Примеры применения аффинной хроматографии

Несмотря на объективные недостатки, метод аффинной хроматографии во многих случаях не имеет альтернативы в биохимическом анализе. С методиками приготовления аффинных сорбентов, техникой эксперимента и конкретными примерами практического применения метода можно познакомиться в специальных изданиях [89, 96]. [c.202]

Примеры применения аффинной хроматографии [c.282]

Примеры применения аффинной хроматографии на агарозе и ее производных [c.36]

В настоящее время наиболее распространенными методами иммобилизации ферментов являются методы ковалентного присоединения к нерастворимым носителям. Требования, предъявляемые к свойствам нерастворимых носителей, перечень этих носителей и ряд методов для присоединения белков детально обсуждаются в гл. 8. Некоторые методы, пригодные для характеристики иммобилизованных ферментов, содержатся в гл. 9. Несмотря на то что стеклянные носители редко применяются в аффинной хроматографии, они наиболее часто используются для иммобилизации ферментов для этих целей также весьма полезными, по-видимому, могут оказаться некоторые керамические носители. Очень много данных, подкрепленных многочисленными примерами иммобилизованных ферментов, их свойств и применения, имеется в ряде обзоров и монографий [2, 15, 37, 39, 44, 57, 58]. [c.422]

Основной областью применения аффинной хроматографии служит очистка белков, мембран и полисахаридов Некоторые примеры этого приведены ниже. [c.218]

Примером применения аффинной хроматографии для очистки ферментов может служить выделение стафилококковой нуклеазы (фермен- [c.161]

Области применения аффинной хроматографии многочисленны и разнообразны и не ограничиваются только теми, которые перечислены выше. В последующих разделах рассмотрены некоторые примеры, иллюстрирующие возможности аффинной хроматографии. [c.282]

Методы, основанные на применении иммобилизованных биологических молекул, оказались полезными во многих областях [38]. Многочисленные примеры демонстрируют, каким образом биологически активные вещества, связанные с нерастворимыми матрицами, используются в аффинной хроматографии. Исследование ферментов, связанных с нерастворимыми матрицами, так же как и их применение, тесно связано с аффинной хроматографией. Развитие технологии иммобилизации ферментов происходило одновременно с работами в области аффинной хроматографии. Изучение иммобилизованных ферментов — один из наиболее развивающихся разделов современной энзимологии. Кроме того, иммобилизованные ферменты являются также наиболее изученными аффинными лигандами, и поэтому им посвящена отдельная глава. [c.420]

Как уже говорилось в начале разд. 1.2, в основе различных хроматографических методов лежит различие в сродстве. В историческом введении (разд. 1.1) указывалось, что название аффинная хроматография было предложено для относительно нового и эффективного хроматографического метода, в котором сродство играет особенно важную роль. Это обстоятельство, а также отсутствие более подходящего названия привело к тому, что указанный термин быстро стал общепринятым, хотя в принципе против применения здесь слова хроматография можно возражать. В ряде случаев аффинной хроматографией называют методику, в которой в действительности имеют место избирательная сорбция и десорбция , а хроматографический процесс как таковой отсутствует (см. разд. 1.2). Этот пример не единичен. Ряд специальных методов разделения не укладывается в рамки общей схемы, и тем не менее их все-таки называют хроматографическими. Все сказанное подтверждает, что необходима простая и практическая терминология, пусть даже не идеально точная. [c.26]

Эффективность применения моноклональных антител может быть продемонстрирована на примере выделения общего лейкоцитарного антигена (L- -антигена) тимоцитов крысы [7]. На первом этапе с помощью аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине чечевицы и гель-фильтрации в присутствии дезоксихолата получают частично очищенный препарат мембранного гликопротеина тимоцитов с молекулярной массой [c.188]

Принимая во внимание, что суммарная концентрация доступных положений матрицы /пх должна быть рассчитана по экспериментальным данным, колоночная хроматография представляет собой простейший метод количественной аффинной хроматографии, поскольку найденное из эксперимента значение гпх затем будет использоваться в расчетах других экспериментов, выполненных на той же колонке с тем же растворенным веществом. Однако в некоторых примерах, особенно в случае биологических аффинных матриц, таких, как миофибриллы мышц [28], колоночный метод нельзя использовать из-за проблем, связанных со скоростью потока, поэтому в количественной аффинной хроматографии находят применение также эксперименты распределительного равновесия. [c.197]

В ряде случаев успешные примеры применения ХМК получены и в аффинной хроматографии. [c.452]

Различия по специфичности к лигандам используются в методе, который называется аффинной хроматографией или хроматографией по сродству. В этом варианте хроматографии в качестве сорбента применяют инертный полимер с присоединенным к нему специфическим лигандом того белка, который хотят выделить. Суть метода и пример применения представлены на рис. 1.35 и 1.36. [c.56]

Существует несколько блестящих примеров успешного применения окрашенных адсорбентов, но в большинстве случаев их используют как определенный этап очистки, которому предшествуют или за которым следуют другие этапы. Правильное применение принципов аффинной элюции к процессу хроматографии, несомненно, способствовало бы усовершенствованию некоторых опубликованных методик. [c.167]

Очевидно, что такой сорбент частично сохраняет анионные свойства за счет остаточных свободных аминогрупп АЕ-целлюлозы, поэтому аффинную хроматографию следует вести в присутствии достаточной концентрации соли, блокирующей неспецифическую ионную сорбцию по этим группам [Feist, Danna, 1981]. Использование этого сорбента для разделения меркурированной и немеркурированной РНК рассмотрено ниже как пример применения аффинной хроматографии. [c.397]

Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]

Чаще всего ферменты проявляют высокую специфичность по отношению к своим субстратам и ко-ферментам, поэтому наиболее подходящими лигандами служат производные субстратов и коферментов, ковалентно связанные с носителем, например с сефадексом. Они могут быть присоединены к носителю либо непосредственно, либо через связующую ножку (линкер) из 3—8 атомов углерода. Использование линкера помогает разрешить проблемы, связанные с тем, что присоединение лиганда к носителю может препятствовать его взаимодействию с ферментом. Вместе с тем введение гидрофобного линкера иногда осложняет выделение из-за проявления эффектов хроматографии на гидрофобных лигандах (см. йиже). Примером успешного применения аффинной хроматографии может служить очистка множества различных дегидрогеназ на аффинных [c.70]

Ряд примеров применения иммобилизованных ферментов в аффинной хроматографии приведен в гл. 11. В табл. 11.1 перечислены ферменты, функционирующие как аффииные лиганды при выделении ряда веществ. В разд. 11.3 обсуждается использование иммобилизованной нуклеазы для выделения меченых пептидов из ее ак- [c.436]

В количественные выражения для аффинной хроматографии (табл. 1 и 2) входит концентрация свободного лиганда ms, которая совпадает с полной концентрацией лиганда nis в смеси растворенного вещества и лиганда только в случае, когда S не взаимодействует с А или если fhs >niA- Первоначально [3 ffis рассматривалась как наиболее доступная экспериментальная величина, и поэтому в графиках для количественного анализа моновалентных растворенных веществ в качестве концентрации лиганда чаще всего использовали значение а не тз. Однако поскольку в этом случае графики были нелинейны (примеры 1 и 3), то необходимо будет выполнять такие нежелательные построения, как проведение касательных в точках 1/ms- O. Далее, теоретически [17—19] вполне вероятно, что отклонение от ли-нейности может быть обусловлено мультивалентностью раство-зенного вещества, вследствие чего применение касательных для расчетов оказывается неправильным подходом. Поскольку величины, полученные с использованием ms, нельзя считать достоверными, то надо определить nis в смеси растворенное вещество— лиганд. [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология