Цистеиновая кислота, нингидринная

ДНФ-аргинин и е-ДНФ-лизин разделяются не полностью, удается обнаружить оба соединения, используя различное поведение при реакции с нингидрином. ДНФ-цистеиновая кислота и моно-ДНФ-цистин никогда не встречаются вместе. Важно удалить избыточную кислоту после нанесения раствора, для чего пластинку следует нагреть в токе воздуха в течение 10 мин при температуре около 60°. Затем ее 15 мин охлаждают. [c.418]

Для обнаружения и количественного определения аминокислот по окончании разделения высушенные хроматограммы обрабатывают 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Аминокислоты проявляются в виде фиолетовых пятен пятна вырезают, окрашенный комплекс извлекают спиртовым раствором сернокислой меди и интенсивность окраски измеряют при длине волны 575 ммк. По калибровочным кривым, построенным для каждой аминокислоты, находят концентрацию компонентов смеси. Определение цистина производят после превращения его в цистеиновую кислоту путем предварительного окисления белка надмуравьиной кислотой (см. гл. IV, 1). [c.44]

Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

Хартел и Плеймикерс [112] использовали бумагу с четвертичными азотными группами для количественного определения цистеиновой кислоты в гидролизате белков. В восходящем методе хроматографии проявляли 0,34 М хлоруксусной кислотой. После проявления высушенную бумагу обрабатывали нингидрином для обнаружения красных пятен и с помощью денситометра определяли количество цистеиновой кислоты в пятне. По мнению авторов, ни одна из аминокислот, найденных в белке, не перекрывалась с цистеиновой кислотой. Точность метода была проверена авторами на шестнадцати определениях этой кислоты в гидролизате 1 г шерсти. Средние значения составили 1,25% при относительной средней ошибке 3%. [c.323]

Помимо пролина и оксипролина, цистин (цистеин) также образует с нингидрином желтое окрашивание, связанное с потерей цветности при Х=570 ммк. Для количественного анализа следует проводить окисление цистеина в цистеиновую кислоту с помощью брома в щелочной среде или надмуравьиной кислотой. Цистеино-вая кислота уже дает стабильную окраску со 100 % -м выходом [19]. [c.139]

На оси ординат отложена интенсианость окраски с нингидрином относительно окраски, развиваемой лейцином. А. Разделение проводили на колонке высотой 30 см с набивкой из дауэкс 1-Х8. Элюирование проводили 0,5 н. уксусной кислотой при 25°. I —смесь аминокислот // —тирозин /// — глутаминовая кислота /К— аспарагиновая кислота V —(цистеиновая кислота). [c.82]

Бреннер и др. [107] исследовали разделение производных данной группы на силикагеле. Эти соединения не растворяются ни в кислоте, ни в воде, не экстрагируются из раствора эфиром, но их можно разделить хроматографически, элюируя смесью н-пропанол—34 %-ный аммиак (7 3) (табл. 17.5). Из семи производных, приведенных в таблице, не удается разделить только ДНФ-цистеиновую кислоту и моно-ДНФ-цистин. Однако эти соединения редко сопутствуют друг другу, и, кроме того, их можно различить по окраске, которую они дают с нингидрином. Поскольку пробу наносят из кислого раствора, избыток кислоты [c.495]

Для гидролиза относительно чистых белков с низким содержанием углеводов успешно использовали различные разбавления образцов вещества. Они варьируют от приблизительно 10 мл 5,5 н. соляной кислоты на 1 г белка, как описано Тристрамом [41] в стандартной методике, использованной в лаборатории Чибнелла, до 500 мл 6 н. соляной кислоты на 1 г белка [35]. Принцип использования высоких разбавлени образца в гидролизующей кислоте с целью уменьшения деструкции аминокислот в присутствии большого избытка углеводов был впервые исследован Дастином и сотр. [68]. Они показали, что при нагревании любой из 15 аминокислот в присутствии большого избытка углеводов (крахмала или глюкозы) в значительном объеме 6 и. соляной кислоты (100—200 мл г углевода) выход аминокислоты уменьшается не более чем на 3%. Триптофан, цистин и метионин менее устойчивы в этих условиях. Гидролиз при высоком разбав.пении был успешно применен для анализа аминокислот в пищевых продуктах, содержащих мало белка и много углеводов [69]. В таких условиях 20— 40% метионина превращается в сульфоксид, но сульфона образуется менее 2%. В присутствии больших количеств углеводов на ранних стадиях элюирования кислых и нейтральных аминокислот с ионообменных смол часто обнаруживается пик, дающий с нингидрином розовое окрашивание. Этот пик следует за цистеиновой кислотой, но предшествует метионин-сульфоксиду и, по-видимому, соответствует продукту расщепления сахаров. [c.133]

Общее содержание цистина и цистеина можно, однако, определить, окисляя интактный белок надмуравьиной кислотой, которая превращает оба типа остатков в цистеиновую кислоту. Белок затем гидролизуют и сильную цистеиновую кислоту отделяют или на сильноосновной анионообменной смоле, такой, как дауэкс-2 [108], или на сильнокислотной катионообменной смоле типа, обычно используемого для разделений аминокислот [102]. Последний способ более удобен, так как цистеиновая кислота вымывается в виде пика с нулевым удерживаемым объемом (фракции 3—10 на колонке длиной 15 см), но первый метод дает возможность более строгой хроматографической идентификации и отделения цистеиновой кислоты от других сильнокислых соединений, реагирующих с нингидрином. Скорость окисления остатков цистина в белках сходна со скоростью окисления свободной аминокислоты. Нерастворимые белки для полного окисления требуют более продолжительной обработки. [c.148]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология