Импульсная метка

Для выявления вновь синтезируемых фракций и особенно недолго живущих компонентов применяют импульсную метку. В этом случае метка дается непродолжительное время — всего лишь в течение нескольких минут или даже секунд. [c.125]

Систему (1.36) можно решать методом преобразования Лапласа, а можно учесть то, что импульсная метка сразу попадает в ячейку идеального смешения, в которой мгновенно устанавливается средняя концентрация, равная l/vl. Во втором случае систему (1.36) следует решать при начальном условии 0 = 0 С,(0) = l/v, Сз = О (при Со = 0). [c.43]

Уравнение математической модели режима полного смешения также выводится как уравнение нестационарного баланса концентрации трассера для рабочего объема аппарата. При этом существенно, что концентрация по всему объему постоянна, хотя и уменьшается с течением времени от момента входа импульсной метки. Кроме того, концентрация на выходе из аппарата с полным перемешиванием в любой момент времени т > О равна концентрации трассера в объеме аппарата. [c.139]

Величина D определяется экспериментально, для чего на входе в аппарат подается импульсная метка, на выходе измеряется концентрация трассера и значение 1) вычисляется по ширине выходной кривой (рис. 1.60, б). [c.143]

Путь атомов углерода при брожении. Опыт с вытеснением радиоактивной метки проводится на дрожжевом экстракте в строго анаэробных условиях, обеспечивающих спиртовое брожение. Небольшое количество меченного радиоактивным углеродом субстрата (импульсная метка) инкубируют с дрожжевым экстрактом в течение времени, достаточного для того, чтобы каждый из промежуточных продуктов данного метаболического пути успел включить метку. Затем метку прогоняют по всему пути, добавляя избыток немеченого субстрата. Это делают для того, чтобы предотвратить участие меченых продуктов в обратных реакциях и отвлечение их на другие метаболические пути. [c.473]

На фиг. 83 показан ход постановки опыта. Бактериальные клетки получали импульсную метку, т. е. их помещали на несколько секунд в среду, содержащую такие предшественники РНК, [c.242]

По правой оси ординат отложена радиоактивность после импульсной метки [c.242]

После импульсной метки и центрифугирования в градиенте плотности были получены, как и предполагалось, три пика, поглощающие ультрафиолет при 260 ммк. Пики эти соответствовали 233- и 168-рибосомам и 43-5-РНК и не содержали метки. Пик радиоактивности соответствует фракции, содержащей молекулы с коэффициентом седиментации между 48 и 168 (фиг. 83). Однако количество вещества в этой фракции слишком мало, чтобы его можно было определять путем измерения оптической плотности этот пик соответствует т-РНК. [c.242]

В методе изотопной конкуренции бактериальный белок затем гидролизуют, составляющие его аминокислоты разделяют и определяют их радиоактивность. Поэтому этот метод получил меньшее применение, чем более прямые методы изотопного исследования, такие, как методы быстрого взятия пробы или импульсной метки , описанные ниже. Тем не менее результаты, опубликованные в 1955 году в трудах Института Карнеги [60], значительно пополнили наши сведения [c.35]

Глиоксилатный цикл был открыт в результате известной работы Г. Корнберга [64], применившего метод импульсной метки. Многие виды [c.39]

Для полного выяснения вопроса о путях осуществления сплайсинга необходимо иметь данные опытов по вытеснению импульсной метки, в которых в течение короткого времени осуществляют включение радиоактивной метки в первичный предшественник, а затем прослеживают ее судьбу на разных стадиях созревания РНК. [c.324]

В течение короткого времени после внесения импульсной метки она накапливается в гяРНК. Вследствие нестабильности молекул гяРНК количество метки в ее составе убывает. В зависимости от того, включилась ли метка в один из концевых участков РНК или в ее центральную часть, получаются различные результаты эксперимента. [c.334]

Работами последних лет [83] установлена связь этой проблемы с современными направлениями исследования механизмов биосинтеза белка. Было показано, что биосинтез основной структуры тиреоглобулина протекает независимо от синтеза РНК, хотя и несомненно требует наличия стабильной РНК-матрицы. Центрифугирование в градиенте сахарозы и применение импульсной метки радиоактивного лейцина позволило доказать, что 12 8-белок является предшественником 19 8-белка. Результаты, полученные [c.228]

С помощью импульсной метки показали, что процесс иодирования проходит главным образом на заключительной стадии биосинтеза белка, а не яа стадии предшественника (см. также [84]). [c.228]

В большую часть кольцевой хромосомы специфическая импульсная метка включается слабо. Участки с высокой специфической активностью указаны стрелками. Они соответствуют месту окончания репликации молекулы ДНК (слева внизу) и началу нового [c.121]

А. Белки в теле нейрона метят путем одноразового введения меченой аминокислоты (импульсная метка). Б. Некоторые из радиоактивных белков перемещаются по аксону с постоянной скоростью от 1 до 5 мм в сутки. В. Через несколько дней выявляются два пика радиоактивности, содержащие различные компоненты цитоскелета. Более быстрый пик содержит актин, а также много других белков, в том числе такие, которые обычно считают растворимыми белками цитоплазмы. [c.128]

На практике из-за различий между клетками и из-за трудностей, связанных с кратковременной (импульсной) меткой, границы между этими событиями оказываются размытыми. При использовании 50%-ных значений для обозначения границ переходов можно получить разумные приближения к истинным значениям продолжительностей различных фаз клеточного цикла. [c.134]

Радиоавтографические исследования подтвердили двустороннюю направленность процесса репликации у Е. соИ в опытах с использованием особых штаммов ауксотрофов по аминокислотам, характеризующихся низким содержанием нуклеозидтрифосфатов. Добавление аминокислот после голодания вызывало инициацию репликации с лаг-периодом, равным всего 6 мин. Клетки метили Н-тимидином, а после того, как репликационные вилки продвигались на небольшое расстояние от места начала репликации, клетки К]ратковременно метили (импульсная метка) Н-тимидином с очень высокой удельной радиоактивностью. При этом на радиоавтографах можно было четко видеть двусторонне направленные репликационные вилки [190] (рис. 15-28). [c.273]

Если в аппарат полного перемешивания вместе с непрерывно входящим потоком ввести импульсную метку, то она мгновенно и равномерно распространится по всему объему аппарата. Следующие за меткой новые порции немеченного потока непрерывно разбавляют введенный в момент -г = О индикатор, и его концентрация в объеме аппарата постоянно уменьшается, вследствие чего уменьшается и концентрация выводимого из аппарата индикатора. [c.139]

Показано, что при хроматографии олигонуклеотидов на сефадексах G-25, G-50, G-75 и G-100 в 0,5 М бикарбонате аммония (pH 8,6), содержащем 8 М мочевину, компоненты разделяются в соответствии с длиной цепи [97]. Благодаря присутствию мочевины в этом случае удается исключить влияние пуриновых оснований на результаты разделения. Широкий круг сорбентов (сефадекс, биогель, ОЕАЕ-целлюлозу, гидроксиапатит) использовали при изучении биосинтеза олигодезоксирибонуклеотидов. в клетках млекопитающих методом импульсной метки (118]. [c.58]

В совместной работе с Календо [9] мы попытались проследить нарушение синтеза быстрометящейся РНК в клетках под влиянием облучения. Работая с клеточной культурой HeLa и применяя меченный тритием уридин, инкубированный с культурой в течение короткого времени (1,5 мин., импульсная метка), можно было при помощи метода авторадиографии проследить за накоплением в ядре и цитоплазме [c.157]

Рис. 6. Начальная скорость синтеза быстрометящейся РНК в ядрах, облученных дозой 10 кр, клеток HeLa через различные сроки дачи импульсной метки после Y-облучения

А. М. Кузин. Благодаря коротким срокам после импульсной метки мы можем говорить о быстрометящейся РНК, которую часто сопоставляют с информационной РНК. Рибосомальная РНК обычно появляется значительно позднее. С полной уверенностью исключить образование и рибосомальной РНК мы, конечно, не можем. [c.160]

Динамика распределения меченой РНК в ядрах клеток культуры HeLa, На оси абсцисс — время от начала действия актиномицина Д в опыте, совпадающее со временем после облучения. Актиномициновын блок дан через 10 Mini, после импульсной метки а — контроль б — опыт облучение дозой 10 кр [c.193]

Еще один метод, основанный на репликативном механизме, был предложен Бертоном (Burton, 1965), В нем используется импульсная метка в составе радиоактивного нуклеозидтрифосфата в ходе несинхронизованной реакции репликации, Положение специфических олигонуклеотидов относительно 3-конца определяется по их относительной радиоактивности олигонуклеотиды вблизи 3-конца должны быть более радиоактивны, чем олигонуклеотиды, удаленные от этого конца. [c.192]

Были проведены эксперименты другого рода-с использованием кратковременного введения радиоактивной метки. Это позволило определить включение предшественников в РНК незараженных бактерий. Необходимость в кратковременной (импульсной) метке была обусловлена быстрым распадом мРНК. При более продолжительном периоде мечения мРНК успевает деградировать прежде, чем удается измерить включенную в нее метку. При использовании импульсной метки можно успеть произвести измерения раньше, чем РНК деградирует. [c.65]

Рис. 4-54. Схема, иллюстрирующая суть типичного эксперимента с вытеснением импульсной метки. Буквами А, Б, и В помечены резервуары, которые соответствуют различным компартментам клетки (выявляемым с помощью радиоавтографии или в опытах, включающих фракционирование клетки) или различным химическим соединениям (выявляемым хроматографически или с помощью каких-либо иных

Исследования, проведенные в начале 1960-х годов на реплицирующихся хромосомах, в которые в качестве импульсной метки вводили радиоактивный предшественник ДНК Н-тимидии, выявили особую четко ограиичеиную область репликации, перемещающуюся вдоль родительской спирали ДНК. Эта активная область из-за своей У-образной формы была названа репликационной вилкой. Именно в ней с помощью мультиферментного комплекса, содержащего ДНК-полимеразу, синтезируются дочерние молекулы ДНК [c.287]

Несмотря на эти трудности, радиоавтогроафия является мощным дополнительным методом исследования ДНК. Она успешно применяется при импульсной метке, когда наблюдается предпочтительное включение Р в новосинтезированные области. Таким спо- [c.185]

Изучение включения Н -тимидина в фибробласты в культурах костного мозга соответствует этому предположению. В 7-дневных культурах индекс импульсной метки составляет 18% и насыщение наступает за 32 часа, когда индекс метки достигает 90%. В 12-дневных культурах при таком же индексе импульсной метки насыщение происходит между 48 и 72 часами при индексе метки, равном 78% (И. В. Кейлис-Борок и др., 1971). Отсюда следует, что пролиферативный пул в колониях фибробластов в 7-дневных культурах чрезвычайно высок, а к 12-му дню культивирования он несколько уменьшается. Возможно, это связано с тем, что часть клеток в таких колониях подвергается дифференцировке и в связи с этим перестает делиться. Сред- [c.26]

Разумеется, введение радиоактивной метки in vivo незаменимо при изучении физиологических аспектов метаболизма на клеточном и организменном уровне. Нередко для этой цели используют так называемую импульсную метку , т. е. быстрое введение изотопа в организм животного (обычно путем инъекции) или в питательную среду клеток на относительно корот- [c.261]

Для получения меченой ДНК в питательную среду культуры клеток на 18—20 ч, т. е. на время, достаточное для репликации ДНК, вносят примерно 10 мкКи/мл [ Н]-тимидина с высокой УА (до 100 Ки/ммоль). Импульсную метку в мРНК вводят с помощью [ Н]-уридина, внося его в питательную среду до концентрации примерно 0,2 мКи/мл на 1—2 ч. Поскольку УА [ Н]-ури-дина составляет около 50 Ки/ммоль, за это время можно получить включение Н в мРНК на уровне 10 имп./мин на 1 мг. [c.264]

Импульсную метку в мРНК бактерий осуществляют путем внесения в питательную среду [ С]-урацила (0,2—1 мКи/мл) или [ Ф]-ортофосфата (0,5—2 мКи/мл — после исчерпания или отмывки нерадиоактивного фосфора). Ввиду быстроты протекания процессов метаболизма у бактерий продолжительность такого импульса должна быть очень небольшой (10—30 с), поэтому приходится позаботиться о мгновенном прекращении жизнедеятельности микроорганизмов. Обычно этого достигают быстрым охлаждением, выливая суспензию на мелкораздробленный лед, содержащий азид натрия [Hayes, Gros, 1968]. [c.265]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.281 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.202 , c.203 ]

Биохимия нуклеиновых кислот (1968) -- [ c.242 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.222 ]

Фотосинтез С3- и С4- растений Механизмы и регуляция (1986) -- [ c.296 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.222 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология