Диализ и молекулярная фильтрация

Диализ и молекулярная фильтрация [c.165]

Осадки белков, полученные при высаливании, обычно очищают от примеси солей методом диализа или методом гель-фильтрации. В основе этих методов лежит различие в молекулярной массе белка и соли. [c.26]

Гель-фильтрация обладает рядом преимуществ по сравнению с диализом как метод очистки растворов от солей. Метод позволяет легко отделять от макромолекул не только соли, но и другие молекулы с низкой молекулярной массой. Например, при помощи гель-фильтрации можно отделять нуклеиновые кислоты от нуклеотидов и фенолов, полисахариды от сахаров, белки от аминокислот и других низкомо лекулярных соединений. [c.477]

Растворы белков обладают многими свойствами, которые характерны для лиофильных коллоидных растворов. Молекулы белков не проходят через полупроницаемые мембраны, и это используется для их очистки от низкомолекулярных примесей при помощи диализа. Представляет большой интерес определение размеров, формы белковых молекул и молекулярных весов белков. Для этой цели используется целый ряд физико-химических методов. Так, белки в растворах седиментируют в ультрацентрифугах при ускорениях до 200 ООО g , величины констант седиментации колеблются от 1 Ю до 90—100 сек. Коэффициенты диффузии — в пределах от 0,1 10 до 10- 10 средний удельный объем — около 0,75 см г. Размеры и форму (асимметрию) частиц белка определяют, кроме того, методами светорассеяния, двойного лучепреломления в потоке, измерениями вязкости, коэффициента вращательной диффузии, но, по-видимому, наиболее точно — прямым наблюдением в электронном микроскопе в тех случаях, когда молекулы белка достаточно велики и когда удается преодолеть технические затруднения. Молекулярные веса, кроме названных выше способов, определяют методами осмометрии, гель-фильтрации, исследованием монослоев белков на поверхности жидкой фазы, светорассеяния и др. [c.30]

Селективное растворение. Электролитическое растворение. Возгонка. Вакуум-экстракция газов из металлов. Сухое озоление органических проб. Зонная плавка. Пробирная плавка Фильтрация. Центрифугирование. Флотация Осаждение. Электроосаждение. Адсорбция. Разделение с помощью молекулярных сит. Ионный обмен. Экстракция. Испарение. Флотация. Кристаллизация. Электрофорез. Диализ. Ультрафильтрация. Ультрацентрифугирование [c.16]

Некоторые физико-химические особенности современных амфолитов для ИЭФ не позволяют пока считать их вполне совершенными в отношении функций, которые они выполняют. Желательно, например, чтобы амфолиты максимально отличались от белков по способу окраски, легкости отделения и др. Подробно изучены в этом плане амфолины фирмы LKB . Оказалось, что они окрашиваются нингидрином и многими красителями для белков правда, ниже приведены рецепты красителей, позволяющих в значительной степени обойти это затруднение. Молекулярная масса амфолинов ограничена, как указывалось, в основном интервалом в 300—900 дальтон, что позволяет отделить их от сфокусированных белков после опорожнения колонки или элюции из геля с помощью гель-фильтрации, диализа или высаливания. Однако, хотя и в небольшом количестве, среди амфолинов имеются молекулы с массой 20—30 тыс. [c.18]

В соответствии с данным выше определением в последующих примерах речь идет о разделении веществ, сильно различающихся по молекулярному весу. Именно благодаря гель-фильтрации раздёление на пористых гелях успешно конкурирует с давно применяющимся диализом. По сравнению с диализом гель-фильтрация обладает тем преимуществом, что эксперимент не требует столь длительного времени, а если умело подобрать условия, то время разделения не зависит от количества смеси. Этот фактор может оказаться решающим при изучении лабильных природных соединений. Единственный довод против гель-фильтрации— это возможное разбавление высокомолекулярного компонента (при диализе этого не происходит). Однако разбавление имеет место лишь в том случае, когда объем образца не соответствует объему геля. Точное соблюдение объемных соотношений (см. гл. П1) может оказать решающее влияние на успешное разделение. (Далее это положение поясняется на конкретном примере, см. фиг. 22.) [c.135]

С помощью диализа ыло изучено разделение белков с молекулярным весом до 45 ООО [37]. Показано, что скорость диализа обратно пропорциональна размеру белковой молекулы. Сравнительно недавно проведено фракционирование белков, пептидов и аминокислот путем фильтрации через декстрановый гель, содержащий лишь незначительное количество карбоксильных групп [127а]. Здесь разделение основывается па величине молекул, причем молекулы с большим молекулярным весом двигаются быстрее. [c.397]

Скорость диффузии растворенного материала в инертную незаряжен ную трехмерную структуру зависит как от размера пор этой структуры, так и от размеров молекул диффундирующего вещества. Это явление служит основой для проявления эффекта молекулярных сит [1], который изменяется в тех случаях, когда материал сита содержит ионные группы, как в ионообменных смолах, или при взаимодействии диффундирующего вещества с ситом за счет адсорбции или комплексообразования. С практической точки зрения желательно, чтобы сито имело либо форму мембраны, что используется при проведении диализа (стр. 299) и не будет здесь рассматриваться, либо форму колонки из дискретных частиц. Наиболее удобным материалом для этого последнего применения является сефадекс — поперечно сшитый декстран разной степени пористости. Методика разделения аналогична методике хроматографирования на колонках и называется гель-фильтрацией [2] (см. стр. 273). [c.280]

Диализ как стадия очистки не нашел широкого применения главным образом потому, что молекулярные веса гликопептидов нередко позволяют им достаточно быстро диффундировать через обычные мембраны [29]. Термическая обработка труб Вискинга (90°, 24 час на воздухе) снижает их пористость [30]. Мембраны, обработанные таким способом, были использованы для очистки гликопептидов [26]. Ацетилирование целлюлозных труб Вискинга также повышает их способность задерживать вещества с молекулярным весом выше 1400 [31]. Гель-фильтрация, зависящая главным образом от размеров молекул, в значительной мере вытеснила диализ как способ фракционирования. Этот метод нашел широкое применение при выделении гликопептидов и в настоящее время является, по-видимому, наиболее часто применяемой процедурой. Некоторые данные о методах выделения приведены в табл. 1. [c.242]