Монослой клеток

Этот метод используется для количественного учета энтеровирусов в культурах ткани. Термин бляшкообразующая единица , или БОЕ, соогветствует наименьшей концентрации вирусов, которая образует 1 бляшку на монослое клеток. [c.279]

Эффективность заражения культур клеток возрастает при использовании принудительной адсорбции. Для этого после нанесения исследуемого материала на монослой клеток культуры центрифугируют при 1000—1500 об/мин 20 — 30 мин. Кроме того, рекомендуется использование культур клеток, предварительно облученных или обработанных цитостатиками. После 24 — 48 ч культивирования монослои клеток для обнаружения и типирования возбудителя окрашивают по Романовскому—Гимзе и люминесцирующими антителами (РИФ). При микроскопии обнаруживают цитоплазматические включения возбудителя в виде образований округлой формы, дающие характерное свечение в ультрафиолете. [c.249]

После заражения культуры ткани вирусом он размножается внутри инфицированных клеток и распространяется на другие. Инфицированная клетка подвергается морфологическим и биохимическим изменениям и погибает. Этот процесс разрушения клеток в культуре известен как цитопатический эффект (ЦПЭ). Распространение вирусов от клетки к клетке может быть замедлено путем добавления слоя агары, в результате чего ЦПЭ будет ограничен небольшими областями, различимыми под микроскопом в виде так называемых бляшек в монослое клеток. Каждая бляшка обычно указывает иа отдельную инфицированную клетку, что можно связывать с отдельной инфицирующей вирусной единицей. [c.278]

Чтобы исследуемый материал (фекалии и др.) не оказывал токсического действия на монослой клеток, его предварительно разводят в 1 мл питательной среды, а после контакта с культурой клеток в течение 30 — 60 мин его удаляют, заменяя поддерживающей средой. [c.263]

В первых трех случаях нам не удалось зарегистрировать излучение, интенсивпость которого достоверно отличалась бы от уровня собственных шумов ФЭУ, при условии, что все эксперименты проводились в темноте, а монослой клеток предварительно 2 ч выдерживался в темном термостате. При освещении монослоя клеток накануне опыта регистрировалось индуцированное светом послесвечение, аналогичное полученному ранее в экспериментах с помощью ФЭУ-42, поэтому нри проведении дальнейших исследований непременным условием являлось отсутствие освещения. При вращении монослоя клеток перемещение камеры с клетками из измерительного блока ФЭУ в термостатированный барабан произ- [c.104]

После адсорбции на каждый монослой клеток наслоить по [c.206]

III. Монослой клеток или пятно клеток, осажденных на предметное стекло, покройте нормальной забуференной сывороткой (табл. 4.12) и оставьте на 30 мин при комнатной температуре. [c.151]

Температура, при которой должна происходить сушка, является весьма спорным вопросом. Если образец находится при низкой температуре, то рекристаллизация уменьшается, но время сушки становится нереально долгим. Тем не менее маленькие образцы, такие, как одиночные клетки, первоначально высушивались замораживанием при 173 К, после чего в течение трехнедельного периода температура постепенно повышалась. Сушка при более высокой температуре повышает риск рекристаллизации льда, но приводит к более быстрому удалению воды, н это является более приемлемым с практической точки зрения подходом. Лиофильная сушка при более высоких температурах также повышет риск разрушения (коллапса) растворимой матрицы с сопутствующей потерей структурной целостности образца. Явление коллапса характерно для многих водных растворов, и наилучшим образом его можно избежать лишь при лиофильной сушке маленьких образцов при низких температурах 444]. Парадоксальной здесь является большая вероятность коллапса при тонкой структуре замороженных областей— той структуре, которая нам нужна, но которую редко получают прн быстром охлаждении биологической ткани. В большинстве процессов лиофильной сушки замораживание производится в интервале температур между 213 и 203 К, и при таких условиях монослой клеток высыхает в течение нескольких часов, в то время как высушивание кусочка ткани толщиной в несколько миллиметров может занять несколько дней. Хотя не существует единственного режима лиофильной сушки, который можно было бы одинаково хорошо применять ко всем образцам, имеется целый ряд практических рабочих соображений, которые могут быть использованы для всех образцов. [c.298]

П1. Монослой клеток, выросших из сфероида. Получение суспензии одиночных клеток из сфероидов часто оказывается невозможным, и эффективность посева этих клеток может быть очень низкой. Для преодоления этих проблем предлагается следующий метод. [c.287]

Через 2—3 нед удалите центральный сфероид и определите число клеток в монослое, происходящем из сфероида. Это может быть сделано непосредственно путем подсчета числа клеток после их открепления. С другой стороны, можно использовать методы, приведенные в разд. 9.4.2 и 9.4.3 для количественной оценки действия лекарств на монослой клеток. [c.287]

Добавить к монослою клеток Г- [c.41]

Размножение вируса и его выход из клеток обычно сопровождаются дегенерацией последних, причем цитопатическое действие (ЦПД) наиболее четко выражено при размножении вируса в монослое клеток. Начиная работу, полезно ставить в качестве контроля незараженную культуру, хотя обычно дегенерация клеток очевидна и выражается в их частичной гибели и деструкции монослоя. Рис. 2.1 иллюстрирует ЦПД, вызываемое полиовирусом. Однако размножение пикорнавирусов не всегда сопровождается видимыми эффектами. Вирус гепатита А не дает заметного ЦПД в клетках РКЬ К-6, причем в культуральной среде воспроизводимо обнаруживается лишь небольшое количество вируса. Обычно при достижении максимального ЦПД энтеровирусы полностью высвобождаются из зараженных клеток, в то время как риновирусы остаются частично связанными с клетками. В некоторых случаях очень важно время сбора вируса так, имеются сообщения, что вирионы вируса ящура содержат связанную рибонуклеазу, которая разрушает геномную РНК, если собирать вирус через 12, а не через 8 ч после заражения [14]. Аналогичные данные имеются и для риновирусов. [c.49]

Плотный монослой клеток формируется обычно в течени( [c.74]

Готовят суспензию только что трипсинизированных клеток ВНК-21 на среде МЕМ-10 с концентрацией ЫО кл/мл. Плотный монослой клеток во флаконе типа Т-75 образован в среднем 20-10 клеток. [c.122]

Рис. 5.1. Характерное для РСВ ЦПД на монослой клеток МКС-5. Хорошо

Рис. 5.2. ЦПД РСВ на монослой клеток В8-С-1. Хорошо видны фокусы, состоящие из агрегированных клеток

Монослой клеток Нер-2 заражают РСВ (1 БОЕ/кл). Адсорбцию проводят 2 ч при 37°С, затем добавляют культуральную среду (среда Игла, содержащая 5% ЭТС, инактивированной нагреванием). [c.150]

Собственно, чтобы перед началом титрования монослой клеток был плотным. [c.179]

Рис. 14.2. Бляшки вируса простого герпеса на слое клеток ВНК/С13. Полный монослой клеток ВНК21/С13 Заражали препаратами вирус (тип 2) в различном разведении. Слеваколичество бляшек невелико, но в правой чаше бляшек много.

Культуральную жидкость после первого пассажа обрабатывают трипсином, как описано выще, и вновь пассируют на свежем плотном монослое клеток МА 104. Часто приходится провести 3—10 таких слепых пассажей , прежде чем через 48—72 ч после заражения культуры обнаружится явное ЦПД. [c.210]

Готовят инокулят вируса, заражая монослой клеток BS -1 в 2 флаконах площадью 150 см (0,1 БОЕ/кл). Культуры инкубируют в присутствии 5 мкг/мл трипсина до полного проявления ЦПД (около 2 сут). [c.211]

Готовят последовательные 10-кратные разведения вируса на ТД-буфере, содержащем 2% ТС. 0,1 мл соответствующего разведения заражают монослой клеток в чашках диаметром [c.236]

ВОЛЬНО хорошо размножаются кишечные аденовирусы, которые не удается культивировать в других известных клеточных линиях человека [8]. Клетки 293 растят в монослойной культуре, в обычной культуральной среде, содержащей 10% СНТ. Культуры рассевают (1 3) по стандартной методике, используя смесь трипсина с версеном. Клетки 293, как правило, не образуют плотного монослоя, довольно гетерогенны по своей морфологии и имеют ряд характерных свойств, присущих трансформированным клеткам. Добавляя в культуральную среду ЭТС,. удается получить относительно плотный монослой клеток, который необходим при тестировании вируса методом бляшек. Клетки 293, как правило, лучше растут на посуде из пластика. [c.262]

Для выявления вирусных бляшек под бентонитовым питательным покрытием применяют многослойные культуры перевиваемых клеток человека или животных, чувствительные к исследуемому вирусу пригодны 1 - 2-суточные негустые монослои клеток. Готовят 10-кратные разведения из исследуемого материгша, каждым разведением инфицируют не менее двух матрацев (колб Эрленмейера или пенищ ллиновых флаконов) с культурой клеток. После адсорбции вируса (30 — 40 мин) монослои 3 — 4 раза отмывают стерильным ИХН и заливают бентонитовым питательным покрытием бидистиллированная вода — 415 мл, 5 —6%-й гель бентонита — 5 мл, раствор Эрла (десятикратный концентрат) — 50 мл, нативная бычья сыворотка — 15 мл, 7,5%-й раствор гидрокарбо-ната натрия — 15 мл, пенициллин — 200 ЕД/мл, стрептомицин или линкомицин — 100 ЕД/мл. Монослой зараженных клеток в колбах Эрленмейера емкостью 50 мл заливают 20—30 мл бентонитового покрытия, а монослой клеток на дне пенициллинового флакона — 5 — 6 мл. [c.268]

Промыть монослой клеток СБСР для удаления сыворотки. [c.89]

Другой способ получения слоя фидерных клеток — это инкубировать монослой клеток с митомицином С (10- М), что приводит к образованию поперечных сшивок в клеточной ДНК (Iyer, Szybalski, 1964). Монослой затем трижды промывают СБСР для удаления митомицина С, после чего его можно использовать либо непосредственно, либо после пересева клеток в культуральные сосуды меньшего размера. Для клонирования используются чашки Петри диаметром 6 см, содержащие 2-105 клеток, убитых либо уоблучением, либо обработкой митомицином С. Эти клетки образуют слой фидерных клеток. Среду в чашках с фидерными клетками заменяют суспензией клеток, предназначенных для клонирования. На такие чашки -МОЖНО высевать 10 клеток, но наилучшие результаты получаются при высеве 1000 клеток. Клонируемые клетки прикрепляются к субстрату в свободных участках между фидерными клетками и начинают размножаться, что приводит к образованию колоний, которые можно выделить с помощью цилиндров для клонирования (разд. 8.1.2). [c.93]

Рис. 12.3. Подавление роста клеток тимидином. Около 10 клеток в 5 мл МСИ, в которую добавлены витамины и сыворотка теленка, высевали в чашки диаметром 5 си и инкубировали в присутствии указанных концентраций тимидина. Через 4 суток монослой клеток трипсинизировали и подсчитывали число клеток в счетчике. L929 О HeLa ВНК А BS 1

VIII. Проведите материал через серию спиртов (10—30—70— 95—100—100%-ные), выдерживая клетки в каждом растворе не менее 10 мин. При проводке осажденных клеток после спирта необходимо последовательно, в течение 10 мин, пропитать фрагменты клеточного конгломерата смесью 100%-ного спирта со 100%-ным пропиленоксидом (1 1), 100%-ным пропиленоксидом и смесью 100%-ного пропи-леноксида со смолой для заливки (1 1). При проводке монослоя клеток на пластиковой поверхности последние три этапа можно опустить. В этом случае монослой клеток пропитывается 100% ным спиртом в течение 30 мин и затем смесью 100%-ного спирта со смолой для заливки (1 1). [c.149]

Рис. 3.7. Действие альфавируса на клетки Vero, а — контрольная незараженная культура б — монослой клеток на относительно ранней стадии инфекции альфавирусом, например вирусом Синдбис или вирусом леса Семлики. Обратите внимание на длинные отростки зараженных клеток. На каждом из этих отростков на последующих стадиях инфекции обнаруживается большое число

Выращивают плотный монослой клеток в небольших фла-Iконах одноразового пользования площадью 25 см или в чаш- ках Петри. [c.87]

В описанном ниже методе для получения гемагглютинина используют монослой клеток Vero, В нашей лаборатории метод дает хорошие результаты в случае альфа- и флавивирусов при использовании среды с очень низким содержанием сыворотки. Однако высокие выходы гемагглютинина могут быть получены и на других линиях клеток млекопитающих и комаров. Ранее использовали антиген из мозга мышат-сосунков, который перед постановкой реакции обрабатывали органическими растворителями. Эти методы очень четко описаны Кларком и, Казалсом [c.91]

Некоторые штаммы вируса бешенства тоже образуют четкие бляшки на монослое клеток хомячка ER в настоящее время эта линия клеток широко используется для размножения и титрования вируса бешенства и других вирусов [17]. Метод бляшек с использованием клеток ER особенно чувствителен при титровании стандартного штамма вируса бешенства VS, При работе этим методом используют монослойные культуры, выращиваемые в шестилуночных планшетах (диаметр лунки составляет 35 мм). [c.117]

Принцип метода состоит в том, что для заражения клеточ ного монослоя используют разведенные препараты вируса, со> держащие несколько инфекционных единиц. После заражения монослой клеток покрывают агаром для предотвращения диффузии вирусного потомства по всей чашке. Вирус, вышедший из одной лизированной клетки, не имея возможности распространиться далеко, инфицирует только соседние клетки и таким образом формирует бляшку [14, 15] (рис. 8.4). [c.236]

Монослой клеток фиксируют при помощи обычных фиксаторов и окрашивают генциан-виолетом или метиленовым си-лим (1%-ные водные растворы). [c.276]

Рис. 10.4. Кривая размножения ВПГ-1 (штамм HFEM) в монослое клеток Нер-2 при 32 °С. Вирус адсорбирован при множественности инфекции 20 БОЕ/кл. Образцы клеточных лизатов (1) и культуральной среды (2) титровали методом бляшек. Кривая размножения ВПГ-2 при этих условиях не показана, однако титр ВПГ-2 в культуральной среде более высокий, что обусловлено лизисом клеток

HVS в соответствующих разведениях обычно титруют на монослое клеток Vero или ОМК, растущих в25см пластиковых флаконах с плоским дном. Вирус титруют методом бляшек. Необходимо отметить, что некоторые партии телячьей сыворотки ингибируют формирование бляшек в культурах ОМК. [c.299]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология