Клетки фракционирование

Большинство ферментов являются лабильными белками. При переводе их в экстракт они лишаются своего естественного (в клетке) окружения и легко подвергаются денатурации и инактивации под влиянием различных факторов. В связи с этим при выделении и очистке ферментов необходимо соблюдать целый ряд предосторожностей. Как правило, все операции следует проводить при 2—4° С (лучше — в холодной комнате), а фракционирование органическими растворителями — при температуре ниже О С. [c.196]

Получение Н.к. В клетках Н.к. связаны с белками, образуя нуклеопротеиды. Выделение Н.к. сводится преим. к очистке их от белков. Для этого препараты, содержащие Н.к., обрабатывают ПАВ и экстрагируют белки фенолом. Послед, очистка и фракционирование Н.к. проводятся с помощью ультрацентрифугирования, разл. видов жидкостной хроматографии и гель-электрофореза. Для получения индивидуальных Н.к. обычно используют разл. варианты последнего метода. [c.299]

Большинство работ по изучению биосинтеза природных соединений проводилось на целых растениях и интактных микробных клетках. Такой подход обычно применим для ряда простых предшественников, которые легко преодолевают барьер клеточных стенок однако иногда, особенно в случае сложных предшественников, например олигопептидов, проницаемость клеточных мембран может стать серьезным ограничением. Даже если этот фактор ие стал лимитирующим, сложные промежуточные соединения внутри клетки могут подвергаться действию других ферментов, помимо ферментов, участвующих в исследуемом биосинтетическом пути. В этой связи понятно, что дальнейший прогресс в изучении биосинтеза невозможен без привлечения специальных биохимических методов, в особенности техники работы в бесклеточных системах и с фракционированными ферментами. В последние годы в этом направлении наметились определенные сдвиги [15]. [c.349]

Пенное фракционирование, флотация, в том числе и электрофлотация, основаны на способности пузырьков газа (воздуха, водорода, кислорода и др.) в присутствии ПАВ поднимать клетки микроорганизмов на поверхность жидкости при это.м образуется иена, которую отделяют и разрушают, получая концентрированную суспензию микроорганизмов и очищенную воду. [c.192]

Такой способ фракционирования можно сочетать с выделением пробы. Например, при исследовании липидных фракций одноклеточных организмов первой стадией является деструкция клетки, обычно выполняемая под давлением или с помощью ультразвука. В любом случае разрушаемые клетки помещают в метанольный или водный раствор. Раствор сильно подщелачивают (10%-ный раствор гидроксида натрия) и оставляют на ночь. На этой стадии большинство эфирных связей (триглицериды) гидролизуются, а свободные кислоты, конечно, полностью нейтрализуются сильным основанием. Экстракция таким неполярным растворителем, как -гептан, приводит к удалению только так называемых не омыляемых липидов (стеринов), не затрагивая заметную часть основы клеточного вещества. Большие массы остатков органического вещества клетки могут создавать затруднения при экстракции, особенно после гидролиза. Поэтому перед экстракцией удобно проводить чисто механическое разделение — удалять остатки органических веществ центрифугированием. Фракция, содержащая жирные кислоты, может быть получена подкислением водной фазы с последующей второй экстракцией гептаном. [c.516]

Начальным этапом в изучении структуры и функции нуклеиновой кислоты является ее выделение из клетки или субклеточных частиц и очистка от различного рода примесей. Заключительный этап — фракционирование для получения препаратов, гомогенных по химическому составу, молекулярному весу и надмолекулярной организации. Естественно, что схема выделения может существенно изменяться в зависимости от природы исходного материала. Подробное описание методик можно найти [c.66]

Основной принцип фракционирования с помощью волокон показан на рис. 6.16. Подходящие для этой цели молекулы или макромолекулы присоединены соответствующим химическим способом к нейлоновым волокнам, натянутым на рамку. Диссоциирующие клетки отделяют встряхиванием волокон в подходящей для диссоциации среде, а несорбированные клетки отмывают. Связанные клетки могут быть затем перенесены на волокнах в другую среду к в дальнейшем охарактеризованы или их можно получить в свободном виде в среде путем снятия их с натянутого волокна [c.136]

Настоящая книга, издаваемая в серии научных трудов ВИР, освещает методы и методики по определению содержания нуклеиновых кислот в растительных тканях и препаратах. В ней также изложены — идентификация и количественный учет свободных нуклеотидов выделение нативных РНК и ДНК из растений фракционирование их на колонках определение нуклеотидного состава РНК и ДНК методами колоночной и бумажной хроматографии изучение свойств макромолекул нуклеиновых кислот, обнаружение их в клетке, цитофотометрия, определение состояния ДНК и РНК в клетке. [c.2]

Получение и формула. Экстракция из поджелудочной келезы крупного рогатого скота 0,25 и. раствором серной кислоты, последующее фракционирование сульфатом аммония, активация фракции трипсиногена в присутствии ионов диализ и лиофилизация. Представляет собой протеолитический фермент, вырабатываемый в клетках.поджелудочной железы. М, м. около 23 800. . [c.396]

Изучение клеточной организации и попытки установить связь между структурой и функцией на различных иерархических уровнях — от простых молекул до макромолекул и таких агрегатов, как мембраны или частицы, до субклеточных единиц и, наконец, клеток — все это составляет одну из самых увлекательных и перспективных областей исследования в современной биологии. Для биохимика и цитолога выяснение химического значения различных сложных структурных элементов, обнаруженных в клетке, важно не только само по себе оно является необходимой ступенью любого исследования, направленного на то, чтобы понять, как происходит синтез, распад и взаимодействие этих элементов. Мы начинаем догадываться, что именно в этих сложных структурах скрыт секрет механизмов, с помощью которых осуществляется регуляция клеточных процессов как в пространстве, так и во времени. Этот секрет, возможно, заключается, по крайней мере отчасти, в том, что различные клеточные компоненты — главным образом ферменты, а также их субстраты и модификаторы (активаторы и ингибиторы) — находятся в разных отсеках клетки и потому не всегда доступны друг для друга. Из сказанного вытекает два вывода, подтвержденных в последнее время многочисленными экспериментальными данными 1) в клетке существует четкое распределение некоторых ключевых компонентов, особенно ферментов они локализуются в (или на) определенных клеточных структурах, представляющих собой микроскопические внутриклеточные органы, так называемых органеллах 2) эти структуры, а вместе с ними и соответствующие клеточные компоненты можно выделить с помощью подходящих мягких методов разрушения клеток (гомогенизация) и последующего фракционирования. [c.239]

Ниже мы очень кратко рассмотрим данные по анатомии клетки, полученные с помощью электронного микроскопа, и опишем соответствующие клеточные структуры затем мы обсудим методику фракционирования клеточных компонентов и некоторые свойства получаемых фракций и, наконец, попытаемся как-то оценить эти данные с точки зрения биохимии и энзимологии. [c.239]

При данной скорости вращения ротора время, требующееся для осаждения в центрифуге популяции гомогенных частиц, обратно пропорционально квадрату их радиусов и первой степени разности между плотностями частиц и среды и прямо пропорционально вязкости среды. Таким образом, относительно гомогенные, приблизительно сферические частицы с примерно одинаковой плотностью могут быть отнесены к разным классам на основании одних только различий во времени, необходимом для их осаждения. Именно на этом и основана классическая схема фракционирования клеточных компонентов. Вначале удаляют целые клетки и крупные обломки клеток затем — фракцию, содержащую крупные и плотные ядра (плотность ДНК при 4° равна а плотность большинства белков — только 1,188) [c.249]

Хотя доступные в настоящее время препараты ДНК бактерий, животных и растений, несомненно, представляют собой многокомпонентные смеси, эффективного их фракционирования с помощью существующих методов добиться не удается. В отдельных случаях, однако, удается получить данные, указывающие на присутствие в суммарном препарате ДНК полинуклеотидов, отличающихся по своим свойствам от основной массы ДНК клеточного ядра и являющихся, таким образом, особыми разновидностями ДНК. Так, из препаратов ДНК бактерий при фракционировании с помощью противоточного распределения, центрифугирования в градиенте сахарозы, хроматографии на фосфате кальция или колонках с МАК получены фракции, свойства которых соответствуют свойствам одноцепочечной ДНК (см., например, предполагается, что такая ДНК является промежуточным продуктом при воспроизведении ДНК в клетке. [c.34]

IV. МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ КЛЕТКИ [c.10]

Обычно нри исследовании транспортных РНК изучают их взаимодействие с радиоактивной аминокислотой в присутствии активирующего фермента, АТФ и ионов магния. Затем РНК осаждают, промывают кислотой и определяют количество радиоактивной аминокислоты, связанной с РНК. Техника фракционирования позволяет изолировать транспортные РНК, способные акцептировать ту или иную специфическую аминокислоту [2]. Из этого следует, что смесь РНК, получаемая из клетки, содержит различные транспортные РНК, специфичные в отношении различных аминокислот. [c.197]

IV. Методы фракционирования клетки....................................10 [c.618]

В биологии также встречаются примеры фракционирования живых клеток организма, например, у губок - наиболее примитивных многоклеточных, животных. Они состоят из клеток всего пяти или шести типов. Губку мож-но разделить на отдельные клетки, осторожно продавив взрослый организм через мелкое сито. Эти клетки быстро снова агрегируют, и в конце концов такой агрегат реорганизуется в нормальную губку. В классическом опыте такого рода смещивали клетки двух видов губок разного цвета. Клетки слипались, образуя раздельные агрегаты одного и другого цвета (рис. 11), Хотя этот результат можно получить не со всеми видами губок, он показывает, что некоторые клетки взрослой губки способны отличать клетки своего вида от чужих [24]. [c.22]

Всякому структурному исследованию ДНК или РНК предшествуют выделение их из клеток, очистка и фракционирование. Поскольку в клетке нуклеиновые кислоты практически всегда находятся в комплексес белками (т. е. в вил, нуклеопротеидов), их выделение сводится в основном к очистке от белков (депротеинизации). Чаще всего нуклеиновые кислоты экстрагируют из гомогенатов клеток или очищенных клеточных органелл смесью фенол — вода В присутствии ионных детергентов (например, додецилсульфата натрия). При этом белки (и ряд других клеточных компонентов) переходят в органическую фазу, а нуклеиновая кислота остается в водной фазе. Из водного раствора ДНК или РНК осаждают спиртом. [c.10]

Способность кизельгура прочно сорбировать белки была использована В. С. Шапотом п сотрудниками, предложившими изящный метод фракционирования нуклеиновых кислот, входящих в состав клеточных нуклеонротеидов. Клетки гепатомы Зайделя, пометив предварительно в них РНК С- или Ш-уридином, а ДНК — Ш-ти-мпдпном, вскрывали детергентом, а гомогенат вносили на колонку, [c.245]

Ткань измельчают либо в мясорубке, либо, если нужна более мягкая обработка, в гомогенизаторе. Клетки микробов чаще всего разрушают с помощью ультразвука или продавливанием через пресс под высоким давлением. При фракционировании очень важно подобрать нужное значение pH и состав буфера, а при выделении субклеточных органелл— осмотическое давление. Для сохранения целостности органелл часто в качестве суспендирующей среды используют 0,25 М сахарозу, к которой добавляют Mg U, а также реагент, образующий комплекс с металлами, например этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) (табл. 4-2). Растворимые ферменты обычно экстрагируют без добавления сахарозы, но при этом используют восстановители — глутатион (дополнение 7-Б), меркаптоэтанол или дитиотреитол (разд. 3.3.а). [c.158]

Среди структурных белков особое место занимают кератины, поскольку они были первыми белками, изученными Астбюри метолом диффракции рентгеновских лучей. Их нерастворимость и биохимическая инертность не способствовали, однако, достаточному уровню активности исследований. Кератины образуют защищающие от внешней среды барьеры типа рогов, копыт, когтей, волос, шерсти и перьев. В перьях содержатся р-структуры, в то время как для волос и шерсти характерны а-спиральные структуры. Последние состоят из белков с низким содержанием серы эти микрофибриллы окружены матрицей двух других типов, одной с высоким содержанием глицина и тирозина, а другой—с высоким йроцентом серы. Во время синтеза прокератина в эпителиальных клетках в богатых серой белках имеются большие количества тиольных групп, образующих впоследствии дисульфидные связи, делающие кератин более жестким. Потерю волосами механической прочности при их обработке отбеливающими или восстанавливающими агентами (завивка-перманент) можно частично объяснить за счет расщепления дисульфидных связей. Восстановление и карбо-ксиметилирование дисульфидных связей (см. разд. 23.3.3) сделали возможным солюбилизацию и фракционирование некоторых компонентов кератина для последующего секвенирования [29]. В одном [c.572]

Фракционирование клеток легких крыс показало [239], что амин практически равномерно распределен во всех фракциях. Максимальная концентрация ацетамида сосредоточена в раотвори-мой и митохондриальной фракциях, где гетероциклические амины подвергаются действию ароматических N-ацетилтрансфераз. В клетках сердца нитразепам содержится в основном в обломках клеток и растворимой фракции, в то время как его метаболиты равномерно распределены во всех изучаемых органах. По-видимому, метаболиты нитразепама поступают в сердце из других органов и тканей, в которых возможны процессы восстановления и ацетилирования. Аналогично объясняется наличие амина в микросомах мозга. [c.207]

В последние годы проведен ряд работ по изучению процесса развития клеток в суспензиях. Показано, что клетки клена белого, развивающиеся в этих условиях, содержат водорастворимые полисахариды ГМЦ. После фракционирования с помощью ИОХ и ГПХ и очистки щелочью и а-(1—>-4)-эндополигалактуроназо выявлено присутствие в их составе ксилоглюкана, арабиноксилана и двух видов арабиногалактанов. Сделан вывод, что все нецеллюлозные полисахариды клеточных стенок клена белого присутствуют в составе водорастворимых полисахаридов, секретируемых клетками. [c.102]

Агарозные гели используются для фракционирования белкоа и нуклеиновых кислот (гель-фильтрация, электрофорез) и их характеристики (иммунодиффузия, иммуиоэлектрофорез). Б агаровых гелях иммобилизуют бактерии и лимфоидные клетки а молекуляр-но-биологических и иммунологических исследованиях. [c.501]

Во время роста в клетке имеется большое количество промежуточных и лабильных веществ. Современные методы исследования клеток, фракционирование, микроанализ составных частей, хроматографическое разделение и характеризация нуклеиновых кислот, авторадиография, использование радиоактивной метки и, для клеток с хорошо определенными ядрами, сравнение целых и энуклеированных клеток — все это позволило накопить множество фактов, на основании которых был создан ряд широко обсуждаемых в литературе теорий. В этих теориях фигурирует несколько различных типов РНК одни синтезируются в ядре и мигрируют к рибосомам, другие имеют низкий молекулярный вес некоторые относительно устойчивы, другие имеют малую продолжительность жизпи. Основное внимание в обсуждении обращено сейчас на чтение , перенос и транскрипцию генетической информации. Но в то же время все это связано со сложной системой растущих макромолекул. Большой интервал молекулярных весов, лабильность и необычайная реакционная спо собность — все это заставляет думать о растущих цепях, длина которых меняется и варьирует в широких пределах. Короткожи-вущая мессенджер — РНК действует, как постулируется, в качестве матрицы для синтеза белка на рибосомах, принося информацию от ДНК, тогда как другое лабильное вещество — РНК — переносчик действует как адаптер, ответственный за прикрепление нужной аминокислоты на нужное место. Однако все движение взад и вперед этих лабильных соединений сопряжено с постоянным ростом огромной стабильной макромолекулы. [c.529]

Основные научные работы — в области биохимии нуклеиновых кислот. До 1964 занимался синтезом физиологически активных гетероциклических соединений пиримидинового ряда. Разработал твердофазный метод химического фракционирования транспортных рибонуклеиновых кислот на полиакрил-гидразидных сорбентах. Создал комплекс методов ультрамикро-биохимического анализа, позволяющий проводить исследование нуклеиновых кислот, белков и ферментов в масштабе отдельной клетки. Занимался изучением транспорта нуклеиновых кислот на модели гигантской одноклеточной водоросли — ацетобулярии и показал, что транспорт кислот не коррелирует с полярным ростом клетки (1973—1974), Осуществил сборку жизнеспособной клетки из отдельных компонентов — цитоплазмы, ядра и клеточной стенки, С 1974 занимается синтезом химических эквивалентов структурных генов белков и их встройкой а [c.613]

Данная глава посвящена выделению хроматографическими методами интактных клеток и субклеточных частиц. Многие исследователи выделяют вирусы и субклеточные частицы хроматографированием на пористых стеклах, гелях, ионитах для фракционирования клеток чаще всего пользуются пористыми стеклами. Очевидно, наиболее перспективным в этом отношении методом следует считать аффинную хроматографию. Действительно, фракционирование клеток на хроматографических носителях, так называемая хроматография сцепления (adheren e), имеет много общего с аффинной хроматографией. Клетки определенного типа вначале более или менее избирательно сорбируют на носителе, а затем после удаления сопутствующих примесей элюируют подходящим элюентом. Однако на практике вторую стадию часто опускают и проводят элюирование путем экстракции в статических условиях. И наоборот, многие операции, проводимые в статических условиях, можно выполнять на хроматографических колонках. Именно по этой причине чрезвычайно трудно провести четкую границу между строго хроматографическими методами и элюированием в статических условиях. [c.309]

Необходимая стадия прн выделении большинства Б.— механич, разрушение клеток и экстракция требуемого Б. Иногда экстракции предшествует фракционирование содержимого клетки но субклеточным фракциям с помощью препаративного ультрацентрифугиро-вания. Известны также методики выделения, согласно к-рым механич. разрушения клеток не происходит. Такие методики применяют обычно для выделения внеклеточных Б. (напр., протеолитич. ферментов, гормонов, белков, гликопротеидов и липопротеидов плазмы крови, гликопротеидов соединительной ткани). Именно этот класс Б. наиболее доступен. [c.129]

Источником получения ДНК обычно является ви-лочковая железа (тимус) телят, т. к. в ее клетках ядра составляют больше половины объема. Для получения РНК удобнее всего использовать дрожжи. Н. к. всегда тесно связаны с белками в нуклеопротеидных структурах. Для их освобождения проводят денатурацию белков добавлением к взвеси клеток (предварительно вскрытых путем разрушения их оболочки ) р-ра фенола высокой концентрации, а также нек-рых детергентов (напр., додецилсульфата) или хлороформа. Обычно фенольная депротеинизация ведется так, что фенола дается большой избыток и после отстаивания или центрифугирования образуются два слоя внизу — фенол, насыщенный водой, сверху — вода, насыщенная фенолом. Денатурированные белки сосредоточиваются в нижнем слое и у границы раздела, Н. к.— в верхнем водном слое, откуда их осаждают спиртом. При фенольной экстракции возможно частичное фракционирование Н. к. на ДНК (растворяется преимущественно при pH9) и РНК (растворима и при рН5). Однако полностью отделить ДНК и РНК друг от друга удается только дополнительным воздействием специфическими гидролитич. ферментами ДНК-азой и РНК-азой. Эти ферменты добьхваются из поджелудочной железы рогатого скота, подвергаются тщательной очистке и кристаллизации. Действуя ДНК-азой, разрушают ДНК и получают чистую РНК. С помощью РНК-азы очищают ДНК от РНК. После ферментативной обработки полученные продукты снова подвергают фенольной депротеинизации с последующим осаждением Н. к. спиртом. [c.189]

Очевидно, что более высокие концентрации аминокислот приведут к более высокому проценту их включения до определенного уровня насыщения. Чтобы количественно сравнить включение меченых аминокислот (выраженное, например, через удельную радиоактивность фракционированных и нефракционированных белков из исследуемых участков мозга), надо внести поправки на влияние колебаний в концентрации меченых аминокислот. Следовательно, необходимо знать математическую зависимость между удельной активностью белка и концентрацией меченой аминокислоты в тех клетках, из которых выделены эти белки. Если же эта зависимость известна, то удельную радиоактивность белковых фракций в микрогеле можно соотнести с той же концентрацией аминокислот. Таким образом, станет возможным количественное сравнение вклкхчения предшественников. Чтобы установить, существует ли линейная зависимость между удельной радиоактивностью белка и концентрацией свободных аминокислот, и определить возможный диапазон такой зависимости, мы поставили следующие эксперименты (см. схему 1). [c.292]

Фракционирование клеток в солевом растворе осложняется тенденцией гранул образовывать скопления и осаждаться в виде комков, а не в виде отдельных частиц. Это нежелательное явление можно предотвратить, измельчая клетки в 0,88 М растворе сахарозы, в котором митохондрии сохраняют палочковидное строение и способность к суправитальному окрашиванию янусом зеленым В. Однако при указанной концентрации сахарозы среда становится настолько вязкой и плотной, что для осаяедения субклеточных фракций приходится использовать чрезвычайно высокие скорости центрифугирования. Поэтому в современных исследованиях в качестве среды для измельчения клеток используют 0,25 М раствор сахарозы, в котором не происходит агрегации гранул и легко выделяется фракция митохондрий. Последние при этом обладают теми я е биохимическими свойствами, что и митохондрии, получаемые в 0,88 М растворе сахарозы, хотя они уяге не окрашиваются янусом зеленым В и имеют скорее шаровидную, а не удлиненную форму. При разделении путем дифференциального центрифугирования субклеточных фракций из гомогената в 0,25 М растворе сахарозы, полученного в гомогенизаторе Поттера — Эльвейема, удаление ядер и клеточных обломков, включая [c.130]

Е. — щироко распространенный фермент присутствует во всех клетках, способных осуществлять гли-колитическое расщепление углеводов выделена в кристаллич. состоянии из дрожжей путем фракционирования бесклеточного сока спиртом и ацетоном с последующей кристаллизацией в виде ртутного комплекса из насыщенного раствора. [c.613]

Митохондрии изучены, вероятно, лучше всех других внутриклеточных частиц как в смысле их фракционирования, так и в отношении их функций. В результате всех исследований (см. последний раздел этой главы) сложилось представление, что митохондрии — это те места в клетке, где происходит генерирование и транспорт внутриклеточной энергии. Большая часть ферментов цикла лимонной кислоты (см. гл. XIV) и некоторые вспомогательные окислительные ферментные системы, например пируватдегидроге-назный комплекс (см. гл. XI) и система Р-окисления жирных кислот (см. гл. XIII), локализуются, по-видимому, либо на наружной мембране (от кото- [c.243]

Обычно вначале проводят фракционирование по какой-либо схеме, а затем избирают определенные ферменты, активности или какие-либо ееш ества в качестве так называемых маркеров, или индикаторов, которые, судя по опыту, могут быть полезны для идентификации некоторых внутриклеточных частиц или компонентов. На основании полученных результатов вычерчивают кривую распределения и таким образом определяют частицы с точки зрения характерных биохимических активностей или, наоборот, приписывают характерные биохимические свойства различным типам частиц. Распространение этого метода на весь спектр ферментов и других индикаторов позволяет закрепить определенные функции клетки за известными внутриклеточными компонентами и, наоборот, описать и впоследствии идентифицировать новые, или но крайней мере ранее не известные, морфологические компоненты на основании биохимических данных. Примером успешного применения такого подхода является отождествление частиц кислой фосфатазы с лизосомами, а частиц уратоксидазы с микротельцами (называемыми также пероксидосомами) в печени млекопитающих. В основе этого подхода лежат два главных допущения, отмеченных де Дювом 1) каждый из ферментов локализуется только в одном каком-либо месте внутри клетки и 2) популяция субклеточных частиц в ферментативном отношении гомогенна. [c.251]

При разделении субклеточных компонентов мы сталкиваемся с двумя основными затруднениями. Первое из них связано с возможностью возникновения артефактов. В процессе разделения могут образоваться структуры, которых не было в исходной клетке. К артефактам относится, например, расщепление индивидуальных клеточных компонентов на субъединицы, утрата биологической активности субклеточными компонентами (в результате ферментативной шш иной деградации) в процессе выделения, неспецифическое связывание белков с нуклеиновыми кислотами и т. д. Хотя нет единого и притом надежного способа избежать артефактов, но в общеммы можем сказать, что при соблюдении определенных условий вероятность появления артефактов можно свести к минимуму. Условия эти следующие быстрота проведения всех операций по фракционированию, работа на холоду, применение наиболее мягких спо- [c.11]

В тканях животных, высших растений и вообще большинства аэробных организмов окислительное фосфорилирование и взаимодействие клетки с кислородом (этот процесс изображается уравнением СвН гОе -Ь 6О2 бСОг -Ь 6Н2О) осуществляется в митохондриях. Митохондрии известны цитологам уже много лет, но понимание их важной роли в клетке пришло лишь с открытием специфических окислительных реакций, обнаружением цитохромов и цитохромоксидазы, с развитием методик и усовершенствованием аппаратуры для количественного фракционирования цитоплазмы. [c.56]

Компримирование и осушка газа пиролиза. Этилен из газа пиролиза выделяют при низких температурах и высоких давлениях. Перед фракционированием газ компримируют. Осушка необходима потому, что газообразные углеводороды при низких температурах и высоком давлении образуют с водой гидраты — кристаллические комплексы типа СН4-6Н20 СгНе-ТИгО и т. д. Кристаллогидраты представляют собой клатратные соединения клеточной структуры. В данном случае клатратообразователем (КО) является вода соединение +КО клатрат (твердый). Молекулы клетки (воды) соединены между собой водородными связями, и заключенная в клетку молекула углеводорода не может вырваться . Кристаллогидраты затрудняют транспортирование газа, а при разделении газа пиролиза выпадение кристаллогидратов и льда может вызвать забивание аппаратуры и нарушение нормальной работы газофракционирующей установки. [c.40]

Если бы к такому заключению пришли только на основании наличия в митохондриях всех дыхательных ферментов, то оно было бы, несомненно, убедительным, но не безоговорочным. Однако благодаря успехам техники фракционирования удалось добиться гораздо большего. Можно показать, и притом количественно, что в митохондриях дыхание продолжается и in vitro при этом потребляются О2 и фосфат и образуются СО2 и АТФ. Для этого нужно только снабжать митохондрии достаточным количеством субстрата и фосфата, а также некоторыми другими веществами, так называемыми кофакторами (например, АДФ ). Кроме того, следует учесть еще одно обстоятельство. Если митохондрии после центрифугирования поместить в чистую воду, то они испытывают осмотический шок и в результате разбухают и лопаются (подобное явление уже было описано для бактериофага см. стр. 153). Конечно, о дыхании в этом случае больше не может быть и речи. Поэтому для предотвращения шока к суспензии митохондрий обычно добавляют сахарозу в определенной концентрации эта концентрация должна как можно более точно соответствовать осмотической концентрации содержимого митохондрий. Если это соответствие соблюдается недостаточно точно (или при недостатке одного из кофакторов), также будет происходить легкое набухание митохондрий. Правда, при этом они еще сохраняют способность потреблять кислород и образовывать Oj, однако образование АТФ прекращается. Окисление и фосфорилирование, протекавшие до этого взаимосвязанно, сопряженно, теперь разъединены . Дыхание идет вхолостую , не достигая своей цели, которая состоит, как мы знаем, в образовании АТФ. Митохондрии в этом случае быстро разрушаются. Такое разобщение окисления и фосфорилирования весьма важно для понимания многих биохимических процессов правда, обсуждать их здесь означало бы слишком далеко отойти от темы. Здесь нам важно знать, что сопряженное фосфорилирование есть признак того, что митохондрии не повреждены и нормально функционируют — как в пробирке, так и в клетке. (Следует отметить, что в митохондриях, по-видимому, происходят и другие биохимические процессы помимо дыхания, например синтез аминокислот.) [c.224]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология