Носители с нанесенной подвижной фазой

Для экстракционно-хроматографических систем емкость колонки (Q) характеризуется массой (мг) удерживаемого элемента иа единицу массы обработанного неподвижной фазой носителя (г). Очевидно, емкость колонки с обращенной фазой пропорциональна массе экстрагента, нанесенного на носитель. Максимальная емкость определяется массой экстрагента, которая может еще сорбироваться носителем и не смывается при элюировании. Масса экстрагента, которую можно нанести на носитель, в свою очередь, определяется природой материала носителя, а также составом подвижной фазы. При изготовлении колонки обычно стремятся получить высокую разрешающую способность. При этом следует учитывать, что значение ВЭТТ повышается, если на носитель наносят большие количества экстрагента, так как увеличивается толщина слоя. Поэтому в каждом отдельном случае нужно тщательно подбирать необходимую массу экстрагента. Если экстрагент хорошо удерживается носителем даже после пропускания больших объемов подвижной фазы, то хроматографическая колонка может быть использована многократно. [c.163]

Условия нанесения образца па ОФ-колонку существенно влияют на результаты фракционирования. При выделении пептидов для структурных исследований практикуется нанесение образцов в растворах, содержащих мочевину или Gu-H l. Это помогает растворить образцы, предотвращает агрегацию молекул, способствует адсорбции образца на носителе. Адсорбция образца, позволяющая нанести вещество ровным слоем и создать оптимальные условия для взаимодействий между подвижной фазой и растворенным веществом, является одним из важнейших условий успешного фракционирования полипептидов. При больших объемах наносимого образца повышается эффективность последующих хроматографических разделений. [c.213]

Полоса должна быть как можно более прямой и узкой, должна отстоять по крайней мере на 1—3 см от каждого края пластинки во избежание краевых эффектов , из-за которых растворитель двигается быстрее или медленнее (обычно быстрее) по краям, чем в центре (14—18 см для пластинки 20X20 см). Для получения однородной полосы образца необходим тщательный контроль скорости движения и потока из пипетки. Часто для нанесения требуемого количества раствора операцию повторяют несколько раз. При этом, прежде чем нанести полосу следующий раз, очень важно полностью удалить растворитель. Если растворитель образца не полностью удален, то будут образовываться широкие полосы, неоднородные по концентрации в вертикальном направлении [15]. По этой же причине используемый метод нанесения полос не должен давать царапин или разрушать слой адсорбента. Царапины будут мешать правильному регулярному движению носителя, затрудняя последующее выделение компонента [15, 16]. Если при нанесении образца полоса становится чрезвычайно широкой (высокой), ее можно сделать более узкой с помощью предварительного проявления на расстоянии 1—2 см очень полярным растворителем. После этого растворитель тщательно выпаривают и проявление осуществляют с помощью подходящей хроматографической подвижной фазы [17]. Хонеггер [9] наносил образцы в У-образную канавку шириной 1—2 мм, высотой в половину слоя. В этом методе следует позаботиться, чтобы не удалить весь адсорбент, вплоть до стеклянной пластинки, поскольку это могло бы помешать движению подвижной фазы. Наносят также небольшие круглые пятна плотно друг к другу вдоль пластинки, для того чтобы получить полосу, однако эта операция трудоемка, занимает много времени и может приводить к неоднородности, которая будет вредить разделению компонентов с близкими значениями [c.136]

Если же на полностью пористый носитель, объем пор у которого значительно больше, чем у ППМ ( 1 мл/г), нанести такое количество разделяющей жидкости, которого было бы достаточно для заполнения почти всего объема пор, то мы получим так называемую тяжело нагруженную колонку [10]. Колонки этого типа отличаются высокой разделительной способностью (выше, чем у колонок с малой нагрузкой) [8], высокой линейной емкостью, высокой емкостью по пикам, так как значения к могут лежать в очень широкой области пробы с высокими значениями к вымываются еще в виде симметричных зон потеря неподвижной фазы из-за эрозии почти не сказывается на объеме удерживания объш разделительной колонки, занимаемый подвижной фазой, меньше, чем у колонок, заполненных голым носителем или носителем, покрытым малым количеством разделяющей жидкости. Благодаря этому при заданной линейной скорости требуемая объемная скорость значительно ниже (см. гл. II, разд. Б). [c.167]

В классическом варианте нанесения неподвижной фазы на носитель предполагается, что колонку заполняют сухим способом. Как правило, лиаметр частил насадки превышает 25 мкм. Разделяющую жидкость обычно наносят из раствора, посте чего расгворите.а медленно удаляют испарением. Если хроматографическую колонку заполняют суспензией, то чаще всего разделительные жидкости удаляют из колонки или тем же растворителем, который использовался для приготовления суспензии, или подвижной фазой при кондиционировании колонки. Поэтому после заполнения таких колонок носителем на него необходимо нанести разделяющую жидкость. [c.175]

Этот каскадный метод был разработан в процессе поиска простого метода противоточного распределения. Рассуждение строилось следующим образом если неподвижиукэ фазу закрепить на твердом инертном носителе в цилиндрической колонке, а подвижную фазу пропускать через колонку в условиях равновесия с неподвижной фазой, смесь растворенных веществ будет разделяться по мере того, как подвижная фаза будет проходить через колонку. Первоначально в качестве твердого носителя использовали силикагель, который насыщали водой, содержащей индикатор метилоранж, а в качестве подвижной фазы— хлороформ, насыщенный водой. Было обнаружено, что. если К-ацетильные производные аминокислот растворить в небольшом объеме подвижной фазы, нанести на такую колонку, а затем пропускать через нее подвижную фазу, то эти производные движутся с разными скоростями. К-Ацетильныс производные аминокислот — достаточно сильные кислоты и меняют цвет метилоранжа поэтому они образуют в колонке красные полосы на желтом фоне, как показано на рис. 5.13, и их движение хорошо заметно. Каждую фракцию собирали по мере выхода из колонки. С помощью этого метода нельзя разделить все Н-ацетил-аминокислоты, однако при использовании нескольки.х систем растворителей и различных колонок ряд производных удалось выделить в виде препаратов вы- [c.148]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология