Депротеинизация нуклеиновых кислот

Осаждение белков фенолом с целью их удаления (депротеинизация) получило широкое распространение при выделении и очистке нуклеиновых кислот и специфических полисахаридов. К числу последних относятся вещества, от которых зависит принадлежность крови человека к той или иной группе (изоантигены системы ABO). [c.67]

Так как в процессе выделения нуклеиновых кислот этим методом удается избавиться от значительной части белков (протеинов), указанную процедуру называют фенольной депротеинизацией. [c.190]

Гельфильтрацией на сефадексе Г-25 очень удобно удалять фенол из препаратов нуклеиновых кислот, получаемых фенольной депротеинизацией [346, 380, 443, 454]. Дри этом сохраняется нативность выделенной нуклеиновой кислоты. Если применяется сефадекс Г-75, то высокополимерная нуклеиновая кислота одновременно освобождается от клеточных нуклеаз [773]. Сефадексы широко используются при очистке вирусов нуклеазами для удаления продуктов гидролиза и самих нуклеаз [51, 454], [c.139]

Всякому структурному исследованию ДНК или РНК предшествуют выделение их из клеток, очистка и фракционирование. Поскольку в клетке нуклеиновые кислоты практически всегда находятся в комплексес белками (т. е. в вил, нуклеопротеидов), их выделение сводится в основном к очистке от белков (депротеинизации). Чаще всего нуклеиновые кислоты экстрагируют из гомогенатов клеток или очищенных клеточных органелл смесью фенол — вода В присутствии ионных детергентов (например, додецилсульфата натрия). При этом белки (и ряд других клеточных компонентов) переходят в органическую фазу, а нуклеиновая кислота остается в водной фазе. Из водного раствора ДНК или РНК осаждают спиртом. [c.10]

Метод предполагает получение высокополимерных ДНК и РНК, свободных от белков. Под действием водонасыщенного фенола на ну-клеопротеиды осуществляется их депротеинизация, причем при различных значениях pH для дезокси- и рибонуклеопротеидов. Обработка фенолом инактивирует нуклеазы, что позволяет получать нуклеиновые кислоты в нативном состоянии. [c.167]

Ядро характеризуется высоким содержанием нуклеиновых кислот. В связи с этим, а также вследствие важной функциональной роли ДНК и РНК в клетке выделение и определение этих нуклеиновых кислот относится к числу наиболее важных методов биохимии ядер. Для выделения и определения нуклеиновых кислот разработано много методов. Ниже приведены те из них, которые используются при работе с высшими растениями. ДНК можно выделить в чистом виде из хроматина путем депротеинизации по методу Мармура [36] согласно этому [c.31]

Недавно была изучена природа этой основной субъединицы для дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенной из Е. oli [1771. Нуклеиновая кислота после экстрагирования и депротеинизации имела молекулярный вес 11-10 (светорассеяние). Нагревание вещества в растворе хлористого цезия снижало молекулярный вес до 5,6-10 , в то время как обработка химотрипсином (или смесями хлороформ — октиловый спирт) давала полимер с молекулярным весом 2,4-10 , который имел нормальную S-образную кривую зависимости оптической плотности от температуры с точкой перегиба при 92°. Нагревание этой последней нуклеиновой кислоты в хлористом цезии (7,7 М) понижало молекулярный вес до 1,3-10 , но при этом образовывался двуцепочечный полимер, что было показано изучением кинетики ферментативного (дезоксирибонуклеаза Н) гидролиза. В отсутствие обработки хлористым цезием тем же методом было показано наличие четырехцепочечных образцов, и, следовательно, можно было предположить, что исходная ДНК из Е. соИ представляет собой димер из параллельно связанных друг с другом двойных спиралей, причем каждая двойная спираль сохраняется незатронутой при делении клеток. Белковые связи, как, например, в агрегате с молекулярным весом 11-10 , устойчивы к нагреванию в хлористом цезии, хотя эта обработка разрывает димеризующие связи между парами оснований в двухспиральных структурах [1771. [c.559]

При другом подходе были изучены ультрафиолетовые спектры поглощения различных нуклеопротеидов до и после разделения их на белок и нуклеиновую кислоту обработкой додецилсульфатом натрия [367]. Были введены соответствующие поправки на светорассеяние, а экспериментальные условия были таковы, что нуклеиновая кислота при депротеинизации оставалась нативной, т. е. обладала гипохромизмом, а отсюда и любое уменьшение оптического поглощения могло бы показать, что нуклеиновая кислота в интактном нуклеопротеиде обладает меньшим гипохромным эффектом, что в свою очередь указывало бы на конформационные изменения, происходящие при освобождении нуклеиновой кислоты. При разрушении ДНК-содержащих вирусов типа бактериофага Тб и вируса папилломы Шоупа никаких изменений в оптическом поглощении не происходило (хотя ясно, что изолированная ДНК была определенным образом упакована внутри вируса), и в этом случае вторичная структура нуклеиновой кислоты внутри вируса и в изолированном виде, по-видимому, одна и та же. Аналогичным образом оптическое поглощение рибонуклеопротеидных частиц из дрожжей фактически то же самое, что у разрущенных частиц [367 . [c.630]

В качестве примера рассмотрим фракционирование суммарного препарата нуклеиновых кислот, выделенных из клеток Es heri hia oli с помощью депротеинизации смесью фенол — додецилсульфат натрия. [c.118]

Г. Провести дополнительную депротеинизацию препарата смесью фенол/хлороформ, переосадить нуклеиновую кислоту этанолом и отмыть 70%-ным этанолом перед расщеплением ферментами. [c.79]

Разработаны методы выделения ядерной ДНК из каллуса, листьев, протопластов и отдельных клеток. В каждой лаборатории используют определенные варианты методик, которые обычно -подразумевают разрушение свежего растительного материала, удаление неразрушенной ткани фильтрованием, фракционирование клеточных компонентов дифференциальным центрифугированием, обработку ядер ДНКазой, лизис, депротеинизацию и последующую очистку нуклеиновых кислот в градиенте плотности s l/БЭ [6, 16]. В данном разделе изложены методики, которые можно взять за основу при разработке способов выделения ядерной ДНК из различного растительного материала. Кроме того, ядра, выделенные, как указано ниже, могут исполь- [c.254]

Вместе с нуклеиновыми кислотами из геля неизбежно вымываются примеси белков н короткие нити полиакриламида. Для дальнейшей очистки нуклеиновых кислот используют следующие приемы фенольную депротеинизацию, переосаждение этанолом или изопропанолом, осаждение РНК 0,2 М СаС1 при pH 5,5—6 (Doija et al., 1977]. [c.154]

Таким образом, изложенное выше свидетельствует о том, что нуклеино Вая кислота, полученная путем депротеинизации вируса, свободно проникает через все клеточные оболочки, минуя фазу адсорбции, и вызывает в клетке синтез вирусной нуклеиновой кислоты и белка. [c.113]

Фенольный метод. Метод фенольной экстракции, предложенный в 1952 г. Вестфалем с сотр. [844], открыл большие возможности в исследовании нуклеиновых кислот. Авторы обрабатывали бактерии теплой гомогенной смесью фенола с водой, что приводило к раз делению смеси на две фазы. Бактериальные белки растворялись в фенольной фазе, а нуклеиновые кислоты и полисахаридд — в водной фазе Этот метод был применен Шустером с сотр. [717] для выделения РНК из вируса табачной мозаики, а Гирер и Шрамм, несколько видоизменив методику, выделили инфекционную РНК из ВТМ [362, 363], В основе современных методов получения вирусных нуклеиновых кислот лежит фенольный метод депротеинизации последних авторов. Все предложенные впоследствии модификации этого метода направлены к приспособлению метода для получения нуклеиновых кислот из разнообразных вирусов. [c.160]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология