Белки карбоксиметилирование

Восстановление и 8-карбоксиметилирование. Методика [200]. Раствор белка (10—20 мг/мл) в 0,2—0,5 М грас-НС1-буфере (pH 8,0), содержащем [c.85]

Иод-, бром- и хлорацетаты натрия легко взаимодействуют с сульфгидрильными, аминными, имидазольными группами полимерного субстрата с образованием соответствующих карбок-симетильных производных. Так, S-карбоксиметилирование белков в растворе иодуксусной кислоты происходит очень быстро и специфично. Реакции алкилирования иодистым метилом или дибромэтиленом протекают медленнее, нежели с иодуксусной кислотой, и реализуются преимущественно на -SH- и NH2-группах белка. В некоторых случаях возможен также деструктивный распад полимерной цепи. [c.369]

Стадии гидролиза обычно предшествует денатурация, приводящая к разворачиванию белковой глобулы Во избежание получения дополнительных артефактных пептидов за счет наличия или образования в процессе расщепления дисульфидных связей 5Н-группы в белке до гидролиза модифицируют различными способами (окисление надмуравьиной кислотой — с. 124, карбоксиметилирование, обработка тиосо-единениями и др.). [c.139]

Восстановленные и карбоксиметилированные белки обычно плохо растворяются в воде. Если при снижении концентрации мочевины они выпадают в осадок, то необходимость диализа отпадает. В этом случае белок, выпавший в осадок, можно непосредственно отмыть от мочевины 0,01 и. НС1, при этом удаляется также избыток алкилирующего реагента. [c.166]

Рис. 16. Зависимость элюционных характеристик карбоксиметилированных ДНС-белков, развернутых в 6 Л/ гуанидинхлориде pH 5 на сефадексе 0-150 (а) и в 8 М мочевине с 0,1 М КаНСОд на сефадексе 0-200 (б) от lg (МВ)

Ниже описаны те условия карбоксиметилирования белков после их восстановления Na-боргидридом, при которых возможность побочных реакций сводится к минимуму [18]. После того как процесс восстановления заканчивается, избыток боргидрида Na не разрушают, а щелочную смесь тотчас же обрабатывают иодуксусной кислотой (50 моль). Затем pH доводят до 8,5, медленно добавляя НС1, и продолжают алкилирование в течение 20 мин при 25°. Раствор разбавляют двумя объемами воды и диализуют при помешивании в течение 48 час при 4° против дистиллированной воды, содержащей суспензию смешанной катионо- и анионообменной смолы. Воду, против которой ведут диализ, несколько раз меняют. Выход S-кар-боксиметилцистеина после обычного кислотного гидролиза карбок-симетилированного белка в 6 н. НС1 при 110° в течение 22 час составляет около 92% такой же выход получают при извлечении в тех же условиях чистого соединения. [c.105]

В качестве примера ниже приведена методика карбоксиметилирования сывороточного альбумина быка [81]. Раствор, содержа-ш,ий 500 мг кристаллического белка, 6 ммоль бромацетата и избыток окиси магния, осторожно встряхивают при 35°. За ходом реакции следят, отбирая пробы смеси для анализа различными метода-ьш. Полезными критериями для наблюдения за ходом реакции могут служить убыль аминного азота и отрицательный результат диазосочетания имидазольных и фенольных остатков. В случае бычьего сывороточного альбумина по мере протекания карбокснметилиро-вания дисульфидные связи становятся более доступными восстановлению это можно обнаружить, обрабатывая препарат сначала сульфитом, а затем раствором фосфомолибденовой кислоты по Фолину 82]. Спустя 27—72 час смесь центрифугируют и прозрачную надосадочную жидкость подкисляют до pH 2 соляной кислотой. Практически количественный выход карбоксиметилированного белка. [c.179]

Карбоксиметилирование. Карбоксиметилирование — наиболее общепринятый метод модификации сульфгидрильных групп белков. Для введения кислотных или нейтральных группировок Б качестве реагентов используют иодоуксусную кислоту или иодоацетамид. Предварительно оба реактива перекристал-лизовывают для удаления свободного иода. Иодоуксусную кислоту перекристаллизовывают из гексана, иодоацетамид — из петролейного эфира. Оба реагента добавляют в реакционную [c.142]

Если карбоксильные группы отсутствуют, можно провести карбоксиметилирование с помощью хлорацетата, который связывается с гидроксильными группами с образованием карбоксила [20]. Используя этот прием, многие углеводы, так же как и кислые полисахариды, удается затем соединить с белками через карбоксильные группы, например, с помощью карбо-диимидной реакции. [c.49]

Ст-Н1з-12-РНазы и лиофилизации из уксусной кислоты также образуются димеры. Более примечательным является то обстоятельство, что 4i димеров алкилированных форм проявляет активность, соответствующую 50%-ной активности немодпфицирован-ных димеров. Активность таких димеров утрачивается прн их диссоциации в результате нагревания при 67 °С в течение 10 мин. Объяснение этих данных приведено на схеме (с. 309). При растворении карбоксиметилированной РНазы в 50%-ной уксусной кислоте нековалентные связи между КНг-концевым участком (остатки с 1-го по 20-й) и остальной частью полипептидной цепи разрываются подобно тому, как это происходит при отделении S-пептида от S-белка при диссоциации в кислой среде. При лиофилизации S-пептидные области двух различных молекул эффективно взаимодействуют с соответствующими областями S-белков, образуя [c.310]

Получить определенные экспериментальные даипые по этим вопросам трудно. В химическом смысле белковые субъединицы ВТМ достаточно стабильны, ио, как отмечалось в гл. V, они обладают выраженной тенденцией к агрегации и образованию палочковидных структур. Степень полимеризации А-белка в значительной степени зависит от pH, температуры, концентрации белка и ионной силы. Поддерживать соответствующие условия при постаповке серологических опытов трудпо. При работе с ВЖМТ имеется другая трудность. Разрыв белковой оболочки приводит к тому, что у каждой субъедипицы демаскируются четыре активные —SH-группы если эти группы не будут блокированы (например, карбоксиметилированием), субъединицы могут соединяться друг с другом, образуя нерастворимый продукт (гл. IV). [c.374]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология