Зонный электрофорез (электрофорез в пористой среде)

Электрофорез в пористой среде можно вести как в горизонтальном, так и в вертикальном направлении. В первом случае часто говорят об электрофорезе в блоке , а во втором случае — в колонке . Нам кажется более оправданной классификация, при которой различие проводится в зависимости от способа извлечения зон если после опыта зоны вытесняются новыми порциями растворителя вдоль направления движения, прибор называется колонкой . Блоком же следует называть прибор, в котором предусмотрено механическое разделение пористого носителя на слои, каждый из которых промывается отдельно. [c.80]

ЗОННЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ (ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОРИСТОЙ СРЕДЕ) [c.25]

При зонном электрофорезе электромиграция заряженных частиц образца происходит в стабилизующей среде, которая удерживает частицы после выключения тока. Для обнаружения разделяемых компонентов стабилизующую пористую среду обрабатывают подходящими фотометрическими реагентами. [c.465]

Положение резко изменилось после появления метода зонного электрофореза. Зонный электрофорез основан на электромиграции ионов не в свободном растворе, как в случае фронтального метода, а в растворе, пропитывающем пористую среду, называемую также пори- [c.25]

Однако эти преимущества достигаются за счет меньшей точности по сравнению с методом подвижной границы (особенно в отношении определений подвижности и изоэлектрической точки). Наличие стабилизирующей пористой среды, необходимой при зонном электрофорезе, создает новые условия, влияние которых на получившиеся результаты иногда трудно учесть. [c.26]

Поэтому основная задача теории зонного электрофореза заключается в определении влияния всех факторов, обусловленных пористой средой, на миграцию ионов и во введении соответствующих поправок в основное уравнение подвижности (2.3). [c.27]

Пористая среда в зонном электрофорезе вносит существенные изменения в миграцию ионов в электрическом поле. Пористый носитель заполняет объем, образуя систему капилляров, в которых находится раствор электролита и по которым происходит движение ионов. [c.33]

В зависимости от точки зрения на причину, вызывающую замедление ионов в пористой среде, в настоящее время существуют несколько теорий зонного электрофореза. [c.33]

В пористых средах (зонный электрофорез) [c.145]

Разделение заряженных соединений с помощью электрофореза можно проводить не только в растворе, но и в различных пористых инертных средах, таких, как крахмал, силикагель, полиакриламидный гель, смоченная фильтровальная бумага. Раствор смеси веществ обычно наносят в виде четкого пятна или зоны, а затем проводят электрофорез, добиваясь иногда полного разделения всех компонентов смеси. Этот процесс, называемый зонным электрофорезом, применяют как для аналитических, так и для препаративных целей. Электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия широко используют для определения молекулярных масс полипептидов (разд. 5.1.7) метод иммуноэлектрофореза рассмотрен в гл. 30. [c.163]

В большинстве современных методов электрофореза для предотвращения смешивания зон миграция ионов проводится в пропитанных электролитом пористых инертных средах. Для этой цели используются фильтровальная бумага, стеклянное волокно, стеклянный или кварцевый порошок, крахмал, агар-агар. Во всех этих наполнителях миграция ионов должна начинаться из первоначально узкой зоны. Различная подвижность ионов приводит к полному разделению смеси с образованием дискретных зон, аналогичных зонам при хроматографическом разделении. [c.36]

Здесь будут рассмотрены только те варианты электрофореза, которые пригодны для разделения существенных количеств белковых смесей с выделением отдельных фракций. Применение для этой цели свободного электрофореза в растворе без каких-либо опорных сред затруднено теми же обстоятельствами, что и препаративное ультрацентрифугирование. При попытке выделить ту зону раствора, где расположена та или иная фракция, легко возникают токи жидкости, размывающие границы и перемешивающие содержимое различных зон. Предлагалось немало методических приемов для преодоления этого препятствия. Так, например, на определенной стадии процесса часть кюветы отсекали вдвигающейся стеклянной пластинкой. Применялись также пористые перегородки, не препятствующие движению белковых частиц, но предотвращающие смешивание при отборе части содержимого кюветы. Эти и другие аналогичные приемы не получили широкого распространения. Причина этого прежде всего в том, что они позволяют получать в чистом виде только фракции, занимающие в кювете крайние положения. Кроме того, производительность этих методов относительно невелика, а необходимое оборудование довольно дорого и сложно в эксплуатации. [c.30]

И менее точен, но зато значительно проще, чем метод Тизелиуса. На полоску фильтровальной бумаги, увлажненной буферным раствором, наносят в форме поперечной черточки или пятна исследуемый биоколлоидный раствор. Полоску помещают в горизонтальном положении в закрытое пространство, а концы ее погружают в буферный раствор, где находятся электроды. После подключения источника электродвижущей силы электрическое поле вызывает движение компонентов, находящихся в черточке или пятне, вдоль полоски. Скорость перемещения компонентов зависит от их электрофоретической подвижности. Через некоторое время электрофорез прекращают, бумагу высушивают и погружают в раствор красителя, который на биоколлоиде адсорбируется сильнее, чем на бумаге. По полученному изображению видно положение компонентов в конце электрофореза, и можно судить об их числе и электрофоретической подвижности. Из сказанного выше видно, что бумага играет роль пористой среды, препятствующей растеканию компонентов и их конвективному перемешиванию со средой, в которой протекает электрофорез . В последнее время вместо бумаги используют гелеобразные среды (агар-агар, желатин), которые дают более резко очерченные зоны. Электрофорез на бумаге (и в других средах) сопровождается побочными явлениями, такими, например, как перенос вещества, вызываемый миграцией испаряющегося буфера (Машбёф, Ребейрот и др., 1953 г.). Кроме того, было установлено (Шелудко, Константинов, Цветанов, 1959 г.), что, например, в желатине не только сама электрофоретическая подвижность некоторых красителей меньше, чем в воде или водных растворах, но и соотношение между подвижностями компонентов в этом случае совсем иное. Эти особенности метода еще не до конца изучены. Поскольку рассматриваемый метод имеет важное практическое значение, различные проблемы создаваемой в настоящее время теории электрофореза в пористых и гелеобразных средах п разнообразные методы его использования являются предметом многих научных трудов. Некоторое представление о них читатель может получить из монографии [6 1. [c.158]

Зонный электрофорез чаще всего реализуют в среде пористого наполнителя, пропитанного р-ром электролита. Разделяемая смесь должна бьггь первоначально сосредоточена в [c.436]

Существует много электрофоретических методов. Наиболее эффективным из них является зональный электрофорез. При зональном электрфорезе смесь исследуемых веществ помещают в виде узкого слоя (зоны) на твердую поддерживающую пористую среду. В течение некоторого времени вещества с различной подвижностью разделяются на отдельные зоны и могут быть по отдельности извлечены или идентифицированы без извлечения. [c.121]

Зонный электрофорез. Главное отличие зонного электрофореза от фронтального состоит в том, что при зонном э,лектрофорезе используется поддерживающая среда, в которой осуществляется движение вещества, тогда как при фронтальном электрофорезе ионы свободно перемещаются в растворе. Поддерживающей средой, или носителем, служат обычно бумага, целлюлоза, крахмальные гели или блоки, пористые по,лиуретаны. и полиакрил-алшдиые гели. На фиг. 24 приведена схема прибора для зонного электрофореза. [c.77]

При зональном электрофорезе необходимо принимать специальные меры для предотвращения конвекционного перемешивания зон. Это достигается применением поддерживающих пористых сред различных гелей, порошков, бумаги и т. д. В последнее время начал распространяться метод зонального электрофореза, в котором роль поддерживающей среды играет так называемый градиент плотности. Поддерживающая среда влияет на скорость электрофоретического перемещения, притом часто неконтролируе- [c.41]

Как уже отмечалось, адсорбция является одной из причин размытия зон в пористой среде. Однако адсорбция может способствовать более эффективному разделению, если она увеличивает разницу в подвижностях ионов. Еще в 1939 г, Стрейн [116] впервые применил комбинацию адсорбционной хроматографии и электрофореза при разделении органических красителей в колонке, заполненной адсорбентом. Позднее электрохроматографию на бумаге применил Хаугард и Кронер [117]. Было замечено [116], что размытие зон меньше в случае более слабых адсорбирующих материалов, например песка или небольших стеклянных бусинок. Этот вывод весьма важен для определения подвижностей в пористой среде. [c.65]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология