Белки, гидразинолиз

Белки и пептиды при нагревании с безводным гидразином подвергаются гидразинолизу. При такой обработке расщепляются все пептидные связи, и все аминокислоты, составлявшие пептидную цепь, превраш,аются в гидразиды, за исключением С-концевой, присутствующей в реакционной смеси в виде свободной аминокислоты [13]. [c.290]

Метод гидразинолиза обладает рядом специфических недостатков. Так, при обработке гидразином распадаются частично иЛи полностью такие аминокислоты, как цистеин и цистин, аспарагин и глютамин, а также дикарбоновые аминокислоты. Гидразиды некоторых аминокислот оказываются недостаточно устойчивыми и в ходе последующей обработки могут перейти в свободные аминокислоты. Это,является основным пороком метода и часто делает его непригодным для анализа ряда белков. Тем не менее этот метод находит широкое применение в ряде лабораторий и по сей день. Причиной этого является его относительная простота и возможность применения для анализа тех белков, у которых гидразиды С-концевых аминокислот достаточно устойчивы. [c.72]

С-концевые аминокислоты пептидов или белков можно определить при помощи химических или ферментативных методов. Химические методы включают гидразинолиз, селективное введение трития, избирательное восстановление, образование альдегидов, алкоголиз оксазолов в кислой среде, тиоцианатное или цианамидное расщепление. При ферментативном определении используют карбоксипептидазы. Этот подход в последние годы [c.487]

Срюди химических методов определения С-концевых аминокислотных остатков заслуживают внимания метод гидразинолиза, предложенный С. Акабори, и оксазалоновый метод В. Матсуо. В первом из них при нагревании пептида или белка с безводным гидразином при 100 — 120 °С пептидные связи гидролизуются с об- [c.38]

Реакция с безводным гидраанном. Реакция с безводным гидразином является единственным химическим методом определения С-концевых аминокислот, который во многих случаях дает достоверные результаты. Два остальных метода — восстановление гидратами металлов и тиогидантоиновый метоД — дают, как правило, невоспроизводимые и недостоверные результаты. Метод предложен Акабори в 1952 г. Белок нагревают с гидразином (безводным) в запаянной ампуле при 100—120° в течение 8—10 часов. При этом происходит расщепление белка—гидразинолиз, в результате чего все аминокислоты, кроме С-концевой, образуют гидразиды. Обработкой бензальдегидом гидразиды аминокислот переводят в нерастворимые производные, которые удаляют фильтрованием. Свободные же С-концевые аминокислоты определяют хроматографически. [c.72]

При гидразинолизе белков сера цистина и цистеина (но не метионина) превращается в сероводород, который можно определить колориметрически по реакции Каро, состоящей в переходе диметил-л-фенилендиамина в метиленовый голубой [110]. Гоа [111] значительно повысил чувствительность этого метода путем превращения сероводорода в сульфид висмута. [c.148]

Химический метод идентификации остатков, несущих а-карбоксильные группы, основан на реакции белка (или пептида) с гидразином в безводной среде при 100°С. При расщеплении пептидной связи с помощью гидразинолиза в гидразиды аминокислот превращаются все аминокислотные остатки, кроме СООН-концевого, который остается в виде свободной аминокислоты и может быть выделен и идентифицирован с помощью хроматографических методов [c.177]

Химические методы основаны главным образом на модификации С-концевых аминокислот. После полного гидролизаполипептидной цепи эти производные отделяют от немодифицированных остатков и идентифицируют. К химической группе методов относятся гидразинолиз, отщепление С-концевых аминокислот под действием изотиоцианата аммония и восстановление этерифицированных белков и пептидов алюмогидридом лития. [c.154]

Следующей задачей при определении строения пептидов является установление характера связи и последовательности аминокислотных остатков в молекуле пептида или белка. Эта задача, трудно выполнимая в настоящее время для белков с большим молекулярным весом, облегчается тем, что в природе встречается значительное число относительно низкомолекулярных соединений, представляющих собою пептиды. Виланд предлагает различать три группы природных пептидов олигопептиды, состоящие из 2—10 аминокис/ют, полипептиды, состоящие из 10—100 аминокислот, и макропептиды, к которым относятся собственно белки. Изучение природных пептидов представляет собой важный этап в подходе к изучению строения белка. Исследование обычно начинают с определения числа цепей, входящих в состав объекта изучения. Для этого пользуются одним из ранее приведенных методов, например диннтрофенилированием, действием азотистой кислогы или аминопептидазы для определения Н-концевой аминокислоты и восстановлением, гидразинолизом или действием карбоксипептидазы для определения С-концевого остатка (см. стр. 510 и далее). [c.514]

Акабори впервые использовал для аналитических целей гидразинолиз белков и полипептидов. В дальнейшем метод гидразинолиза усовершенствовался и была показана универсальность и перспективность его для установления структуры полипептидов и белков - . Деструктирующее действие гидразина по С = М-свя-зям на примере полиазина, полученного из диацетила, отмечалось Цим мерманом и Лохте . [c.194]

Харуна и Акабори [21 ] выделили 35 кислых ДНФ-производных пептидов после частичного гидразинолиза овальбумина (20 г.), в результате обработки белка гидразином (100 г) при 100° в течение [c.192]

Хотя из литературных данных известно, что изучались различные химические методы определения С-концевых аминокислот [206], ни один из этих методов не обнаружил достаточно удовлетворительных результатов, которые давали бы основание к его широкому использованию. Поэтому наибольшее распространение получил способ, основанный не на химической, а на ферментативной реакции с карбоксипептидазой — ферментом, реагирующим лишь с теми пептидами, которые содержат свободную карбоксильную группу. Поскольку рассмотрение ферментативных реакций выходит за рамки настоящего раздела книги, реакция с карбоксипептидазой в данном изложении не описывается. Следует отметить, однако, что проблема развития химии белка настолько важна, что вполне оправданы постоянно продолжающиеся исследования, направленные на поиск и разработку удобных и с широкими возможностями применения химических методов. Было показано, что для установления последовательности аминокислот с С-конца белковой молекулы по крайней мере ограниченное применение могут найти три разных химических метода, так как они дают результаты, подтверждающие данные, получающиеся при использовании карбоксипептидазы. Речь идет о гидразинолизе, этерификации с последующим восстановлением сложноэфирной группы на конце молекулы в спиртовую, а также о реакции с неорганическим тиоци-анатом. [c.376]

Метод гидразинолиза заключается в нагревании белка или пептида с безводным гидразином. При этом все аминокислоты, за исключением С-концевой аминокислоты, превращаются в гидразиды. Образующиеся гидразиды при помощи соответствующих методов затем можно отделить от свободных аминокислот, которые представляют собой С-коицевые аминокислоты и могут быть идентифицированы разными способами (204, 207—209], например по реакции с ДНФБ с последующей идентификацией получающихся ДНФ-производных. [c.376]

Изучение белков начинают с выделения и очистки единственного лишенного основной группы пептида, который получают в результате ферментативного расщепления ацилированного белка непсином, химотрипсином или термолизином (но не трипсином) — см. фиг. 9. Из всех пептидов только этот концевой пептид не садится на колонку дауэкс-50 при кислых значениях pH (см. ниже). Его состав, включая и природу концевой ацильной группы, определяют, сочетая аминокислотный анализ, гидразинолиз и фтординитробензольный метод. [c.69]

В другол структурном элементе Т-четных фагов - в фаговом отростке — не обнаружено ни одного участка, содержащего N-концевые остатки аминокислот [53]. Сократимый чехол состоит из 144 видимых в электронном микроскопе субъединиц и содержит 144 остатка гистидина. Как при гидразинолизе, так и при воздействии карбо-ксинептидазой обнаруживают две С-концевые аминокислоты (глицин и серии, 3 1) число их достигает 280 на один чехол [279]. Эти данные свидетельствуют о наличии по крайней мере двух белков. При сопоставлении аминокислотного состава целого фага, сократимого чехла и стержня отростка между ними выявляется существенное различие. [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология