определения фосфора нуклеиновых кислот колориметрическим методом, как описано выше. [c.407]

Методы количественного определения нуклеиновых кислот основаны на определении содержания составляющих их компонентов азотистых оснований (как правило, спектрофотометрически благодаря поглощению в ультрафиолетовой области спектра) пентоз (с помощью химических реакций, позволяющих отдельно определять рибозу и дез-оксирибозу) и фосфора нуклеиновых кислот. [c.161]

Все химические методы определения нуклеиновых кислот основаны на определении а) фосфора, б) реакционноспособных пентозы или дезоксипентозы или их общего содержания в) пуринов и ниримидинов. Поэтому точность этих методов ограничена существующими различиями в процентном содержании фосфора, пентоз и т. н, в нуклеиновых кислотах из разных источников,. [c.99]

При использовании почти всех методов определения нуклеиновых кислот тонко измельченную ткань экстрагируют кислотой— обычно трихлоруксусной (ТХУ), хлорной или серной кислотой,— а затем органическими растворителями для удаления липидов (в некоторых случаях используют сначала органические растворители, а затем кислоту). При экстрагировании линидов необходимо соблюдать специальные предосторожности, чтобы избежать потерь РНК и белка [52]. Полученный остаток содержит кислотонерастворимый нелипидный фосфор, который состоит [c.99]

При определении нуклеиновых кислот проводился щелочной гидролиз по методу Шмидта и Тангаузера — 18 ч при 37°. В этих условиях РНК отделялась от ДНК и белков. ДНК осаждалась при подкислении гидролизата хлорной кислотой. После центрифугирования ДНК и белки оказывались в осадке, а РНК — в растворе. Разделение нуклеиновых кислот и гидролиз ДНК проводились по Сма ли и Кроткову (8т11Ие, Кго ко , 1959), определение фосфора — по Лоури в модификации Т. В. Венкстерн и А. А. Баева (1957). [c.10]

Для обеспечения роста микроорганизмов в среде должны быть неорганические фосфаты в виде кислых солей КН2РО4 и К2НРО4. Они же обеспечивают определенное значение pH среды (буферность раствора). В клетках живых организмов фосфор присутствует в форме фосфатов, главным образом фосфатов сахаров в нуклеотидах и нуклеиновых кислотах. Поскольку к этим соединениям относятся такие важные составные части клетки, как ДНК, РНК и АТФ, то очевидно, что фосфаты играют важную роль в жизнедеятельности клетки. Источником фосфатов в естественных средах (как питательный бульон) служат нуклеиновые кислоты. [c.284]

Н. М. Карамзиной), семенииков — по весовому коэффициенту, с помощью количественного морфологического анализа (Е. М. Чирковой, 1970) и определения содержания нуклеиновых кислот и скорости включения в них радиоактивного фосфора (Е. Я. Голуйоаич, 1970). [c.30]

Определение по фосфору считается наиболее надежным методом оценки количества нуклеиновых кислот, так как его процентное содержание в наименьшей степени зависит от нуклеотидного состава для ДНК оно составляет 9,8—10,1%, для РНК —9,1—9,6 26. При определении фосфора нуклеиновых кислот в тканях необходимо предварительно удалить свободные нуклеотиды, неорганический фосфат, а также все фосфорсодержащие соединения ненуклеотидной природы, в частности липиды. [c.163]

Т4-полинуклеотидкиназа широко используется для фосфори-лирования олиго- и полинуклеотидов при работе с рекомбинантными ДНК, при химико-ферментативном синтезе нуклеиновых кислот и определении их последовательности. [c.353]

Глегг и Кертец [21] нашли, что как целлюлоза, так и пектин (см. ниже) после -облучения проявляют последействие. Образцы сушили в вакууме над пятиокисью фосфора и облучали в заполненных воздухом сосудах дозами 0,1—2 мегафэр. Сразу по окончании облучения и с определенными интервалами в течение 29 дней после этого замеряли характеристическую вязкость растворов. Наблюдалось определенное снижение вязкости, причем оно было больше у целлюлозы и достигало 106% от первичного эффекта. Последействие отмечалось только у наиболее тщательно высушенных образцов. Небольшого количества влаги было достаточно, чтобы предотвратить этот эффект. Наблюдалось подобное же последействие при инактивации белков и деструкции нуклеиновых кислот в растворе. Оно будет обсуждено ниже в разделах на стр. 219 и 245, но приведенные эксперименты являются, по-видимому, первыми, показавшими последействие для полисахаридов и вообще полимеров в сухом состоянии. [c.211]

Основное затруднение при использовании всех методов подобного рода состоит в том, чтобы по количеству найденных в экстрактах реакционноснособных пентозы и дезоксипентозы рассчитать содержание ДНК или РНК. В связи с этим важно иметь в виду, что в пуриннуклеотидах сахара значительно более реакционно-способны, чем в пиримпдиннуклеотидах. Для устранения указанной трудности обычно производят следующее. В очищенных препаратах РНК дрожжей или ДНК зобной железы с известным содержанием фосфора определяют содержание пентозы или дезоксирибозы. Это дает возможность при определении содержания нуклеиновых кислот в новой ткани выражать полученные результаты в величинах содержания фосфора нуклеиновых кислот. Точность результатов зависит, очевидно, от чистоты и состава использованных в качестве стандарта препаратов. [c.103]

При оценке имеющихся в литературе данных о содержании нуклеиновых кислот в тканях следует иметь в виду, что прн определении фосфора РНК методом Шмидта — Таннгаузера неизбежно получаются завышенные результаты, обусловленные примесями других фосфорных соединений (стр. 101). [c.108]

Мешающие катионы предварительно удаляли с помощью ионного обмена [13]. Хессе и Бокель [14] определяли фосфор в нуклеиновых кислотах. Образец сжигали, растворяли золу и пропускали раствор через колонку катионообменника фосфор в нейтрализованном фильтрате определяли с помощью стандартного раствора церия(1У). Удаление мешающих катионов необходимо как для качественных, так и для количественных методов. Вуд [151 пропускал биологические жидкости через колонку со смолой цеокарб-225 в аммониевой форме, чтобы удалить из них кальций и магний перед определением фосфорных соединений методом бумажной хроматографии. [c.94]

Как упоминалось выще, длину цепи полинуклеотида можно определить количественным определением концевых звеньев. В случае некоторых небольших полимеров гидролиз концевого фосфата (фосфатов) под действием очищенной фосфомоноэстеразы дает независимую оценку длины цепи из соотношения количества общего фосфора к количеству фосфора, выделенному в виде неорганического фосфата исследование оставшегося полинуклеотида уточняет природу концевых звеньев. Применение такого рода методов до некоторой степени ограничено высокой степенью чистоты, необходимой для применяемых ферментов, и изменением активности моноэстераз (и диэстераз) с изменением длины цепи полимера. Однако нуклеиновые кислоты второго и третьего типов все же были обнаружены (хотя и в гетерогенных смесях рибонуклеиновых кислот), причем нуклеиновые кислоты последнего типа, возможно, возникали главным образом в результате процессов расщепления [92]. [c.389]

Поскольку при определении нуклеотидной последовательности обшей тенденцией является использование меченых нуклеиновых кислот [ что в значительной степени обусловлено применением метода фингерпринтирования, разработанного Сенгером с сотр. (Sanger et а/., 1965)1, то во всех приведенных здесь ieтoдпкax используют Этот изотоп удается выделить с высокой удельной активностью, и поскольку фосфор является неотъемлемой составной частью повторяющихся структурных единиц в скелете нуклеиновой кислоты, при его введении можно без труда отличить нуклеиновые кислоты от других биополимеров. [c.223]

При исследовании действия гиббереллина на рост растений обнаружено, что гиббереллин, в противоположность ИУК, гораздо сильнее стимулирует рост целых растений, чем отрезков различных органов (Brian, Hemming, 1958 Гукова, Фаустов, 1963 Гамбург, 19646). Считалось, что реакция отрезков на гиббереллин ослаблялась потому, что они были обеднены эндогенным ауксином, без которого гиббереллин не действует. Однако можно предположить, что гиббереллин не действует на те ткани, где рост растяжением не сопровождается одновременным накоплением белка и нуклеиновых кислот (отрезки органов), но оказывает свое действие там, где эти процессы протекают одновременно (ткани целого растения), т. е. предполагается, что действие гиббереллина на растяжение клеток как-то связано с синтезом белка и нуклеиновых кислот. В нашей работе (Гамбург, Мальцева, Кобыльский, 1965) не было обнаружено увеличения количества нуклеиновых кислот в третьем междоузлии проростков низкорослого гороха, которое реагировало на гиббереллин только растяжением клеток. Незначительным было также увеличение количества нуклеиновых кислот в стеблях этиолированных проростков гороха, где гиббереллин усиливал только растяжение клеток. Все это противоречит высказанному выше предположению. Следует учесть, что в проведенной нами работе определения проводились через 5 дней после обработки, когда уже были возможны вторичные изменения. Поэтому мы провели предварительную работу, в которой определили, как меняется содержание белка, фосфора нуклеиновых кислот и скорость роста третьего междоузлия через 1, 2, 3 и 5 дней после обработки гиббереллином (Гамбург, Маркович, неопубликованные данные). Оказалось, что стимуляция роста происходит только в течение первого дня после обработки, а затем скорость роста была почти такой же, как и в контроле. Именно в первый день наблюдалось увеличение содержания белкового азота и фосфора нуклеиновых кислот в междоузлии под влиянием гиббереллина. Затем эта разница сглаживалась. Таким образом, фактор, стимулирующий рост растяжением, одновременно вызывал увеличение количества белка и нуклеиновых кислот. Это может служить подтверждением необходимости синтеза белка и нуклеиновых кислот для растяжения клеток целого растения. Таким же подтверждением могут быть данные Шэннона с сотрудниками (Shannon et а., 1964) о том, что 2,4-Д, стимулируя рост участка мезокотиля на целом растении, одновременно увеличивает содержание белка и нуклеиновых кислот в этом участке. Однако если 2,4-Д действовала на этот же, но изолированный участок, то стимуляция роста не сопровождалась усилением синтеза белка и нуклеиновых кислот. Вероятно, рост растяжением целого растения и отрезков имеет разный механизм. Чтобы решить этот вопрос, необходимо располагать большим числом экспериментальных данных. [c.53]

Существует косвенный метод подсчета вирусных частиц в образце, который позволяет определить массу каждой частицы. Этот подход особенно полезен в том случае, когда нет строгого соответствия между числом частиц и их способностью образовывать бляшки . Молекулярный вес вирусных частиц определяют методами седиментации — диффузии и светорассеяния. Умножив его на процентное содержание ДНК в вирусной частице, получают молекулярный вес ДНК. Среди методов, которые используются для определения содержания ДНК в вирусной частице, можно назвать определение фосфора (колориметрически или по величине радиоактивности P ) определение связанной с пуринами дезоксирибозы (колориметрическое) определение тимипа (но радиоактивности Н ) [16] опре-делепие ультрафиолетового поглощения (при этом допускается, что вклады ДНК и белка аддитивны) 1 109] и определение плавучей плотности ви-вируса (исходя из того же предположения). Общее содержание вируса в препарате можно определить по сухому весу, по инкременту показателя преломления [110] и исходя из суммарного содержания белка и нуклеиновой кислоты. [c.238]

Для большинства просто устроенных вирусов, к которым относятся ВТМ и мелкие фаги, молекулярные веса РНК или ДНК, определяемые по константе седиментации, соответствуют значениям, которые можно предположить, если па каждую вирусную частицу приходится одна-единствепная молекула нуклеиновой кислоты об этом свидетельствуют и такие аналитические данные, как анализ по фосфору, определение оснований или ультрафиолетовый спектр поглощения [153, 162]. В тех случаях, когда имеются данные о концевых группах, они, как правило, подтверждают это заключение. Современные данные о концевых последовательностях молекул вирусных РНК приведены в табл. 5. (Некоторые из них уже обсуждались в предыдущем разделе.) [c.111]

Главные элементы, участвующие в фотосинтезе (С, Н, О), а также азот, сера и фосфор составляют основные строительные блоки тела растения. Например, клеточные стенки, формирующие скелет растения, состоят почти исключительно из углеводов и близких к ним соединений, содержащих С, Н и О. Белки, главные органические компоненты цитоплазмы, построены преимущественно из С, Н, О и N и небольшого количества 3. В состав нуклеиновых кислот, присутствующих в ядрах и в некоторых органеллах цитоплазмы, входят С, Н, О, N и Р. Липиды, содержащиеся в изобилии во всех мембранах, состоят преимущественно из С, Н и О, а также незначительного количества N и Р. Из 12 элементов, источником которых служит материнская порода, четыре используются растением главным образом для структурных целей. Сера является компонентом нескольких ами нокислот (цистеин, цистин и метионин)—структурных единищ из которых в конечном счете образуются белки. Хотя клеткам растения необходимо относительно малое количество серы, почти вся она выполняет важную структурную функцию. Без серу-содержащих аминокислот не могли бы синтезироваться многие важные белки клетки. Сера присутствует также в глутатионе,. широко распространенном веществе, который, как полагают, играет определенную роль в окислительно-восстановительных реакциях благодаря своей способности к обратимому превращению из восстановленной, или сульфгидрильной, формы (—5Н), в окисленную, или дисульфидную, форму (—-8—8т-), [c.209]

Избыток фосфора в среде определенным образом сказывается на содержании нуклеиновых кислот в мицелии стрептомицета, а также тормозит окисление пировиноградной кислоты, которая в результате этого накапливается в культуральной жидкости. Избыток ортофосфата в среде угнетающе действует на поглощение кислорода отмытым мицелием S. aureofa iens. Мицелий, выросший на среде с 15 мг% фосфора, имел более высокую окислрггельную способность, чем мицелий, выросший при избытке фосфора (35 мг%). [c.292]

Окрашивание фосфора сульфатмолибденовой жидкостью в присутствии олова, количественное определение фосфора - на колориметре. При этом сахарофосфаты извлекают слабым раствором хлорной кислоты, фосфолипиды - смесью спирт эфир при многократной обработке осадка в течение 38 ч при комнатной температуре фосфор нуклеиновых кислот [c.402]

В хемостатной культуре регулирование состава среды (смена лимитирующего субстрата) позволяет получить клетки определенного химического состава а иногда и с заранее заданными свойствами. Например, в соответствии с данными табл. 9 для получения клеток, обогащенных белком, но со сниженным содержанием нуклеиновых кислот (что важно для кормовых и пищевых целей) целесообразно использовать лимитирование по фосфору. [c.119]

Методы, применяемые для химического анализа, моншо использовать также для количественного определения вирусов, полученных в достаточно очищенном состоянии. Самым простым методом, которым часто пренебрегают, является определение содержания сухого вещества в данном объеме раствора. Правда, в этом случае нельзя разграничить, например, вирус ж неинфекционные частицы, содержащие меньшее количество нуклеиновой кислоты, чем нативный вирус. Этот метод лежит в основе определения а. иота и фосфора вируса, а такн е других его компонентов, например рибозы или тех или иных аминокислот. Определение содержания одного из этих компонентов можно затем использовать для количественного определения вируса в очищенных растворах. Растворы же, содержащие известное количество очищенного вируса, можно использовать для определения величины оптической плотности при 260 нм на единицу массы вируса в 1 мл. Аналогичный прием можно применить для отыскания коэффициентов пересчета, которые позволяли бы определять концентрацию вируса по величине коэффициента преломления раствора, а также по площади пиков на шлирен-диаграмме или абсорбционных пиков, полученных при анализе фракций после центри- [c.32]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология