Культура клеток макрофагов

Если находят культуру, представляющую интерес, то клетки ресуспендируют и переносят в лунку 24-луночного планшета. В освободившуюся лунку 9б-луночного планшета добавляют свежую среду и продолжают инкубацию (запасная культура). Выращивание в 24-луночных планшетах необходимо вести в присутствии клеток питающего слоя, в качестве которых можно снова использовать макрофаги (по 10 клеток на лунку) или тимоциты (1—2)-10 клеток на лунку) и клетки селезенки (2-10 клеток на лунку). Начиная с этого этапа клетки культивируют в среде ГТ, а через неделю — в среде без добавления нуклеотидов. [c.108]

Макрофаги и гистиоциты в культурах, как правило, не собраны в группы, а располагаются изолированно (см. рис. 5). Начало третьей фазы роста перекрывает конец второй. Клетки, характерные для третьей фазы и имеющие морфологию фибробластов, появляются между 6-м и 20-м днем см. рис. 5 и 6). Они интенсивно размножаются и формируют обширные поля и очаги. По морфологии эти клетки на- [c.22]

Возникает вопрос об источниках клеток, населяющих культуры костного мозга на второй фазе. Происходят ли эти клетки только за счет размножения макрофагов-гистиоцитов, входящих в состав исходного эксплантата, или же в их образовании принимают участие и гемопоэтические элементы, трансформирующиеся в условиях культивирования. [c.23]

В 48-часовых культурах преобладающим клеточным типом становятся макрофаги (полибласты). Митозы в этих клетках встречаются редко. На 3—5-й день появляются [c.82]

Презентируюшие антиген (АГ) макрофаги (МФ), относящиеся к определенному гаплотипу по генам II класса главного комплекса гистосовместимости (например, 1-А или I-A "), помещали в культуру in vitro вместе с Т-лимфоцитами. После определенного времени совместного культивирования Т-лимфоциты, прошедшие примирование в первичной культуре, переносили во вторичную культуру, куда добавляли интактные клетки селезенки и гомологичный антиген. В тех слу чаях, когда Т-лимфоциты получали от первичной культуры, в которой взаимодействующие клетки (макрофаги и Т-клетки) были идентичны по генам II класса, констатировали выраженное развитие антителопродукции во вторичной культуре. В то же время Т-лимфоциты от первичной культуры, содержавшей не идентичные по генам II класса клетки, оказывались неспособными обеспечить хелперный эффект во вторичной культуре. Иначе, созревание Т-хелперов из предшественников происходит то.тько в условиях идентичности по генам II класса между взаимодействующими клетками [c.168]

Оригинальный метод деконтаминации культур клеток состоит в пассировании их на бестимусных мышах [75—77]. Механизм деконтаминации клеток в бестимусных мышах остается пока неизвестным. Однако в организме мыши введенные контаминированные клетки окружены большим количеством макрофагов, которые, вероятно, и играют основную роль в деконтаминации. При внесении в культуру макрофагов контаминированных клеток в соотношении 1 100 (клетки макрофаги) с добавлением антибиотиков были де-контаминированы 10 линий клеток [78]. В наших экспериментах [три использовании данного метода удалось лишь значительно сни- ить титр микоплазм [79]. [c.121]

В культурах фагосом ПВПО вызывал задержку или предотвращал выделение токсичных лизосомных ферментов, которые выделялись при добавлении кремнеземного пылевидного препарата [355]. Очевидно, ПВПО проникал в клетку и здесь соединялся с кремнеземом (по всей вероятности, образовывал покрытие на кремнеземной частице) и тем самым препятствовал адсорбции и последующей денатурации белков. Таким образом, лизосомные мембраны оставались неповрежденными, и не выделялись ферменты, способные умертвить макрофаг изнутри. [c.1082]

Для развития гуморального иммунитета В-лимфоциты должны получить не менее двух стимулов (сигналов). Первый — это непосредственный контакт с антигеном, заканчивающийся захватом его рецепторами поверхности В-клетки, распознающими специфичную гап-тенную детерминанту. Предполагается, что антиген прикрепляется к поверхности В-клетки после соединения в макрофаге нескольких комплексов антигена с IgT в одну обойму . Второй сигнал, судя по результатам многочисленных опытов, неспецифичен и связан с действием Т-лимфоцитов-хелперов, вернее с экскретируемым ими фактором. Он активирует (примирует) В-клетки не только к индуцирующему его антигену, но и к любому другому. Так, если в культуру В-клеток, активированных конъюгатом на гетерологическом носителе, первоначально ввести какой-либо белок (носитель), а затем надоса-дочную жидкость активированных им хелперов, то иммунный ответ к гаптену будет усилен [107]. Аналогичное заключение позволяют сделать и результаты опытов по последовательной иммунизации морских свинок динитро-фенильными (ДНФ) конъюгатами с различными белками-носителями [125]. Кроме того, было установлено, что такую же неспецифическую стимуляцию оказывает анти- [c.13]

Приготовление среды, кондиционированной перитонеальными макрофагами, осуществляют следующим образом (R. Sugosawara, 1985). Забивают взрослых мышей и выделяют перитонеальные макрофаги промыванием брюшной полости 10 мл полной среды культивирования с 10% СПК. Клетки отмывают центрифугированием и засевают в пластиковые флаконы при плотности 3,3 Ю" кл/мл. Культуру помещают в СОг-инкубатор. Через 20 ч удаляют среду, содержащую неприкрепившиеся клетки, добавляют свежую среду и культивируют 3 сут. По окончании культивирования среду сливают, центрифугируют (lOOOg, 10 мин), супернатант фильтруют, разливают по порциям и хранят при —20°С до момента использования. [c.106]

Первые опыты в этом направлении были проведены с ин-бредными морскими свинками линий 2 и 13, которые отличаются друг от друга только по генам, контролирующим антигены II класса МНС (рис. 7.4). Т-клетки морских свинок, предварительно сенсибилизированных одним из антигенов (овальбумином, туберкулином и др.), вносили в культуру макрофагов, которые презентиру-ют антиген, использованный для иммунизации. Во всех случаях, когда макрофаги и Т-клетки были генетически идентичными (снн-генными), регистрировался сильный пролиферативный ответ Т-клеток, распознавших антиген на поверхности сингенных макрофагов. В то же время Т-клетки, отличающиеся от макрофагов по антигенам II класса, не в состоянии развить пролиферативный ответ в несингенной системе клеточного взаимодействия. Эти первые опыты позволили предположить, что примированные Т-клетки распознают не только антиген, использованный для иммунизи-ции, но и собственные антигены гистосовместимости. Однако уз- [c.164]

В культуру поглотивщих антиген макрофагов вносились предшественники Т-хелперов, которые были либо генетически идентичными, либо отличались от макрофагов по генам МНС. После определенного времени совместного культивирования Т-клетки переносили во вторичную культуру, содержащую сингенные клетки селезенки (источник антителопродуцентов) и гомологичный антиген. В тех случаях, когда Т-лимфоциты получали от первичной культуры, в которой взаимодействующие клетки были идентичны по генам, контролирующим молекулы II класса, констатировалось сильное развитие иммунного ответа. В то же время Т-клетки от культуры, содержащей не идентичные по генам II класса клетки, оказались неспособными обеспечить хелперный эффект во вторичной культуре. [c.167]

Эта реакция пролиферации развивается in virto при взаимодействии генетически отличающихся (аллогенных) лимфоцитов. Результат реакции состоит в накоплении цитотоксических Т-лимфоцитов ( D8 Т-клеток), специфичных к антигенам гистосовместимости клеггок-стико ляторов. В первичной культуре предшественники ЦТЛ (пр. D8), представленные в суммарной популяции анализируемых лимфоцитов, после распознавания аллоантигенов клеток-стимуляторов вступают в процесс пролиферации и дифференцировки до зрелых ЦТЛ ( D8). Интенсивность пролиферативной реакции оценивают по включению Н-тимидина в размножающиеся клетки. Для созревания пр. D8. необходима помощь со стороны макрофагов и хелперных D4 Т-клеток (Тн2), образующихся из антигенраспознающих предшественников (ТнО). Оценку активности накопившихся в первичной культуре D8 Т-клеток проводят во вторичной культуре (см. рис. 9.1). В качестве мишеней используют те аллогенные клетки, которые в первичной культуре выступали стимуляторами [c.204]

Перитонеальные макрофаги мышей и клетки амеб каждый час обновляют 20—25% своего клеточного объема. Фибробласты в культуре ткани обменивают 25% клеточного объема каждые 3—6 ч. Учитывая, что объем лизосом в этих клетках мал и скорость жндкофазного пиноцитоза сравнительно постоянна для этих культуральных клеток, скорость рециклизации мембран оказывается высокой и возвращение внеклеточного материала (иногда в преформированном виде) возможно в ходе рецикли-зации путем экзоцитоза. Макрофаги и -клетки фибробластов восстанавливают плазмалемму каждые 33 и 120 мин соответственно. [c.30]

При культивировании аллореактивного хелперного клона с В-клетками и макрофагами, несущими соответствующий аллоантиген, индуцируется сильная поликлональная активация В-клеток. В соответствии с типом В-клеточного ответа, который должен быть проанализирован, хелперный тест может быть проведен различными способами. Обычно собирают Т-клетки из ИЛ-2-зависимых культур, трижды промывают их и культивируют с неким источником В-клеток (либо с МПК, либо с не-Т-клетками ). В этой системе присутствие Т-клеток в препаратах В-клеток не оказывает влияния на степень [c.275]

В 1965 г. Pluznik и Sa hs предложили методику получения колоний из суспензии клеток селезенки при культивировании в агаре на подложке из клеток. мышиного эмбриона. В культурах развивались два типа очагов одни, состоящие из крупных элементов с метахроматической зернистостью, другие, содержащие нейтрофильные гранулоциты. Клетки с метахроматической зернистостью были описаны авторами как тучные клетки. Однако в последующем данные электронномикроскопического анализа показали, что эти клетки представляют собой макрофаги, содержащие фагоцитированные частицы агара. Они имеют неровную поверхность и ядра разнообразной формы. На клеточной поверхности обнаруживаются микроворсинки, а в цитоплазме — большое количество включений и вакуолей, которые содержат аморфный материал. Шероховатый и гладкий эндоплазмати-ческий ретикулум присутствует в определенных участках, митохондрии многочисленны, аппарат Гольджи хорошо развит. [c.32]

В целом сходные результаты были получены и другим исследователями, которые уточнили некоторые детали пс ведения клеток в зоне роста. В культурах селезенки кролг ка были обнаружены клетки, промежуточные по морфологи между лимфоцитами, с одной стороны, и ретикулярным клетками и макрофагами — с другой (А. А. Максимов, 1916 Эти картины, а также разрастание в культурах поздни сроков фибробластов послужили основанием для предполс жения о трансформации в условиях тканевых культур ли. фоцитов в полибласты, а последних —в фибробласт [c.77]

Эксплантированные фрагменты лимфатических узлов в течение первых суток окружаются зоной амебоидно подвижных клеток, которые передвигаются со скоростью 0,03 мм/мии, образуя псевдоподии (в культурах лимфатических узлов человека) (Lewis а. oth., 1921). Большинство выселяющихся клеток —это малые лимфоциты, которые в последующие дин дегенерируют. Некоторые лимфоциты, расположенные вблизи эксплантата, трансформируются, по мнению А. А. Максимова, в плазматические клетки, а многие ретикулярные клетки освобождаются из синцития и лревращаются в фиксированные или свободные макрофаги. Эти элементы отличаются по характерному пузырьковидному ядру, часто в их цитоплазме обнаруживается пигмент, который окрашивается азур-эозином в зеленый цвет. [c.79]

В первые дни роста лимфоциты также мигрируют из кусочка, а строма интенсивно разрастается, давая выросты в окружающую среду, В случае, если были высажены фрагменты лимфатических узлов или селезенки, зона роста состоит из соединительной ткани, но не из лимфоцитов. Вместо них кусочки оказываются окруженными макрофагами и фибробластоподобными клетками, которые образуют травовидные структуры. Если же эксплантировать кусочки зобной железы, то, кроме соединительной ткани, активно разрастается эктодермальный эпителий, образующий мембраны и обрастающий высаженный кусочек. Лимфоидные элементы в таких культурах не регенерируют. [c.81]

Остается также неясным, проходят ли колониеобразующие клетки-предшественники при эксплантации в культуры морфологическую стадию гистиоцита-макрофага. Тот факт, что в культурах клеток тимуса, лимфатических узлов и лимфоцитов из грудного протока (Bloom, 1927, 1928) образование фибробластов наблюдается практически без стадии гис-тиоцитарного роста популяции, вызывает дополнительные сомнения в том, что гистиоцит-макрофаг является стадией в образовании фнбробласта. [c.90]

Необходимым условием для осуществления первичного синтеза антител оказалось обеспечение интенсивных клеточных взаимодействий in vitro. В органных культурах это достигается сохранением естественной клеточной упаковки, которая создает адекватные условия для клеточных взаимодействий. Для индукции первичного ответа в суспензионных культурах необходимы высокая клеточная плотность и интенсивное перемешивание. Эти факторы повышают вероятность осуществления необходимых контактов между клетками различных категорий, в частности между макрофагами и лимфоцитами. [c.142]

Данный метод основан на использовании F -рецепторов, имеющихся на поверхности выращиваемых в культуре человеческих или мышиных макрофагов [10]. Вирус, не адсорбировавшийся на клеточной поверхности, может проникнуть в цитоплазму в результате образования комплексов с вирус-специ-фическими антителами. Комплексы антиген антитело связываются с F -рецепторами, и в результате этого повышается инфекционность вирусного препарата. Использование этого явления особенно полезно при работе с моноклональными антителами, так как удается идентифицировать антитела, реагирующие с поверхностью вириона. С помощью этого метода можно получить данные трех типов о повышении инфекционности вируса в присутствии антител, о титре нейтрализующих антител и о стандартной инфекционности вируса. Многие тогавирусы размножаются в макрофагах мыши (линия Р388 D1), имеющих на поверхности F -рецепторы. Эти клетки хорошо прикрепляются к поверхности культуральных сосудов, поэтому с ними можно работать, как с обычными культурами клеток. [c.89]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология