Аминокислоты меченых

Быстро возрастающий интерес к этой проблеме, помимо ее фундаментального значения, связан с тем, что лишь с недавнего времени промежуточные стадии биосинтеза белка стали доступны для химического изучения. Так, недавно было обнаружено, что системы, активирующие внедрение аминокислот, меченных С , в белок, могут быть разделены центрифугированием на две основные фракции — микросомы и растворимые энзимы. [c.263]

Аминокислоты, меченные изотопами 247 [c.6]

АМИНОКИСЛОТЫ, МЕЧЕННЫЕ ИЗОТОПАМИ [c.247]

Обсуждая влияние прошлого опыта на зрительную систему, мы сосредоточим свое внимание на развитии синаптических связей, благодаря которым информация, приходящая от двух глаз, объединяется, обеспечивая бинокулярное зрение. Для того чтобы объяснить образование таких связей, нужно сначала описать анатомию зрительной системы взрослого индивидуума. У такого млекопитающего, как обезьяна или кошка, оба глаза воспринимают почти одно и то же внешнее поле и посылают по зрительным путям сигналы в мозг таким образом, что два канала информации, относящейся к одному н тому же участку видимого мира, поступают в один и тот же участок мозга (рис. 18-77). Поэтому в левой зрительной коре имеются две упорядоченные проекции правой половины зрительного поля-одна от левого глаза, другая от правого. В мозгу эти две проекции накладываются друг на друга, хотя и не совсем точно. Входы от двух глаз несколько разделены в пространстве-они представлены узкими (0,4 мм) чередующимися полосками, так называемыми колонками глазодоминантности. Это можно показать путем введения в один глаз радиоактивных аминокислот. Меченые молекулы поглощаются нейронами сетчатки и транспортируются по аксонам нервньй клеток в кору головного мозга, каким-то образом проходя через синапсы в передаточных станциях -латеральных коленчатых телах. На радиоавтографах срезов коры ясно видно, что меченые полосы, получающие информацию от меченого глаза, перемежаются немечеными полосами, получающими входные данные 9т немеченого глаза (рис. 18-78). [c.150]

Полный кислотный гидролиз ДИФ-пептида приводит к желтому ДНФ-производному Л -концевого остатка вместе со свободными аминокислотами и аминокислотами, меченными только в боковую цепь, такими продуктами как е-ДНФ-лизин и 0-ДНФ-тирозин. За исключением а-ДНФ-аргинина, сс-ДНФ- (или бис-ДИФ)производные Л -концевого остатка можно экстрагировать из подкисленного водного раствора подходящим органическим растворителем, например этилацетатом, и идентифицировать с помощью тонкослойной хроматографии. [c.266]

В работе [290] дана оценка необходимой степени обогаще ния аминокислот, меченных N, С, 0, Н, при анализе ме тодом СИД Анализировались N ацетил к-пропиловые эфиры аминокислот, которые в случае ХИ (газ реагент метан) образу ют интенсивный пик иона МН+ Результаты исследования сви детельствуют что для определения аминокислот в образце сыворотки крови объемом 100 мкл изотопный избыток N должен быть не менее 0,08% (ат ) В работе [291] было пока зано, что количественный анализ аминокислот, меченных с избытком 0,1 % ( т) можно проводить методом СИД при ГХ—МС ХИ на уровне концентраций О 1 нмоль [c.199]

Согласно требованиям Ф-УШ нерадиоактивный метионин, а следовательно, и меченый, как всякий лекарственный препарат должен быть проверен на тождественность и доброкачественность. Литературные данные [1, 2, 3] показывают, что исследователи применяли различные вещества в качестве реагентов на аминокислоты, причем большинство методов анализа аминокислот предусматривало решение специфической задачи, касающейся в основном анализа белка. По анализу же аминокислот, меченных радиоактивными изотопами, в том числе и метионина с изотопом 8 , литературные данные совсем отсутствуют. [c.211]

Анионообменные смолы дауэкс-1 и дауэкс-2. Моментальное разделение органического и неорганического иода. Быстрое определение иодированных аминокислот, меченных [1055]. [c.256]

Процессы -распада атомов углерода-14 в многократно меченных органических соединениях (алифатические и ароматические углеводороды, жирные кислоты) используются для получения аминов и аминокислот, меченных радиоактивными изотопами углерода или водорода. [c.78]

Первая часть этой задачи решается с помощью процессов гидролиза, происходящих под влиянием энзимов или сильных щелочей и кислот. Особенно хорошие результаты получаются при использовании в качестве гидролизующего агента 6 н. НС1. В этом случае для полного расщепления белковых молекул на аминокис-, лоты необходима обработка белка 6 н. НС1 при температуре 100° С в течение 10—15 ч. Вторая часть этой задачи — анализ образующихся весьма сложных смесей аминокислот — сопряжена с более серьезными трудностями. Обычные методы анализа подобных смесей, связанные с необходимостью количественного выделения всех компонентов смеси, очень трудоемки и приводят к большим погрешностям. Этим объясняются сильные расхождения — в несколько десятков процентов, — при анализе аминокислотного состава различных белков. Метод изотопного разбавления позволяет достигать точности до нескольких десятых долей процента. В этом случае к гидролизату добавляется одна из входящих в его состав аминокислот, меченная углеродом-14. После этого из раствора осаждается некоторое количество определяемой аминокислоты и проводится тщательная очистка ее от примесей. Зная [c.115]

Влияние изотопного состава на ионообменные свойства веществ изучали на соединениях,, меченных Н и [4, 5]. При хроматографии на катионитах аминокислот, меченных происходит обогащение последних фракций (рис. 52.1), а при хроматографии на анионитах — первых [6]. Этот факт необходимо учитывать при расчете удельной радиоактивности. [c.353]

В опытах Ф. В. Турчина аминокислоты, меченные N 2, были обнаружены в растениях уже после 5-минутного выдерживания растений на растворе (К Н4)2504. Однако накопление аминокислот в листьях наблюдается не всегда (вследствие интенсивного использования образующихся аминокислот для биосинтеза белков). Итак, при нормальных условиях развития главным путем превращения аммиака в органические соединения азота является образование аминокислот. [c.240]

Примером применения биосинтеза является получение меченых аминокислот с помощью одноклеточных водорослей вида хлорелла, культивируемых на среде, содержащей углерод С. В ходе биосинтеза концентрируется в белковом веществе хлореллы. Затем проводят кислотный гидролиз белка, в результате которого образуются аминокислоты, меченные по углероду. [c.303]

Исследования с применением субстратов, меченных показали, что аммиак не является промежуточным продуктом при ферментативном переаминировании [318], и тем самым окончательно подтвердили первоначальное представление о природе этой реакции [251]. Было найдено, что в среде, содержащей немеченый ион аммония, аминокислоты, меченные непосредственно передают свою аминогруппу а-кетоглутаровой кислоте [318]. [c.255]

Эксперименты показали, что если в среду ввести аминокислоты, меченные С то метка раньше всего появляется в белке рибосом. Это свидетельствует о том, что реакции синтеза белка в клетке протекают главным образом в рибосомах. Рибосомы функционируют и вне клеток в системе, содержащей, помимо рибосом, аминокислоты, нуклеотиды, источник энергии и [c.369]

Теперь рассмотрим стационарно растущую и синтезирующую клетку, в которую мы подали внезапно на период времени, малый по сравнению с временем генерации, импульс какого-либо радиоактивно меченного компонента среды (это может быть, например, лимитирующая аминокислота). Меченая составная часть вовлекается в процессы синтеза белков, нуклеиновых кислот и т. д. Если время контакта культуры клеток с радиоактивным компонентом велико, то снова достигается стационарное состояние и вещества, синтезируемые клеткой, окажутся равномерно помеченными. Но если время контакта мало, то распределение радиоактивного компонента в веществах клетки станет весьма неравномерным. Таким образом, не нарушая по существу стационарности клеточных синтезов, мы с помощью кратковременного импульса радиоактивности изучаем явление нестационарно и измеряем скорости отдельных парциальных процессов. Таков первый вариант кинетического эксперимента. [c.452]

Это затруднение пытались преодолеть, используя так называемый метод изотопного разведения [61]. Для того чтобы определить в гидролизате какую-нибудь аминокислоту, прибавляют к нему небольшое количество этой аминокислоты, меченной изотопом. Затем осаждают исследуемую аминокислоту каким-либо методом и производят определение содержания изотопа в осадке и в фильтрате. Исходя из того, что отношение концентрации изотопа в фильтрате (Си.ф) к концентрации изотопа в осадке (Сн.о) равно отношению концентрации аминокислоты в фильтрате (Са.ф) к концентрации аминокислоты в осадке (Са.о), т. е. из того, что [c.31]

На основании опытов с аминокислотами, меченными Ы , можно сделать заключение, что образование антител в организме происходит примерно с той же самой скоростью, с которой образуются нормальные сывороточные глобулины. Период полураспада антител составляет около двух недель [59]. Большой интерес [c.337]

При помощи этого метода были сделаны попытки определить период полураспада белков. Для этого животным парентерально или с пищей вводились аминокислоты, меченные дейтерием [43], или изотопным углеродом, и через различные промежутки [c.388]

До 1940 г. аминокислоты обычно рассматривались как относительно стойкие строительные блоки, поступающие в организм с пищей. От этих представлений быстро отказались после начатых Шёнкеймером исследований метаболизма ННз и аминокислот, меченных изотопом Сразу же обнаружилось, что азот часто быстро переходит из одного углеродного остова в другой. Эти результаты подтвердили предположения, выдвинутые ранее Браунштейном (гл. 8, разд. Д). Браунштейн указывал, что С4- и С5-аминокислоты, аспартат и глутамат, тесно связанные с циклом трикарбоновых кислот, способны быстро обменивать свои аминогруппы на аминогруппы других аминокислот путем переаминирования [уравнение (14-12), стадии бив]. Поскольку при этом аммиак легко включается в глутамат [уравнение (14-12), стадия а ом. следующий раздел], нетрудно представить себе существование общего пути синтеза аминокислот. [c.88]

Можно вводить метку в а-положение аминокислоты путем декарбоксилирования производных а-ацетиламиномалоновой кислоты см. схему (7) в кислых растворах тритийсодержащего растворителя. Альтернативно, можно вводить метку в а-положение аминокислоты непосредственно в условиях, которые вызывают рацемизацию при а-С атоме, т. е. в сильно щелочных средах или при кипячении с уксусным ангидридом в уксусной кислоте. Однако для проведения многих биологических исследований лучще избегать применения [а- или Р- Н] меченных аминокислот. Обмен трития в этих положениях происходит через реакции трансаминирования схема (32) потеря трития, находящегося в р-положении аминокислот, используется в методе анализа трансаминаз. Обработка а.р-тритированных а-аминокислот с помощью оксидаз аминокислот или почечной ацилазы может приводить к существенной потере активности осторожность следует соблюдать и при использовании ферментов для разделения рацемических аминокислот, меченных радиоактивными изотопами. [c.249]

Кингстон и Даффилд [292] сообщают об определении шестнадцати а аминокислот в плазме крови методом СИД при выборе в качестве внутреннею С1андарт4 аминокислот, меченных [c.199]

Креатинин представляет собой обычную форму, в виде которой креатин удаляется из организма млекопитающих. Количество креатинина, выделяемое ежедневно взрослым человеком, постоянно, причем оно тем больше, чем более развита мускулатура. В некоторых патологических случаях атрофии мускулатуры выделяются повышенные количества креатинина. Следовательно, креатин синтезируется не в мышцах и выделяется тогда, когда мышцы не способны его потреблять. В результате применения аминокислот, меченных N , было установлено (с применением техники срезов), что синтез креатина происходит в почках из гликоколя и аргинина, дающего гуанидиновый остаток (Бурсук Шенхеймер). Метилирование происходит, однако, в печени, причем метильная группа поставляется метионином (переметили-рование), что было доказано обработкой гуапидиноуксусной кислоты метионином, меченным дейтерием в метильной группе, в присутствии срезов печени (дю Виньо). [c.393]

Нижеследующее описание касается определения радиоактивности в микрофракциях белка, содержащих аминокислоты, меченые тритием ( Н). Метод определения удельных радиоактивностей Н-пуринов и Н-пиримидинов был описан Кенигом и Братгардом [23]. Принцип этого определения заключается в том. что радиоактивность трития определяется после сжигания образца. При таком методе самопоглощение сильно уменьшается или вообще отсутствует. При анализе белка мы использовали этот же принцип и ту же методику с некоторыми модификациями. [c.286]

Поскольку между удельной радиоактивностью и концентрацией аминокислот существует линейная зависимость, то можно сказать, что удельную радиоактивность нефракционированного белка для образца, весящего 100 мкг, или для белковой зоны в микрогеле йожно сравнивать с эквивалентными радиоактивностями образцов из идентичных участков мозга другого полушария того же животного, а также с образцами мозга других животных путем деления удельной радиоактивности белка на концентрацию аминокислот, содержащих тритий. Все значения удельной радиоактивности, таким образом, сравнивают при одной и той же концентрации аминокислоты, меченой тритием, названной здесь единичной конпентрацией Н-лейцина. [c.294]

Возможность включения отдельных аминокислот в белки была впервые показана после того, как в биохимических исследованиях стали применять аминокислоты, меченные радиоактивным углеродом, тяжелым азотом или радиоактивной серой. Механизм этого процесса тесно связан с биосинтезом белка заново. Аминокислоты перед включением в белок должны быть активированы. Активация аминокислот осуществляется под действием АТФ с образованием аденилатов аминокислот. Включение аминокислот в белки тесно связано с нуклеиновыми кислотами. [c.299]

Вполне возможно, что в стенке кишечника происходит синтез полипептидов из. аминокислот и этим объясняется увеличение количества полипептидов в крови кишечных вен во время всасывания белков. Эти соединения затем используются для построения каждым видом тканей и клеток своего собствениого специфического белка. О значительной способности тканей кишечной стенки к ферментативному синтезу пептидных связей говорят результаты опытов с аминокислотами, меченными при помощи изотопов. Оказалось, что такие аминокислоты с большой скоростью включаются в организме в белки кишечной стенки. [c.318]

В живом организме происходит непрерывный распад и синтез белка. Механистическая теория Рубнера и Фойта, принимающая, что взрослый организм, находящийся в состоянии азотистого равновесия, способен только к ограниченному синтезу белка, необходимому для восстановления изношенных белковых структур, в настоящее время должна быть полностью отвергнута. Опыты с мечеными аминокислотами показали, что и во взрослом организме, даже при азотистом равновесии, происходит непрерывный интенсивный распад и синтез тканевых белков. Использование аминокислот пищи для синтеза тканевых белков происходит в значительных размерах и с большой скоростью. Установлено, что если скармливать взрослым крысам (находящимся в состоянии азотистого равновесия или белкового голодания) различные аминокислоты, меченные тяж елым азотом, то при этом не менее 50% введенного изотопного азота обнаруживается в клеточных белках. Одновременно такое же количество аминокислот (во взрослом, не растущем организме) освобождается из тканевых белков и поступает в кровь и тканевые жидкости, перемешиваясь с аминокислотами, поступившими из кишечника. Процесс обновления аминокислот в молекулах тканевых белков происходит с большой скоростью. В печени, как можно судить на основании опытов с изотопами, половина всего азота белков печени замещается на новый, изотопный азот в течение 5—7 дней. С наибольшей скоростью процесс обновления протекает в белках кровяной плазмы, печени, почек и слизистой кишечника. Он совершается, по-видимому, во всех тканях без исключения, так как даже белки сухожилий подвержены этому процессу обновления, хотя и протекающему в них с небольшой скоростью. В этих опытах шшла подтверждение идея А. Я Данилевского о том,, что организм в известный период времени обновляет весь свой состав... . [c.329]

Никаких указаний на то, что в организме животных возможен синтез рацемических аминокислот, опыт не дает напротив, найдено, что после приема с пищей рацемических аминокислот, меченных N , D-компонент выводится с мочой без заметного разведения метки [135]. Активность оксидазы D-аминокислот in vivo подтверждается рядом фактов. Например, установлено, что некоторые D-аминокислоты при введении их с пищей вместо соответствующих L-аминокислот обеспечивают рост животных (стр. 135) и что после приема внутрь некоторых рацемических аминокислот с мочой выводятся соответствующие а-кетокислоты [136, 137]. [c.186]

Синте.з пенициллина штаммами Peni iltium изучали при помощи меченых аминокислот. При добавлении меченого DL-ва-лина к ферментационной смеси Стивенс и сотрудники [577] нашли, что карбоксильная группа пенициллина могла иметь источником валин эта аминокислота, меченая в метильных группах, включается в пеницилламиновую часть молекулы антибиотика [578]. L-Валин включается, по-видимому, быстрее, чем D-валин [709]. Предшественниками ацильной группы могут служить самые различные кислоты [579], а источником -лактам-ного кольца является, по-видимому, L-цистин [578—581, 709, 710]. L-Цистин более эффективен как предшественник пенициллина, чем D-цистин [578]. [c.273]

Исследования, проведенные с аминокислотами, меченными радиоактивным изотопом углерода С , а также изучение реакций трифторацетилирования и метилирования соответствующих производных с помощью диазометана методами инфракрасной спектроскопии и тонкослойной хроматографии показывают лишь следы [c.266]

Многочисленные исследования, в которых отдельные С -аминокислоты вводили в неповрежденные растения или добавляли к гомогена-там из высших растений, подтвердили, что у высших растений осуществляются сходные пути превращений. В частности, тщательные исследования, проведенные с культурами тканей корня моркови, показали, что взаимопревращения четырнадцати аминокислот, меченных происходят в основном в соответствии со схемой, представленной на фиг. 83. [c.206]

Например, Джэкобс [6] изучал поглощение и перенос аминокислот, меченных С, в кишечнике крыс, используя проточную кювету, заполненную антраценом. Солевой раствор, содержащий аминокислоты, циркулировал через кишечник животного, находящегося под наркозом, и порции его периодически отбирали для измерения методом жидкостного сцинтилляционного счета. Скорость поглощения аминокислот можно определять непосредственно, так как она пропорциональна скорости счета, регистрируемой в проточной кювете. [c.249]

Клетки Е. oli выращивались на среде, содержащ изотоп серы или углерода С . В некоторый момент клетки переносились на обычную питательную среду без изотопной метки и одповременно с помощью индуктора запускался синтез фермента Р-галактозидазы. Фермент выделялся в чистом виде из суммарного клеточного белка, затем измерялся его изотопной состав. Оказалось, что Р-галактозидаза содержит только нерадиоактивную серу или углерод, т. е. целиком синтезирована из веществ с изотопным составом той среды, на которой клетки жили в данный момент. В то же время все прочие белки клеток построены из аминокислот, меченных радиоактивными изотопами. Если бы распад и ресинтез белков действительно имел место, Р-галакто-зидаза должна была бы синтезироваться с исиользованием радиоактивных иредшественников — пептидов или аминокислот. Ничего подобного не наблюдалось. Синтезированные белки в живых клетках абсолютно не расщеплялись и оставались неизменными, пе вступая в обмен со средой. [c.447]

Берутся разорванные клетки, из которых удалены ядра. В такой системе не содержится ни ДНК, ни м-РНК, но имеются рибосомы, набор т-РНК для всех аминокислот и необходимые ферменты. В систему вводятся синтетические полирибонуклеотидные цепи и различные аминокислоты, меченные радиоактивными атомами С . В такой системе природа обманута — вместо м-РНК в качестве матрицы работает синтетический полинуклеотид. О его работе можно судить по включению меченой аминокислоты в синтезируемую полипептидную цепь. Оказалось, что цепочка полиурацила — поли У [c.282]

Если выделенное соединение загрязнено элементом, используемым для изотопной метки, то метод изотопного разведения может дать значительную ошибку. Так, например, в опытах с аминокислотами, меченными при совместном осаждении других аминокислот меняется отношение Со/Са. Для того чтобы обойти эту трудность, было предложено все исследуемые аминокислоты превращать в изотопные производные и, добавляя большой избыток немеченого производного того же строения, отделять их затем от изотопных производных других аминокислот [63]. Так, например, белковый гидролизат обрабатывают п-иодфенил-сульфонилхлоридом, содержащим При этой реакции обра- [c.32]

На основании этих данных можно было бы заключить, что обновление молекул сывороточных белков происходит не в результате кратковременного размыкания пептидных цепей и подключения к месту разрыва новых аминокислот, а путем полного распада отдельных белковых молекул с последующим образованием новых белковых частичек. Если, однако, вместо N -глицинa подопытным кроликам вводился С -лейцин, то наблюдалось включение меченой аминокислоты в 51-антитела [60]. Эти последние опыты с а У(инокислотой, меченной изотопным углеродом, представляются более убедительными, чем опыты с аминокислотой, меченной изотопным азотом, так как меченый азот может отщепляться и обмениваться в результате процессов дезаминирования и переаминирования. Тем не менее трудно предположить, что белковые молекулы антител могут подвергаться непрерывному обновлению своего аминокислотного состава и в то же время сохранять в неизменном виде свои свойства антител. Эти свойства, вероятнее всего, обусловлены тем, что форма поверхности молекулы антитела геометрически дополняет форму детерминирующей группы антигена. Трудно себе представить, каким образом может сохраняться эта дополнительная форма, если молекулы антитела непрерывно обменивают входящие в их состав аминокислоты на аминокислоты окружающей среды. [c.391]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология