Определение неорганического фосфата

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФАТА [c.33]

Реактивы см. определение неорганического фосфата методом [c.35]

Реактивы для определения неорганического фосфата (с. 34). [c.38]

К безбелковому раствору добавляют равный объем 2 н. соляной кислоты, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 10 мин. Затем пробы охлаждают, добавляют 2 н. раствор щелочи в количестве, равном добавленной кислоте, и проводят определение неорганического фосфата. Параллельно проводят определение неорганического фосфата б (с. 35). По разности а—б) рассчитывают количество фосфата глюкозо-1-фосфата в исследуемой пробе. [c.39]

Рис. 16.2. Типичное проточное устройство для системы автоматического анализатора а — определение неорганического фосфата б — определение двуокиси серы 1 — образец

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКИХ ФОСФАТОВ [c.249]

Работа 171. Количественное определение неорганического фосфата в сыворотке крови [c.240]

Определение активности Са2+—АТФ-азы. — АТФ-аза осуществляет гидролиз АТФ при активном транспорте ионов Са + в цистерны саркоплазматического ретикулума. В основе метода — определение неорганического фосфата, освобождающегося при гидролизе АТФ ферментом. [c.246]

Колориметрические методы для определения неорганического фосфата основаны на измерении интенсивности окраски молибденовой рини образующейся при восстановлении фосфорномолибденовой кислоты в кислой среде. Фосфорномолибденовая кислота является продуктом реакции между фосфорной кислотой и молибденовокислым аммо- ]ием. Реакция также протекает в кислой среде [c.33]

Метод Ратбуна и Ветлах в модификации позволяет проводить определение неорганического фосфата в присутствии белка, если его содержание в измеряемых пробах не превышает 50 мкг. В этом случае к 1 мл исследуемого раствора прибавляют 1 мл 3 М Ма-ацетатного буфера, pH 4,3, содержащего 37о формальдегида. Затем добавляют по [c.36]

Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу (с. 34). [c.38]

Глюкозо-1-фосфат принадлежит к легкогидролизуемьш в кислотах фосфорным соединениям. При нагревании в кипящей водяной бане в течение 10 мин в 1 н. растворе сильной кислоты он полностью расщепляется с образованием неорганического фосфата. Такими же свойствами обладают АТФ (отщепляются две частицы фосфорной кислоты) и АДФ (отщепляется одна частица фосфата). В отсутствие АТФ и АДФ глюкозо-1-фосфат определяют по разности количества неорганического фосфата, определяемого в пробах после 10-минутного кислотного гидролиза айв пробах без гидролиза б. Если в растворе присутствуют АТФ или АДФ, их необходимо предварительно удалить в виде бариевых солей. Определение неорганического фосфата лучше проводить, используя модификацию метода по Херсу (с. 35). [c.39]

Минерализация. Количество взятого на минерализацию раствора зависит от содержания в анализируемом фосфорсодержащем органическом соединении фосфата и от чувствительности используемого для определения фосфата метода. При определении неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу на минерализацию берут такое количество исследуемого раствора, чтобы в 1 мл полученного после минерализации и нейтрализации раствора содержалось от 0,2 до 1,0 мкмоль фосфата. 1—2 мл взятого на анализ раствора помещают в небольшую колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) или жаростойкую пробирку, добавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и, укрепив колбу (пробирку) слегка наклонно, осторожно нагревают раствор на горелке, песчаной бане или на специальной электрической плитке до тех пор, пока почти полностью выпарится вода и раствор в колбе приобретет бурую окраску (если органического вещества в пробе мало, то по-бурения можно и не заметить). После этого колбу (пробирку) охлаж- [c.44]

Определение фосфора. По окончании минерализации содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу на 25 мл или в мер- ную пробирку на 10 мл, добавляя небольшими порциями воду и тщательно ополаскивая колбу Кьельдаля. Первую порцию воды в колбу Кьельдаля следует добавить очень осторожно, так как при этом происходит сильное разогревание раствора и создаются условия для гидролиза пирофосфата, который может образоваться в процессе минерализации при длительном нагревании фосфата с концентрированной серной кислотой. В мерную колбу или пробирку, заполненную приблизительно наполовину разбавленным минерализатом, добавляют, 1—2 капли фенолфталеина и нейтрализуют кислоту сначала 5 н., а затем 0,5 н. раствором щелочи до слаборозовой окраски, доводят водой до метки и перемешивают. Из каждой колбы (пробирки) отбирают по две параллельные пробы и проводят определение неорганического фосфата (с. 33). При содержании в образце небольших количеств фосфата (до 0,1 мкмоль на пробу) удобно пользоваться методом, предложенным Бартлеттом (с. 48). [c.45]

Реактивы для определения неорганического фосфата (по методу Херса, см. с. 35). [c.59]

Определение активности образующейся фосфорилазы а. Активность фермента измеряют по обратной реакции (синтезу гликогена), сопровождающейся выделением неорганического фосфата. К малеат-ному буферу (0,1 М), pH 6,5, содержащему 0,1 М глюкозо-1-фосфат — 2%-ный гликоген, добавляют равный объем раствора, полученного после киназной реакции. Реакцию проводят 5 мин при 30° С. Останавливают реакцию добавлением реактивов для определения неорганического фосфата. Количество образовавшегося фосфата рассчитывают по калибровочному графику. [c.224]

Определение неорганического фосфата. К 1 мл фильтра добавляют 1,0 мл воды, 0,4 мл молибденового реактива и 0,1 мл.рабочего раствора эйконогена, хорошо перемешивают и оставляют на 10 мин в термостате при 37 °С. Раствор быстро охлаждают и тотчас же колориметрируют на ФЭКе. Одновременно строят калибровочный график по стандартным растворам фосфата, содержащим от 0,2 до 2 мкмоль фосфата в пробе (с. 34). По разности содержания неорганического фосфата в пробах после ферментативного гидролиза и в контрольной пробе рассчитывают количество фосфата, образовавшегося в процессе ферментативного расщепления АТФ. Затем рассчитывают активность миозина — в мкмолях превращенного субстрата за 1 мин на 1 мг белка. [c.394]

Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске и Суббароу. [c.399]

Осадок белка удаляют фильтрованием. На определение неорганического фосфата из каждой пробы после фильтрования берут по 0,8 мл ТХУ-фильтрата, добавляют по 0,1 мл неразведенного раствора эйконогена, 0,3 мл молибденового реактива и по 1,3 мл воды. Через 10— 15 мин выдерживания на водяной бане (или в термостате) при 37— 40 °С пробы колориметрируют. Учитывая нестабильность стандартной кривой при определении неорганического фосфата методом Фиске— Суббароу, желательно одновременно с опытными пробами ставить 3— [c.399]

Для определения неорганических фосфатов можно также рекомендовать молибдатный метод Бенедикта и Тайса, который основан на реакции фосфата с молибденовокислым аммонием. Образующийся фосфорно-молибденовокислый аммоний восстанавливают раствором бисульфита натрия и гидрохинона с появ- [c.295]

Если определяется растворимый в кислотах или неорганический фосфор в цельной крови или в эритроцитах, то нужно осадить белки без предварительного лакирования кислым осадителем (20%-ная трихлоруксусная кислота), чтобы избегнуть гидролиза органических эфиров фосфорной кислоты. При определении неорганических фосфатов в фильтрате нужно по той же причине избегать нагревания и работать возможно быстро. Поэтому при определении неорганического фосфора в цельной крови или эритроцитах хороший для сыворотки способ Бенедикта менее подходит, чем колориметрический метод Бриггса, не требуюший нагревания. [c.279]

Для определения неорганического фосфата аликвотную часть реакционной смеси (0,2 мл) переносят в мерную колбу емкостью 2Ъмл, содержащую 18—19 мл воды. К смеси прибавляют 2 мл 60 /6-ной хлорной кислоты, вращая колбу, чтобы избежать высокой локальной концентрации кислоты. Затем прибавляют 2 мл амидольного реагента (профильтрованного раствора 2 г дихлоргидрата 2,4-диаминофенола и 40 г бисульфита натрия в 200 мл воды) ж мл раствора молибдата аммония (8,3 г в 100 мл воды) объем смеси доводят до метки и смесь перемешивают. Через 10—30 мин измеряют абсорбцию при 660 ммк и сравнивают ее с абсорбцией стандартного раствора, приготовленного таким же методом. Стандартный раствор ортофосфата 1,0967 г аналитически чистого монозамещенного фосфата калия растворяют в 250 мл воды. Этот раствор, содержащий 1 мг фосфата в 1 мл, разбавляют при необходимости до содержания фосфата 5—75 у. [c.144]

Ферментативное дефосфорилирование [20]. Внутриклеточную тейхоевую кислоту из La toba illus arabinosus 17-5 (6,5 мг) растворяют в 25 мл 0,05 М раствора карбоната аммония (pH 9,3), содержащего 0,8 мг кишечной фосфатазы. Раствор инкубируют при 37 °С. В ходе инкубации отбирают аликвотные части растворов по 0,2 мл для определения общего содержания фосфата и аликвотные части по 2,0 мл для количественного определения неорганического фосфата [39]. [c.137]