Рабдовирусы

Ф II г. 37. Электронная микрофотография и схема рабдовируса. [c.146]

Большинство методов очистки вирусов растений не подходит для рабдовирусов, поскольку предусматривают осветление грубых растительных экстрактов прогреванием при 55—60°С или обработкой органическими растворителями [4]. Неприемлемость этих процедур для очистки рабдовирусов обусловлена, [c.126]

ВВС титруют стандартным методом бляшек. Однако этот простой и точный метод определения инфекционности применим не ко всем рабдовирусам. Для многих с успехом применялись альтернативные подходы, в том числе модификации метода бляшек. [c.116]

Пулевидные вирусы Рабдовирусы Двухцепочечная РНК [c.287]

Рабдовирусы отличают пулевидная форма, наличие оболочки, спиральная симметрия геном образован РНК. Средние размеры вириона — 180 X 75 нм один конец закруглен, другой плоский поверхность выпуклая с шарообразными структурами. Сердцевина вириона симметрично закручена внутри оболочки по продольной оси частицы. [c.141]

Другая группа палочковидных вирусов, компоненты которых имеют спиральную структуру, получила название рабдовирусов. Наиболее известным представителем этой группы является вирус везикулярного стоматита. Размеры этого вируса составляют 180 х 70 нм. По форме он напоминает пулю, так как один его конец уплощен вирус покрыт мембраной с остроконечными выступами (шипами) [222, 342, 454]. Однако наряду с частицами, имеющими форму пули, часто можно наблюдать и короткие неинфекционные частицы этого вируса. Результаты последних работ по изучению одного из многих сходных вирусов растений (вируса полосатой мозаики пшеницы) [288] дают основания думать, что форма пули могла возникнуть по следующим причинам. В определенном легко уязвимом месте вирусная частица размером 260 X [c.148]

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ, ОЧИСТКА И ТИТРОВАНИЕ РАБДОВИРУСОВ [c.112]

С вирусом бешенства, обязательно должен быть вакцинирован и иметь в крови защитный титр противовирусных антител, заданный нормами Всемирной организации здравоохранения [7]. Кроме того, в настоящей главе особое внимание уделено очистке рабдовирусов растений, поскольку эта процедура встречается с значительными трудностями. [c.113]

Наращивание рабдовирусов в культурах клеток [c.113]

Обычно лабораторные культуры заражают либо адаптированным к размножению in vitro вирусом, либо неадаптированным, содержащимся в зараженных тканях или выделениях. Многие первичные клеточные культуры и перевиваемые линии, используемые для выделения рабдовирусов, детально рассмотрены в недавно опубликованном обзоре [8]. ВВС эффективно размножается почти во всех известных в настоящее время линиях клеток млекопитающих и птиц. Особенно высокий выход ВВС дает на первичной культуре фибробластов куриного эмбриона [9] или перевиваемой линии клеток ВНК-21 [Ю], причем одинаково высокие титры получают как при размножении вируса в монослойной, так и в суспензионной культурах [И]. Кривые нарастания титра ВВС в одиночном цикле размножения практически совпадают для двух типов культур. Выход дочерних частиц ВВС из клеток начинается через 2 ч после заражения после этого в течение 6—8 ч выход вируса нарастает по логарифмическому закону. Максимальный выход, достигающий 1000 БОЕ/кл, наблюдается через 10—12 ч после заражения. [c.113]

Для определения продолжительности цикла размножения рабдовируса в культуре клеток вирус вносят в концентрации, достаточной для заражения всех клеток. После адсорбции вируса на монослое клетки отмывают от несвязавшегося вируса, добавляют предварительно нагретую культуральную среду и продолжают инкубацию при 37 °С. Через определенные промежутки времени в образцах зараженной культуры определяют содержание вируса. Для этого либо снимают клетки со стекла палочкой и разрушают их с помощью 3 циклов замораживания—-оттаивания (можно также один раз заморозить клетки при —60°С в бане из метанола и сухого льда и дать им быстро оттаять при 37°С), либо обрабатывают клетки I—2 мин ультразвуком, чтобы освободить вирус, ассоциированный с клетка- [c.113]

Рабдовирусы, обладающие цитопатогенным действием на клеточные культуры, дают бляшки, число которых пропорционально количеству вируса. Определение числа бляшек, образующихся в результате дегенерации зараженных клеток, лежит в основе наиболее точного метода титрования. Число бляшек (х), сформировавшихся при нанесении на клеточный монослой определенного разведения вируса (у) в объеме V, можно использовать для расчета титра (п) в БОЕ/мл по уравнению [c.116]

На сегодня к рабдовирусам условно относят более 60 виру сов [19]. Главным критерием их классификации служит морфология рабдо означает палочковидный все рабдовирусы вытянуты в длину и имеют форму или пули (закругленные на одном конце и плоские на другом), или бациллы (закругленные на обоих концах). Классификация, основанная исключительна на морфологии, привела к весьма странному на первый взгляд объединению вирусов, инфекционных для столь несхожих хозяев, как растения, млекопитающие, рыбы и насекомые (табл. 23.1). При более полном сопоставлении довольно неожиданно выяснилось, что некоторые из этих вирусов помимо характерной морфологии имеют много других общих свойств и несмотря на весьма различный спектр хозяев, оказываются родственными. [c.418]

Примечание. В случае быстро размножающихся рабдовирусов, например ВВС, удается через 2 сут после заражения визуально определить предельное разведение, при котором наблюдается ЦПД, и, исходя из этого, рассчитать титр исходного вируса. Для многих вирусов, которые размножаются медленнее и не обладают ЦПД, после нескольких суток инкубации титр рассчитывают по тому максимальному разведению, при [c.120]

Наиболее широко используемый метод концентрирования рабдовирусов — осаждение высокоскоростным центрифугированием (естественно, для этого в лаборатории должна быть ультрацентрифуга с подходящим ротором). Коэффициент седиментации стандартных инфекционных частиц ВВС и вируса бешенства составляет около 600S длина ДИЧ на 1/3—3/4 меньше длины стандартных вирионов, и соответственно они имеют меньшие коэффициенты седиментации [25]. В большинстве лабораторий для выделения вируса из инфицированных тканей осветленную содержащую вирус культуральную жидкость в ламинарном боксе переносят в плотно закрывающиеся центрифужные пробирки или стаканы большого объема (250 мл) от соответствующего углового или бакет-ротора, например центрифуги Spin o (Be kman) и др. [c.124]

Вирионы рабдовирусов имеют весьма характерную структуру в препаратах, окрашенных методом негативного контрастирования, обнаруживаются частицы вариабельной длины, имеющие закругленный и уплощенный концы (так называемые пулевидные частицы). Нормальные инфекционные вирионы имеют длину 170—180 нм и диаметр 70 нм. Дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ) сохраняют характерную для инфекционных частиц пулевидную форму, но имеют меньшую длину. Они неинфекционны и накапливаются в возрастающем количестве при пассировании большинства типичных рабдовирусов без разведения благодаря их способности успешно конкурировать (интерферировать) с нормальными инфекционными частицами. ДИЧ имеют такой же химический состав, как и стандартные вирионы, но их геномная РНК имеет меньший размер. ДИЧ и стандартные вирионы данного вируса существенно различаются по коэффициентам седиментации, что используется для их разделения методом зонального центрифугирования. Метод, описанный ниже, эффективен для очистки вируса из культуральной среды. Хотя рабдовирусы высвобождаются из зара- [c.123]

Альтернативные методы концентрирования рабдовирусов — преципитация сульфатом аммония или ПЭГ 6000. [c.125]

На третьем (и последнем) этапе очистки рабдовирусов отделяют стандартные инфекционные вирионы от ДИЧ, которые могут присутствовать в составе вирусного потомства. Разделение достигается центрифугированием вирусного препарата в линейном градиенте концентрации сахарозы благодаря раа-личию коэффициентов седиментации инфекционных вирионов и ДИЧ. Седиментация вируса в градиенте концентрации сахарозы обычно сопровождается снижением инфекционности в 2— [c.126]

Культивирование, очистка и титрование рабдовирусов 127 [c.127]

Цикл размножения некоторых рабдовирусов, например ВВС, короткий и составляет несколько часов, других же, например вируса бешенства, — более длинный и составляет несколько суток. Точно неизвестно, почему одни вирусы размножаются более эффективно, чем другие, хотя предполагают, что эффективность размножения определяется уровнем активности вири-онной транскриптазы. [c.114]

В момент заражения монослой должен быть еще не плотным. Для некоторых рабдовирусов иногда трудно обеспечить строгую синхронизацию, необходимую для прохождения одного цикла размножения, даже при очень высокой множественности инфекции. Тем не менее инфицирование клеток большим количеством вируса для того, чтобы заразить каждую клетку, позволяет приблизиться к таким условиям. Действительно, если все клетки заражены, то, естественно, может пройти только один цикл репродукции вируса. Однако существует и верхний предел множественности инфекции. При очень высокой множественности может наблюдаться аномальная картина размножения вируса, обусловленная накоплением дефектных интерферирующих частиц (см. разд. 3.1.1) и реадсорбцией вирионов потомства на клеточном дебрисе. По-видимому, лучше всего в первом опыте использовать множественность инфекции 10 БОЕ/кл, а затем в случае необходимости увеличивать или уменьшать ее в 10 раз. Можно добавить к вирусу или культуральной среде некоторые полиионы для стимуляции связывания вируса с клетками и повышения инфекционности [13]. Такое стимулирующее воздействие оказывают диэтиламиноэтил (ДЭАЭ)-декстран и протаминсульфат в концентрациях 50 и 100 мкг/мл соответственно, если их добавляют к клеткам до внесения вируса (за 4 ч или менее). После внесения вируса полиионы не оказывают стимулирующего действия. Важно отметить, что некоторые полиионы хотя и способствуют адсорб- [c.114]

Рабдовирусы млекопитающих, принадлежащие к родам Vesi ulovirus и Lissavirus, размножаются в мозге взрослых мышей и крыс после интрацеребрального заражения и могут быть выделены из природного материала после одного пассажа через мозг животных. Однако более чувствительной системой для выявления и размножения этих рабдовирусов являются мыши-сосунки [23]. В зависимости от продолжительности инкубационного периода длительность пассажа в мозге мышей может составлять от 7 до 18 сут, а в случае медленно размножающегося вируса бешенства и больше. Для ВВС инкубационный период, как правило, намного короче (2 сут). Вирус обнаруживают методом иммунофлуоресцеиции. [c.122]

После трансляции запускаются репликация и вторичная транскрипция. За вторичной транскрипцией можно проследить по увеличению скоростей синтеза трех видов комплементарных вирусных мРНК (Ь, М и 5) 1[249]. В клетках, зараженных 88Н, при вторичной транскрипции образуется больше мРНК 5, чем мРНК Ь и М [46, 249]. Если допустить, что буньявирусы подобны рабдовирусам и другим вирусам с негативным геномом, то можно предположить, что переключение с транскрипции на репликацию РНК может определяться доступностью новосинтезированного Ы-белка. Синтез вирусной РНК нечувствителен к актиномицину О или а-аманитину, т. е. для этого процесса не нужен ДНК-зависимый синтез клеточной РНК [44, 249]. Схема процессов трансляции, репликации и транскрипции 5-сегментов РНК буньявирусов показана на рис. 22.5. [c.374]

Разнообразие видов РНК, обнаруживаемых у аренавирусов, ясно показывает, что эти вирусы не имеют механизма для четкого выбора компонентов, участвующих в морфогенезе, характерного для многих других вирусов, например рабдовирусов. Дает ли это свойство им какое-то преимущество при заражении, неизвестно. Отметим также, что частицы аренавирусов часто [c.395]

По сравнению с рабдовирусами инфекционный процесс, вызываемый аренавирусами, более медленный [80, 199] латентный период составляет 3—8 ч [80, 154, 248], тогда как для рабдовируса везикулярного стоматита (VSV) он равен 1 ч. Показано, что время максимальной продукции вируса зависит от температуры инкубации и множественности заражения [1, 48, 84, 138, 140, 248]. При температуре 35—38 °С максимальный титр вируса [(1—5)-10 БОЕ/мл] достигается через 36 ч после заражения (для VSV выход вируса через 4—6 ч составляет 109-1010 БОЕ/мл). [c.401]

К рабдовирусам относится ряд важных в экономическом отношении (патогенных для животных и растений) вирусов, а также летальный вирус бешенства [44]. Их геном представлен одноцепочечной РНК с мол. массой (4—5)-10 , которая кодирует небольшое число белков, обычно пять. В ранних работах показано, что депротеинизированная геномная РНК не инфекционна. Как мы теперь знаем, это наблюдение отражает тот факт, что вирусная РНК имеет негативную полярность (т. е. комплементарна мРНК), и, следовательно, для синтеза мРНК вирус, заражающий клетку, должен содержать вирус-специфи-ческую РНК-зависимую РНК-полимеразу. [c.418]

Рабдовирусы удобно рассматривать как частицы, состоящие из двух структурных единиц с различными функциями рибо-нуклеокапсида и оболочки (рис. 23.1). Геномная РНК инкапси-дируется по всей своей длине единственным главным струк- [c.418]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология