Разделение и очистка белков

Ассистент Сведберга Арие Вильгельм Каурин Тиселиус (1902— 1971), также швед, в 1923 г. разработал более совершенный метод разделения гигантских молекул, основанный на характере распределения электрического заряда по поверхности молекулы. Этот способ — электрофорез — оказался особенно важным при разделении и очистке белков. [c.129]

Подберите к пронумерованному методу разделения и очистки белков их соответствующие свойства, на которых основан данный метод [c.31]

Разделение и очистка белков [c.42]

В настоящее время мы должны отмести все предрассудки о якобы множественности и непдентичности белковых молекул, о якобы невозможности полного разделения и очистки белков и т. д. Все это опровергнуто опытом. Строение каждого белка полностью во всех деталях генетически детерминпровано, и, следовательно, только мутация, клетки приводит к изменению какого-либо белка. Мы увидим в дальнейшем, что простейшие точечные мутации имеют своим конечным результатом химическое изменение белка в одном единственном аминокислотном звене цепи. [c.111]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ И ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БЕЛКОВ И ДРУГИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ [c.121]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Результаты обширных исследований растворимости и прочих свойств белков и простых модельных соединений (включая аминокислоты и пептиды), а также их расширенную теоретическую обработку можно найти в других трудах [9а, 10а, 192]. Следующее ниже описание характера влияния каждой из нескольких важных переменных на растворимость некоторых классов белков дано в качестве руководства для использования при разделении и очистке белков. [c.42]

Другими важными методами разделения и очистки белков являются злектрофо-рез и ионообменная хроматография. Оба метода основаны на различных свойствах частиц, несущих неодинаковый заряд. Величина и знак заряда для каждого белка характеризуются числом ионизируемых боковых групп аминокислотных остатков и, как в случае аминокислот (разд. 1.4.2), могут быть установлены из кривой титрования. Выше ИЭТ находится зона pH с отрицательным, а ниже. ИЭТ — зона pH с избыточным положительным зарядом молекулы. [c.350]

Высаливание. Растворы нейтральных солей широко используются не только для повышения растворимости белка, но и для избирательного осаждения разных белков, т. е. их фракционирования. Процесс осаждения белков нейтральными солями называется высаливанием. Характерной особенностью белков, осажденных в процессе высаливания, является то, что после удаления соли они сохраняют свои нативные биологические свойства. Сушность процесса высаливания заключается в том, что ионы забирают на себя гидратную оболочку белка, одновременно нейтрализуя заряд белковой молекулы. Способность к высаливанию наиболее ярко выражена у многозарядных анионов, в частности у сульфатов. На практике для высаливания чаше всего применяют сульфаты натрия и аммония. Помимо солей для осаждения белков могут быть использованы органические водоотнимаюшие (гидрофильные) растворители — этанол, ацетон, метанол и др. Высаливание достаточно широко применяется для разделения и очистки белков. Для каждого белка существует своя зона высаливания, т. е. диапазон концентраций соли, позволяющий дегидратировать и осадить белок. После удаления высаливающего агента белок сохраняет все свои природные свойства и функции. [c.72]

Агарозные гели с привитыми углеводородными радикалами (алкил- и фе-пил-агарозы) предложены недавно для хроматографического разделения и очистки белков на основе неспецифического взаимодействия с гидрофобной поверхностью ( гидрофобная хроматография — см. Йон, 1972 и Хофсти, 1973). Фенил-агароза наряду с гидрофобным взаимодействием проявляет специфичность к ароматическим веществам (наприМер к белкам с фениловыми и тирозиловыми группами) иа основе я-л взаимодействия ароматических остатков. Элюирование веществ при гидрофобной хроматографии достигается изменением ионного состава раствора, понижением его ионной силы или полярности (например посредством включения этиленгликоля в состав элюента) или с помощью детергентов. [c.209]

Следует остановится на исторически самых старых методах разделения и очистки белков, основанных на фракционном осаждении и соосаждении, т. е. на разнице в растворимости различных белков. В некоторых случаях, когда разница в растворимости белков может быть очень велика, методы осаждения весьма эффективны и сохраняют свое значение и сейчас. Такой случай представляется, например, когда мы выделяем термостабильный белок, не денатурируемый при нагревании из смеси других белков. Мы прибегаем к нагреву смеси и переводим все белки в малорастворимое денатурированное состояние. Подгоняя pH среды к изоэлектрической точке большинства белков, мы осаждаем все термолабильные белки, и в растворе остается лишь термостабильный белок. Так поступают при выделении рибонуклеазы, миокиназы и ряда других белков. Этот прием позволяет избавиться одним ударом от массы балласта и обогатить раствор нужным компонентом во много раз. [c.132]

В 1858 г. Французской Академии наук были доложены результаты работ П. Дени, которые впоследствии сыграли выдающуюся роль в создании методов разделения и очистки белков [144]. ]3,ени изучал растворимость белков животного и растительного происхождения в растворах нейтральных солей. Но значение этих исследований не было оценено в течение довольно долгого времени. Метод, предложенный ученым, начал использоваться только после опубликования работ Т. Вейля (1876—1880 гг.) [468—470]. Широкому применению метода экстракции белков растворами солей весьма содействовали работы Г. Риттхаузена [365—369], который впервые начал систематически исследовать белки растительного происхождения, что впоследствии было продолжено Т. Б. Осборном. [c.43]