Ступенчатое элюирование (см. разд

Как правило, состав элюента нужно выбирать с таким расчетом, чтобы коэффициент разделения, равный отношению коэффициентов распределения, достигал высоких значений. Следует, однако, отметить, что на практике оптимальный состав элюента не всегда совпадает с составом, соответствующим максимальному значению коэффициента разде,ления. Причина этого обстоятельства состоит в расширении кривых элюирования, возникающем при высоких коэффициентах распределения (т. е. при высоких значениях объемов элюента, отвечающих максимумам на кривых элюирования) (ср. уравнение 6.5). При этом время, требуемое для разделения, даже увеличивается (ср. также [42]). Поэтому желательно использовать такой элюент, который дает высокий коэффициент разделения, но не слишком высокие коэффициенты распределения. Такое компромиссное решение удается найти достаточно часто. Если это возможно, то элюент нужно выбрать так, чтобы он обеспечивал высокий коэффициент разделения при коэффициентах распределения не выше 30. Иногда удобно последовательно применять несколько элюентов с возрастающей элюирующей способностью (ступенчатое элюирование), чтобы более прочно удерживаемые ионы элюировались по возможности малыми объемами раствора. Градиентное элюирование также можно применять для предотвращения излишнего расширения кривых элюирования. [c.183]

Ступенчатое элюирование (см. разд. III, Г, 1) [c.40]

Ход элюирования регистрируют по изменению оптической плотности при 280 нм (или с помощью методов, описанных в разд. 1.2.2.1), элюат собирают по фракциям. Компоненты смеси, удерживаемые ионитом, элюируют, изменяя ступенчато или плавно ионную силу или pH рабочего буфера. Элюирование в ступенчатом градиенте приводит к появлению артефактов и вследствие этого применяется все реже. [c.42]

Весьма поучительным примером является разде.ление никеля (И), кобальта (И), железа (III) и цинка (И) по Краусу и Моору [67] этот пример необходимо изучить каждому, кто собирается работать в этой области. В основе методики лежит ступенчатое элюирование из сильноосповного анионита с помощью соляной кислоты. Перед началом опыта колонку с анионитом заполняют концентрированной (12 М) соляной кислотой затем вводят металлы в малом объеме (1 мл) концентрированного солянокислотното раствора. В этих условиях никель (II) не удерживается анионитом и немедленно проходит через колонку. Для удаления остатков никеля колонку промывают концентрированной кислотой. Затем элюируют кобальт (II) 4 М соляной кислотой. В этих условиях железо (III) и цинк (II) лишь немного перемещаются вниз по колонке. Третья стадия состоит в элюировании железа (III) 0,5 М кислотой. Затем в виде отдельной фракции элюируют цинк (И), для чего снижают концентрацию кислоты до 0,005 М. Подобрав подходящие условия, можно добиться количественного разделения всех ионов в растворе, содержащем, кроме перечисленных выше ионов, еще марганец (II) и медь (II) (рис. 10. 19). [c.207]

Представлявшие ранее несомненную ценность методы адсорбционной хроматографии на колонках, заполненных смесью угля и целита [2], а также методы распределительной хроматографии на порошкообразной целлюлозе [3] в настоящее время утратили свое значение в качестве аналитических процедур, но сохранили определенную важность для препаративных целей. В качестве примера можно привести предварительное фракционирование на колонке (58X5 см), заполненной смесью угля и целита (в соотношении 2 3), олигосахаридов, образующихся при частичном гидролизе 50 г ксилана березы [4]. Ступенчатое элюирование водными растворами этанола с увеличивающейся концентрацией последнего дает в результате четырех хроматографических разделений (в каждом используется 25% гидро-лизата) обогащенные фракции, из которых далее при помощи других методов легко выделить олигосахариды вплоть до моносахарида (см. разд. 7.2.3). [c.6]

Циркуляция служит приемом, который используют в препаративной ЖХ для того, чтобы увеличить длину хроматографического слоя и избежать затрат на покупку и использование длинных колонок или дополнительных секций для колонок. На практике этого достигают путем добавления крана в гидравлическую систему, который позволяет направлять элюент или некоторые его определенные части из выхода колонки назад, на вход колонки (см. разд. 1.7.2.2). Сложные образцы, особенно содержащие сильноудерживающиеся компоненты, для элюирования которых может потребоваться ступенчатый или непрерывный градиент, обычно не подходят для использования метода циркуляции. Образцы такого типа лучше всего фракционировать на ранних стадиях методами, позволяющими разделять соединения по классам, как отмечено в разд. 1.2.3. Затем на более поздних стадиях выделения очень мощным средством разделения соединений может быть метод циркуляционной ЖХ, позволяющей проводить разделение при низких а (<1,3), когда в образце содержится много соединений, присутствующих в небольших количествах. [c.42]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

Успешное масштабирование градиентных систем требует просто разумного подхода с учетом некоторых рекомендаций, предложенных в этой главе для изократического и ступенчатого градиентного препаративного ЖХ-разделения. Следует позаботиться о воспроизводимости наклона или формы градиента, учитывая любые различия в геометрии колонки (длина, объем), химическую природу насадки (разд. 1.5.1), способ создания градиента, характеристики предколоночного смесителя и объем задержки градиента. Во всех случаях разделения основываются на коэффициенте распределения компонента между неподвижной и подвижной фазами (к или йщ). Непрерывный градиент изменяет значение к известным образом по зависимости, аппроксимируемой серией небольших изократических ступеней. Увеличивающаяся сила растворителя в течение элюирования сжимает полосу образца. Результатом этого являются узкие пики и уменьшение хвоста пика даже прн условии больших [c.69]

В особо трудных случаях, или когда компоненты образцов сильно отличаются по полярности и растворимости (требуется ступенчатый градиент), может стать необходимым нредадсор-бировать их на части неподвижной фазы. Для этого растворяют образец в хорошем растворителе, обычно намного более сильном, чем растворитель, который может быть использоваи в качестве подвижной фазы. Затем полностью адсорбируют этот раствор на достаточном количестве неподвижной фазы. Путем тщательной сушки, например с помощью роторного испарителя под вакуумом и осторожного нагревания, удаляют все следы растворителя, чтобы покрыть насадку образцом. При этом надо быть осторожным и не допустить разложения образца. Затем сухой материал помещают на вход препаративной ЖХ-колонки или в отдельную колонку, подсоединенную к входу первой колонки. Затем через колонку пропускают подвижную фазу или проводят элюирование с помощью ступенчатого градиента. Такая методика достаточно хороша для фракционирования образца при условиях градиента, однако не дает хороших разделений в изократических системах. Медленное растворение компонентов образца приводит к интенсивному расширению полосы, размыванию фронта пика (ср. разд. 1.4.42), и результаты редко бывают удовлетворительными. В таких случаях попытайтесь найти лучшее средство разделения (например, ситовую хроматографию с использованием подходящего раствори-теля в качестве подвижной фазы). [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология