Разделение белков

Rf может принимать значения от О до 1, чаще всего 0,90—0,25. Rf зависит от различных факторов стадии проявления хроматограммы сорта бумаги, направления волокон в куске бумаги реакции, применяемой для проявления концентрации разделяемых веществ, температуры, времени проявления и др. Чтобы получить наиболее надежные значения Rf, необходим надлежащий выбор цветной реакции для проявления пятен например, при разделении белков, полипептидов, аминокислот часто употребляют нингидринную реакцию. [c.520]

Для высаливания или желатинирования белков целесообразно приводить их в изоэлектрическое состояние. Этого можно достигнуть, поместив белки в буферный раствор со значением pH, равным их изоэлектрической точке. В других случаях, например при электрофоретическом разделении белков, нужно, чтобы они, наоборот, имели достаточный заряд. Для этого белковую смесь помещают в буферные растворы со значением pH, отличающимся от их изоэлектрической точки. [c.188]

Высаливание лежит в основе одного из методов фракционирования высокомолекулярных веществ, поскольку способность этих соединений выделяться из раствора весьма сильно зависит от их химической природы и резко возрастает с увеличением молекулярного веса. Особенно широко применяется фракционирование с помощью высаливания для разделения белков. При этом высаливание часто сочетают с введением в систему нерастворителя (например, спирта) и охлаждением раствора. Высаливание белков целесообразно проводить при значении pH, близком к изоэлектрической точке, так как при значении pH, большем или меньшем изоэлектрической точки, возрастает заряд и гидратация белковых молекул и увеличивается их растворимость. [c.466]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ [c.88]

Разделение белков сыворотки крови на ДЭАЭ-целлюлозе [c.111]

Комбинированные методы очистки. Помимо индивидуальных методов очистки — ультрафильтрации и электродиализа — известна их комбинация электроультрафильтрация, применяемая для очистки и разделения белков. [c.27]

Согласно той же формуле (18.4) коэффициент диффузии обратно пропорционален вязкости растворителя. Поэтому особенно высокого качества разделения удается достигнуть, проводя электрофорез в гелях, вязкость которых чрезвычайно высока. Для разделения белков и нуклеиновых кислот наиболее широко используются полиакриламидные гели (см. 8.5). С помощью электрофореза в таких гелях удается в один прием разделить десятки компонентов. В качестве иллюстрации на рис. 91 приведен результат разделения смеси фрагментов нуклеиновой кислоты разной длины от 40 до 72 нуклеотидных звеньев. Электрофорезу подвергались фрагменты, меченые радиоактивным фосфором После завершения разде- [c.331]

Цель работы разделение белков с помощью электрического поля и определение их относительного процентного содержания в саркоплазме с помощью денситометра. [c.127]

Для определения относительного содержания отдельных белков в саркоплазме используют метод электрофореза на бумаге. Разделение белков основано на различии в подвижности ионов белковых молекул в электрическом поле. Скорость перемещения молекул пропорциональна величине их свободного заряда. Величина заряда молекул различных белков саркоплазмы неодинакова, а поэтому и скорость их перемещения в электрическом поле тоже разная, что дает возможность разделить белки плазмы на несколько фракций. [c.127]

Многие пленки обладают способностью пропускать через свои поры некоторые молекулы, однако для других молекул эти поры оказываются слишком малыми. Такие пленки называются полупроницаемыми мембранами. Одни из мембран пропускают воду, но не позволяют пройти ионам солей. Другие, с большими порами, пропускают воду, соли и небольшие молекулы, но задерживают белки или макромолекулы, имеющие молекулярную массу порадка нескольких тысяч. В настоящее время возможно изготовление микропористых фильтров со столь однородными размерами пор, что их можно использовать для разделения белков по размеру макромолекул. [c.145]

Рассматривая (Рис.4) распределение фиксировавшихся мутаций, выявленных гфи парном сравнении последовательностей для различных семейств, отметим наблюдающееся разделение белков на два класса. [c.52]

Очистка и разделение белков (наряду с аминокислотным анализом) — основные области применения ионообменной хроматографии. Верно и обратное — в очистке любого белка этот вид хроматографии почти всегда занимает центральное положение. Поэтому при изложении общих соображений о выборе параметров хроматографического процесса в предыдущих разделах этой главы мы имели в виду прежде всего хроматографию белков. Был приведен соответствующий справочный и методический материал, отмечены аспекты, связанные с сохранением биологической активности и возможностью появления артефактов кажущейся утраты ферментативной активности и [c.301]

Наиболее распространено разделение белков электрофорезом, основанным на различиях зарядов макроионов. Скорость движения макроионов зависит от заряда, градиента напряжения электрического поля и вязкости среды. [c.215]

Еще более успешное разделение белков достигается, если в качестве носителя берут набухший крахмал или полиакриламид (электрофорез на гелевом носителе). Многочисленные модификации этого метода описаны в специальной литературе. [c.216]

НЫМ ИХ изоэлектрической точке. В других случаях, например при электрофоретическом разделении белков, нужно, чтобы они, наоборот, имели достаточный заряд. Для этого белковую смесь помещают в буферные растворы со значением pH, отличающимся от их изоэлектрической точки. [c.217]

Первые попытки разделения белков плазмы были основаны на фракционном осаждении их сульфатом аммония или спиртом. Фибриноген легко может быть получен методом высаливания. Электрофоретический анализ кровяной сыворотки показывает наличие в ней четырех основных фракций, названных альбумином и а-, р- и Y- Глoбyл и нa-ми. С улучшением техники разделения было показано, что эти фракции являются не индивидуальными белками, а группами белков, обладающими одинаковылш подвижностями. Дальнейшие успехи, достигнутые в период второй мировой войны Коном и Эдсоллом , были стимулированы большим спросом на пла шу, необходимую для предотвращения шока, зависящего от поддержания осмотического давления белками сыворотки. Цельная плазма содержит протеолитические ферменты, которые в большой мере расщепляют белки плазмы, поэтому получение белковой фракции крови в сухом виде сулило большие преимущества. [c.670]

В ионообменной хроматографии применяют разнообразные сорбенты, используемые как для разделения белков, так и для разделения неорганических ионов и небольших молекул. Эти сорбенты можно разделить на при основных вида ионообменные смолы, пелликулярные материалы и силикагель с химически привитой фазой, обладающей ионообменными свойствами. Пелликулярные сорбенты в настоящее время практически не применяют, их используют лишь для заполнения предколонок и при воспроизведении старых методов. [c.110]

Электрофорезом на бумаге студентам предлагается провести разделение белков сыворотки крови [c.90]

Реактивы для разделения белков с р1<7,5 [c.94]

РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ [c.101]

Разделение белков на колонках с сефадексом. Сухой сефадекс суспендируют в 200-кратном объеме воды и оставляют стоять на 48 ч при комнатной температуре для полного набухания. Набухание можно ускорить, проводя его на кипящей водяной бане в течение 5 ч. [c.107]

Подготовка ионообменников к работе. Использованию ионитов для хроматографического разделения белков предшествует их предвари- тельная обработка. Иониты промышленного изготовления после набухания, во-первых, фракционируют по размеру частиц (однородность частиц сорбентов по размеру — одно из важных условий успешной хроматографии) и, во-вторых, подвергают циклизации — переводу их из одной формы в другую. Катиониты переводят из Ма+-формы в Н -фор-му или наоборот, а аниониты — из С1 -формы в ОН -форму или наоборот. В процессе такой обработки стабилизируется структура ионита и функциональные группы становятся более доступными. Одновременно ионит освобождается от примесей. [c.109]

Адсорбционная (жидкостная) хроматография находит широкое применение для разделения белков. При этом методе адсорбция фракционируемых соединений на сорбенте происходит под действием межмо-лекулярных сил. [c.114]

Рис. 15. Оборудование для хроматографического разделения белков в тонком-слое сефадекса.

Таким образом, к категории слабых могут быть отнесены ионообменники, значительно отличающиеся друг от друга. Для них характерно не толыко сужение рабочего диапазона pH, но и уменьшение прочности сорбции вещества внутри этого диапазона. Слабым ионообменникам, в частности анионитам с замещающими группами диэтиламиноэтила (ДЕАЕ), отдают предпочтение в тех случаях, когда необходимо элюирование в мягких условиях, например, при разделении белков и пептидов. [c.35]

Для разделения белков применяется также ряд др. ана ю-гичных методов, Т. наз, ковалентная хроматогра- [c.221]

Существование И. установлено в 40-50-х гг. 20 в., когда были существенно усовершенствованы методы разделения белков. [c.202]

Белки чрезвычайно разнообразны. При переходе от одного белка к другому не только и зменяется качественный и количественный аминокислотный состав, но наблюдаются также большие различия в ф изико-химических свойствах. Многие белки, подобно альбуминам, образуют в воде коллоидные растворы другие, например глобулины, не растворяются в воде, но растворимы в растворах нейтральных солей (поваренная соль и др.) кератин, эластин, фиброин и аналогичные им белки характеризуются полной нерастворимостью. Между белками, образующими коллоидные растворы, в свою очередь, существуют различия в отношении способности к высаливанию и осаждению. Эти различия в растворимости используются для разделения белков наряду с описанными [c.395]

В ТСХ используются также иониты на основе сефадексов — сшитых декстранов. Это диэтиламиноэтил-, сульфоэтил-, карбокси-метил- и фосфоэтил-сефадекс. Они одновременно сохраняют свойства молекулярных сит. Поэтому для разделения пептидов и белков с молекулярной массой до 30 000 применяют сефадексы марок 25 , обладающие в несколько раз меньшим удельным объемом, чем сефадексы марок 50 , применяющиеся для разделения белков с молекулярной массой до 200 ООО. [c.131]

Наряду с разделением белков по величине электрофоретической подвижности ири использовании указанных носителей имеет значение молекулярно-ситовой эффект геля и размеры молекул Оелка ири прохождении их через ячеистую структуру геля. Так, если при электрофорезе иа бумаге белки сыворотки разделяются на 4—5 четких зон, то в полиакриламидном геле выявляется 13—16 полос, соответствующих отдельным белкам (рис. 98). [c.219]

Исследование роли ионных взаимодействий белков с матрицей в зависимости от рИ и ионной силы и возможности использования этих взаимодействий для улучшения разделения белков проведено б работе [Kapa iewi z, Regnier, 1982]. Авторы наблюдали еще более сильно выраженные эффекты. Так, ири ионной силе 0,01 и изменении pH элюента от 5,2 до 8,2 значение для миоглобина изменялось от 1,4 до 0,4. Увеличение ионной силы до 0,1 снижало это различие до 0,9 и 0,7. Подбором оптимального значения pH элюента ири низкой ионной силе можно добиться хорошего разделения близких по молекулярной массе белков. Для колонки TSK G 3000 SW ири pH 6,3 снижение ионной силы до 0,01 приводило к увеличению [c.158]

Представляет интерес наблюдение авторов, то при умеренной загрузке колонки разделение белков в отличие от низкомолекулярных соединений мало зависит от длины колонки. Например, расстояние между белковыми пиками не изменяется при переходе от колонки длиной 25 см к колонке длиной 5 см. Такое явление можио объяснить многоточечным связыванием молекул белка с обменником [Pearson et al., 1982]. Аналогичное наблюдение было сделано в цитированной выше работе Махони. [c.216]

Специалисты фирмы J. Т. Ваксг сообщили о разработке аналогичного аииоиообмениика. Полиатиленимин оии закрепляли иа силикагеле с диаметром пор 330 А и размером зерна 5 мкм. В модельных опытах разделение белков на колонке размером 0,46 X X 25 см осуществляли алюцией линейным градиентом концентрацип (0,025—0,5 М) К-фосфатного буфера (pH 6,8) со скоростью [c.314]

На рис. 125 представлены результаты разделения белков из гомогената мышцы цыпленка на катионообменнике Mono S с помощью солевого градиента (1,75 мМ — 0,245 М Na I) в 0,05 М MES-буфере, pH G. Показано расположение ряда обычных мышечных ферментов. [c.316]

Использование диск-электрофореза в полиакриламидном геле, т. е. электрофореза в неоднородной разделяющей среде, добавляет к этому эффект концентрирования, что позволяет проводить разделение белков из разбавленных растворов без их предварительного когщентрирования. [c.94]

Электрофоретическое разделение белков проводят как в трубочках, так и в тонком слое полиакриламидного геля (слэбе). [c.94]

Смесь для полимеризации следует готовить в количестве, необходимом для опыта. Если используют, например, 12 трубочек, нужно приготовить 30 мл смеси. Осторожным вращением колбочки раствор перемешивают и вносят пипеткой в трубочки, укрепленные в подставке, следя за тем, чтобы пузырьки воздуха не попали внутрь полимеризуемого геля. Уровень вносимой жидкости должен находиться на расстоянии 1—1,5 см от верхнего края трубочки. Сверху осторожно наслаивают воду (0,2—0,3 мл) для образования ровной поверхности геля. Полимеризация обычно заканчивается через 20—40 мин, что определяют по образованию хорошо видимой границы между гелем и водой. По окончании полимеризации наслоенную воду удаляют фильтровальной бумагой. Трубочки снимают с подставки и ввинчивают в отверстия дна верхнего буферного резервуара (рис. 10, /). Верхний резервуар присоединяют к нижнему, предварительно заполненному электродным буферным раствором. Следят за тем, чтобы на концах трубочек не было пузырьков воздуха. На поверхность геля микропипеткой наносят растворы белков. Количество наносимого белка зависит от его гомогенности для индивидуального белка — 25—50 мкг, для гетерогенных смесей это количество может быть увеличено до 50—250 мкг. Плотность наносимых образцов белка повышают добавлением 40%-ного раствора сахарозы до конечной концентрации 0,5 М (20%,). Это необходимо для предотвращения смешивания белка с электродным буфером. Высокая ионная сила исследуемых образцов мешает четкому разделению белков, поэтому такие растворы следует предварительно обессолить. [c.96]

Разделение белков сыворотки крови на колонке с гидроксилапа-титом [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология