Вирусы рабдовирусы

Пулевидные вирусы Рабдовирусы Двухцепочечная РНК [c.287]

Другая группа палочковидных вирусов, компоненты которых имеют спиральную структуру, получила название рабдовирусов. Наиболее известным представителем этой группы является вирус везикулярного стоматита. Размеры этого вируса составляют 180 х 70 нм. По форме он напоминает пулю, так как один его конец уплощен вирус покрыт мембраной с остроконечными выступами (шипами) [222, 342, 454]. Однако наряду с частицами, имеющими форму пули, часто можно наблюдать и короткие неинфекционные частицы этого вируса. Результаты последних работ по изучению одного из многих сходных вирусов растений (вируса полосатой мозаики пшеницы) [288] дают основания думать, что форма пули могла возникнуть по следующим причинам. В определенном легко уязвимом месте вирусная частица размером 260 X [c.148]

С вирусом бешенства, обязательно должен быть вакцинирован и иметь в крови защитный титр противовирусных антител, заданный нормами Всемирной организации здравоохранения [7]. Кроме того, в настоящей главе особое внимание уделено очистке рабдовирусов растений, поскольку эта процедура встречается с значительными трудностями. [c.113]

Для определения продолжительности цикла размножения рабдовируса в культуре клеток вирус вносят в концентрации, достаточной для заражения всех клеток. После адсорбции вируса на монослое клетки отмывают от несвязавшегося вируса, добавляют предварительно нагретую культуральную среду и продолжают инкубацию при 37 °С. Через определенные промежутки времени в образцах зараженной культуры определяют содержание вируса. Для этого либо снимают клетки со стекла палочкой и разрушают их с помощью 3 циклов замораживания—-оттаивания (можно также один раз заморозить клетки при —60°С в бане из метанола и сухого льда и дать им быстро оттаять при 37°С), либо обрабатывают клетки I—2 мин ультразвуком, чтобы освободить вирус, ассоциированный с клетка- [c.113]

Рабдовирусы, обладающие цитопатогенным действием на клеточные культуры, дают бляшки, число которых пропорционально количеству вируса. Определение числа бляшек, образующихся в результате дегенерации зараженных клеток, лежит в основе наиболее точного метода титрования. Число бляшек (х), сформировавшихся при нанесении на клеточный монослой определенного разведения вируса (у) в объеме V, можно использовать для расчета титра (п) в БОЕ/мл по уравнению [c.116]

Примечание. В случае быстро размножающихся рабдовирусов, например ВВС, удается через 2 сут после заражения визуально определить предельное разведение, при котором наблюдается ЦПД, и, исходя из этого, рассчитать титр исходного вируса. Для многих вирусов, которые размножаются медленнее и не обладают ЦПД, после нескольких суток инкубации титр рассчитывают по тому максимальному разведению, при [c.120]

Вирионы рабдовирусов имеют весьма характерную структуру в препаратах, окрашенных методом негативного контрастирования, обнаруживаются частицы вариабельной длины, имеющие закругленный и уплощенный концы (так называемые пулевидные частицы). Нормальные инфекционные вирионы имеют длину 170—180 нм и диаметр 70 нм. Дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ) сохраняют характерную для инфекционных частиц пулевидную форму, но имеют меньшую длину. Они неинфекционны и накапливаются в возрастающем количестве при пассировании большинства типичных рабдовирусов без разведения благодаря их способности успешно конкурировать (интерферировать) с нормальными инфекционными частицами. ДИЧ имеют такой же химический состав, как и стандартные вирионы, но их геномная РНК имеет меньший размер. ДИЧ и стандартные вирионы данного вируса существенно различаются по коэффициентам седиментации, что используется для их разделения методом зонального центрифугирования. Метод, описанный ниже, эффективен для очистки вируса из культуральной среды. Хотя рабдовирусы высвобождаются из зара- [c.123]

На третьем (и последнем) этапе очистки рабдовирусов отделяют стандартные инфекционные вирионы от ДИЧ, которые могут присутствовать в составе вирусного потомства. Разделение достигается центрифугированием вирусного препарата в линейном градиенте концентрации сахарозы благодаря раа-личию коэффициентов седиментации инфекционных вирионов и ДИЧ. Седиментация вируса в градиенте концентрации сахарозы обычно сопровождается снижением инфекционности в 2— [c.126]

Большинство методов очистки вирусов растений не подходит для рабдовирусов, поскольку предусматривают осветление грубых растительных экстрактов прогреванием при 55—60°С или обработкой органическими растворителями [4]. Неприемлемость этих процедур для очистки рабдовирусов обусловлена, [c.126]

Рабдовирусы, как правило, переносятся членистоногими. Следовательно, рабдовирусы животных могут размножаться в клетках как позвоночных, так и членистоногих, а рабдовирусы )астений — в клетках членистоногих и растительных клетках [19]. ] выяснилось, что вирусы животных не способны размножаться в растительных клетках, а вирусы растений — в клетках позвоночных. Поскольку к рабдовирусам относят огромное количество вирусов, большая часть которых изучена плохо, исчерпывающий сравнительный анализ провести невозможно. Поэтому информация, представленная в следующих разделах,, основывается главным образом на изучении вируса-прототипа— вируса везикулярного стоматита. [c.421]

Объединение в одну главу данных о структуре и репликации орто- и парамиксовирусов в значительной мере произвольно. По многим своим свойствам парамиксовирусы гораздо ближе к рабдовирусам, репликация которых обсуждалась в гл. 23. Однако уже из их названия (от греч. глуха — слизь) становится ясно, что и орто-, и парамиксовирусы обладают особым сродством к мукополисахаридам и гликопротеинам (в частности, к клеточным рецепторам, содержащим сиаловую кислоту). Кроме того, вирусы обеих групп имеют сходные биологические свойства, а именно способность агглютинировать эритроциты, наличие у некоторых представителей нейраминидазы, легкость культивирования в куриных эмбрионах и патогенность для органов дыхания (табл. 24.1). Все эти свойства указывают на эволюционное родство между орто- и парамиксовирусами. [c.446]

Фенотипическое смешивание и гетерозиготность обнаруживаются у парамиксовирусов столь же часто, как и у других вирусов, но носят скорее характер лабораторных курьезов (см. также гл. 7). Фенотипическое смешивание осуществляется даже между представителями разных семейств, когда их структура и способ репликации не слишком различаются. Примером тому могут служить парамиксовирусы и ортомиксовирусы [24] или рабдовирусы и парамиксовирусы [48]. Потомство, содержащее геном одного вируса в овечьей шкуре (оболочке) другого вируса, называют псевдотипами. [c.479]

Главное отличие морфогенеза парамиксовирусов от морфогенеза вируса гриппа состоит во внутриклеточной локализации сборки нуклеокапсидов. Для парамиксовирусов, как и для рабдовирусов, это цитоплазма. Отдельные стадии сборки, а также нерешенные проблемы морфогенеза были рассмотрены в гл. 23. Читатель должен только заменить обозначения белков (вместо N, NS и L в случае рабдовирусов NP, Р и L для парамиксовирусов), и тогда все, изложенное в гл. 23, окажется применимым в данном случае. [c.480]

Рабдовирусы + 70-175 Вирус бешенства [c.39]

Обычно лабораторные культуры заражают либо адаптированным к размножению in vitro вирусом, либо неадаптированным, содержащимся в зараженных тканях или выделениях. Многие первичные клеточные культуры и перевиваемые линии, используемые для выделения рабдовирусов, детально рассмотрены в недавно опубликованном обзоре [8]. ВВС эффективно размножается почти во всех известных в настоящее время линиях клеток млекопитающих и птиц. Особенно высокий выход ВВС дает на первичной культуре фибробластов куриного эмбриона [9] или перевиваемой линии клеток ВНК-21 [Ю], причем одинаково высокие титры получают как при размножении вируса в монослойной, так и в суспензионной культурах [И]. Кривые нарастания титра ВВС в одиночном цикле размножения практически совпадают для двух типов культур. Выход дочерних частиц ВВС из клеток начинается через 2 ч после заражения после этого в течение 6—8 ч выход вируса нарастает по логарифмическому закону. Максимальный выход, достигающий 1000 БОЕ/кл, наблюдается через 10—12 ч после заражения. [c.113]

Цикл размножения некоторых рабдовирусов, например ВВС, короткий и составляет несколько часов, других же, например вируса бешенства, — более длинный и составляет несколько суток. Точно неизвестно, почему одни вирусы размножаются более эффективно, чем другие, хотя предполагают, что эффективность размножения определяется уровнем активности вири-онной транскриптазы. [c.114]

В момент заражения монослой должен быть еще не плотным. Для некоторых рабдовирусов иногда трудно обеспечить строгую синхронизацию, необходимую для прохождения одного цикла размножения, даже при очень высокой множественности инфекции. Тем не менее инфицирование клеток большим количеством вируса для того, чтобы заразить каждую клетку, позволяет приблизиться к таким условиям. Действительно, если все клетки заражены, то, естественно, может пройти только один цикл репродукции вируса. Однако существует и верхний предел множественности инфекции. При очень высокой множественности может наблюдаться аномальная картина размножения вируса, обусловленная накоплением дефектных интерферирующих частиц (см. разд. 3.1.1) и реадсорбцией вирионов потомства на клеточном дебрисе. По-видимому, лучше всего в первом опыте использовать множественность инфекции 10 БОЕ/кл, а затем в случае необходимости увеличивать или уменьшать ее в 10 раз. Можно добавить к вирусу или культуральной среде некоторые полиионы для стимуляции связывания вируса с клетками и повышения инфекционности [13]. Такое стимулирующее воздействие оказывают диэтиламиноэтил (ДЭАЭ)-декстран и протаминсульфат в концентрациях 50 и 100 мкг/мл соответственно, если их добавляют к клеткам до внесения вируса (за 4 ч или менее). После внесения вируса полиионы не оказывают стимулирующего действия. Важно отметить, что некоторые полиионы хотя и способствуют адсорб- [c.114]

Рабдовирусы млекопитающих, принадлежащие к родам Vesi ulovirus и Lissavirus, размножаются в мозге взрослых мышей и крыс после интрацеребрального заражения и могут быть выделены из природного материала после одного пассажа через мозг животных. Однако более чувствительной системой для выявления и размножения этих рабдовирусов являются мыши-сосунки [23]. В зависимости от продолжительности инкубационного периода длительность пассажа в мозге мышей может составлять от 7 до 18 сут, а в случае медленно размножающегося вируса бешенства и больше. Для ВВС инкубационный период, как правило, намного короче (2 сут). Вирус обнаруживают методом иммунофлуоресцеиции. [c.122]

Наиболее широко используемый метод концентрирования рабдовирусов — осаждение высокоскоростным центрифугированием (естественно, для этого в лаборатории должна быть ультрацентрифуга с подходящим ротором). Коэффициент седиментации стандартных инфекционных частиц ВВС и вируса бешенства составляет около 600S длина ДИЧ на 1/3—3/4 меньше длины стандартных вирионов, и соответственно они имеют меньшие коэффициенты седиментации [25]. В большинстве лабораторий для выделения вируса из инфицированных тканей осветленную содержащую вирус культуральную жидкость в ламинарном боксе переносят в плотно закрывающиеся центрифужные пробирки или стаканы большого объема (250 мл) от соответствующего углового или бакет-ротора, например центрифуги Spin o (Be kman) и др. [c.124]

После трансляции запускаются репликация и вторичная транскрипция. За вторичной транскрипцией можно проследить по увеличению скоростей синтеза трех видов комплементарных вирусных мРНК (Ь, М и 5) 1[249]. В клетках, зараженных 88Н, при вторичной транскрипции образуется больше мРНК 5, чем мРНК Ь и М [46, 249]. Если допустить, что буньявирусы подобны рабдовирусам и другим вирусам с негативным геномом, то можно предположить, что переключение с транскрипции на репликацию РНК может определяться доступностью новосинтезированного Ы-белка. Синтез вирусной РНК нечувствителен к актиномицину О или а-аманитину, т. е. для этого процесса не нужен ДНК-зависимый синтез клеточной РНК [44, 249]. Схема процессов трансляции, репликации и транскрипции 5-сегментов РНК буньявирусов показана на рис. 22.5. [c.374]

Разнообразие видов РНК, обнаруживаемых у аренавирусов, ясно показывает, что эти вирусы не имеют механизма для четкого выбора компонентов, участвующих в морфогенезе, характерного для многих других вирусов, например рабдовирусов. Дает ли это свойство им какое-то преимущество при заражении, неизвестно. Отметим также, что частицы аренавирусов часто [c.395]

По сравнению с рабдовирусами инфекционный процесс, вызываемый аренавирусами, более медленный [80, 199] латентный период составляет 3—8 ч [80, 154, 248], тогда как для рабдовируса везикулярного стоматита (VSV) он равен 1 ч. Показано, что время максимальной продукции вируса зависит от температуры инкубации и множественности заражения [1, 48, 84, 138, 140, 248]. При температуре 35—38 °С максимальный титр вируса [(1—5)-10 БОЕ/мл] достигается через 36 ч после заражения (для VSV выход вируса через 4—6 ч составляет 109-1010 БОЕ/мл). [c.401]

На сегодня к рабдовирусам условно относят более 60 виру сов [19]. Главным критерием их классификации служит морфология рабдо означает палочковидный все рабдовирусы вытянуты в длину и имеют форму или пули (закругленные на одном конце и плоские на другом), или бациллы (закругленные на обоих концах). Классификация, основанная исключительна на морфологии, привела к весьма странному на первый взгляд объединению вирусов, инфекционных для столь несхожих хозяев, как растения, млекопитающие, рыбы и насекомые (табл. 23.1). При более полном сопоставлении довольно неожиданно выяснилось, что некоторые из этих вирусов помимо характерной морфологии имеют много других общих свойств и несмотря на весьма различный спектр хозяев, оказываются родственными. [c.418]

К рабдовирусам относится ряд важных в экономическом отношении (патогенных для животных и растений) вирусов, а также летальный вирус бешенства [44]. Их геном представлен одноцепочечной РНК с мол. массой (4—5)-10 , которая кодирует небольшое число белков, обычно пять. В ранних работах показано, что депротеинизированная геномная РНК не инфекционна. Как мы теперь знаем, это наблюдение отражает тот факт, что вирусная РНК имеет негативную полярность (т. е. комплементарна мРНК), и, следовательно, для синтеза мРНК вирус, заражающий клетку, должен содержать вирус-специфи-ческую РНК-зависимую РНК-полимеразу. [c.418]

НЫХ 180 нм, а для рабдовирусов растений — величину несколько большую. Кроме того, многие рабдовирусы образуют делеционные мутанты. Поскольку эти мутанты содержат РНК меньше, чем стандартный вирус, длина их нуклеокапсидов, а следовательно, и зрелых частиц меньше. Раньше делеционные мутанты называли укороченными (trun ated), или Т-частнцами [34 . Теперь же их называют дефектными интерферирующими частицами (или ДИ-частицами), что отражает их биологические свойства. Дело в том, что ДИ-частицы не способны автономно реплицироваться и нуждаются в присутствии стандартного ви- [c.420]

Рабдовирусы животных сходны с другими имеющими оболочку вирусами в том, что вирусным компонентом, ответственным за связывание с рецептором клетки-хозяина, является гли-асопротеин. Поэтому избирательное устранение гликопротеина [c.422]

Отдельные стадии инфекционного процесса, включающие взаимодействие вирус—клетка, дифференцировать довольно трудно. Основные проблемы связаны с тем, что в инфекционном процессе участвует только небольшая доля вирусных частиц поэтому необходимо различать вирусные частицы, продуктивно заражающие клетку и взаимодействующие с ней без продукции вируса. Для того чтобы различить вирусы, проникающие внутрь клетки и просто прикрепляющиеся к ее поверхности, часто используют обработку зараженных клеток протеазой. Поскольку транскрипция — первая стадия синтеза, осуществляемая проникшим вирусом, в качестве показателя продуктивной инфекции часто используют уровень синтеза вирусных мРНК- Учитывая эти обстоятельства, можно сформулировать, общие принципы проникновения рабдовирусов в клетку. Необычайно широкий спектр хозяев VSV свидетельствует о том, что его рецептор является компонентом практически любых клеток. Эксперименты по связыванию вируса с клеткой показывают, что внутрь проникает лишь небольшая часть вирионов, прикрепившихся к клеточной поверхности поэтому поиск рецептора оказался задачей не из легких. Эксперименты по конкурентному связыванию указывают на возможность насыщения рецептора клеток Vero VSV [39]. Обработка клеток протеазой не препятствует связыванию, но его можно полностью ингибировать фос-фатидилсерином — компонентом, общим для всех клеточных мембран [38]. Поскольку фосфатидилсерин ингибирует также процесс бляшкообразования у VSV, а липосомы, содержащие фосфатидилсерин, способны связывать его вирионы, предполагают, что это вещество играет роль клеточного рецептора или его фрагмента. [c.423]

Хотя рабдовирусы имеют липидную оболочку, в клетку они проникают в основном с помощью эндоцитоза, а не путем прямого слияния с мембраной. В отличие от парамиксовирусов у рабдовирусов нет специального белка, ответственного за слияние с клеточной мембраной, и этот процесс удается наблюдать только при кислых значениях pH или после осаждения вирионов на клетки с помощью центрифугирования. Электронномикроскопический анализ показал, что связанный с клеткой VSV концентрируется в участках плазматической мембраны, выстланных клатрином, и обнаруживается в цитоплазматических везикулах, которые образовались в результате эндоцитоза выстланных клатрином ямок. Роль эндоцитоза в инфекционном процессе подтверждается также в опытах с использованием ингибиторов. Дансилкадаверин и амантадин, не влияющие на связывание с клеточной мембраной, но ингибирующие опосредованный рецептором эндоцитоз, крайне затрудняют проникновение вируса и последующий синтез вирусных РНК [37]. Проникшие внутрь клетки вирионы затем обнаруживаются во вторичных эндосомах, где поддерживаются кислые значения pH, при которых и VSV, и вирус бешенства могут сливаться с мембранами. Предполагают, что слияние вируса с мембраной лизосомы, вызываемое кислой средой, приводит к раздеванию виру--са и выбросу рибонуклеопротеина в цитоплазму [30]. Такой путь инфекции и на сей раз подтверждается опытами с при- менением ингибиторов. Лизосомотропные агенты — хлорид аммония и хлорохин — накапливаются в лизосомах и поднимают pH выше того уровня, при котором возможно слияние VSV с мембраной. При добавлении этих веществ на ранних стадиях инфекции не ингибируется ни связывание VSV, ни его проникновение внутрь клетки, но урожай вируса существенно уменьшается [27]. Изучая влияние других лизосомотропных аминов на синтез вирусных РНК, установили, что максимальное подавление синтеза достигается в том случае, когда ингибитор добавляют непосредственно в процессе заражения. Чем позже добавляют ингибитор, тем менее выражен эффект. Процесс ингибирования обратим и может быть приостановлен отмывкой клеток от ингибитора. Полученные данные говорят о том, что [c.424]

Первой стадией в инфекционном цикле любых РНК-вирусов с негативным геномом является синтез мРНК- В эукариотических клетках нет РНК-зависимой РНК-полимеразы поэтому для экспрессии своего генома рабдовирусы должны иметь собственную полимеразу и упаковывать этот фермент в зрелые вирусные частицы. Сразу же после удаления оболочки инфекционный вирус с помощью фермента, привнесенного им в клетку, начинает транскрипцию. [c.425]

Рабдовирусы представляют собой цитолитическне вирусы, быстро убивающие зараженные клетки. Гибели клетки пред-ществует эффективное выключение синтеза хозяйских белков, ДНК и РНК. До сих пор неизвестно, что является причиной гибели клетки кумулятивное действие вируса на клеточный метаболизм или его действие на специфическую мишень. Почему клетка гибнет так быстро Чтобы понять это, нужно иметь в виду, что при заражении затрагиваются три основных пути биосинтеза н различные клеточные линии обладают разной чувствительностью. Хотя общая картина того, как вирус убивает клетку, еще не сложилась, уже частично изучены факторы, выключающие отдельные биосинтетические пути. Для гибели зараженной клетки необходима не репликация вируса, а транскрипция вирусного генома, так же как для выключения всех трех биосинтетических путей [24, 25]. [c.439]

Несмотря па то что в целом рабдовирусы относятся к высоковирулентным цитопатическим вирусам, оказалось возможным получить несколько персистентно зараженных линий, или ли- [c.441]

Эта группа крупных вирусов растений имеет сложное строение, причем они поразительно сходны с некоторыми вирусами животных, особенно с вирусом везикулярного стоматита и другими рабдовирусами [333, 464]. По своей форме все опи напоминают нулю. Если наблюдается какая-либо иная форма, то это следует, вероятно, рассматривать как артефакт, вызванный процессом приготовления препарата. Размеры, которые определяли для этих частиц (особенно диаметр), являются только приблизительными вследствие изменений, происходящих в таких крупных частицах в процессе подготовки препаратов для электронио-микроскопичес1<ого исследования. Число сообщений о вирусах этого типа из разных стран быстро возрастает, но пока выполнено мало исследований по выяснению возможных взаимо- [c.102]

Морфология, химический состав, антигенная структура. В зависимости от таксономического положения арбовирусы могут иметь сферическую (см. рис. 2.10) или реже пулевидную (рабдовирусы) форму размер вирусов от 40 до 100 нм. Состоят из РНК и белкового капсида, окруженного наружной липопротеидной оболочкой, на поверхности которой имеются шипики, образованные гликопротеидами. Вирусы имеют фуппоспецифические антигены, связанные с нуклеокапсидом, и видоспецифические антигены гликопротеидной природы. К настоящему времени известно около 70 антигенных групп арбовирусов. Большая часть арбовирусов обладает гемагглютинирующими свойствами. [c.281]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология