Поглощение нуклеиновых кислот определяется основаниями

ПОГЛОЩЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ ОСНОВАНИЯМИ [c.38]

Спирализация ДНК отчетливо проявляется в ее спектральных свойствах — в эффекте гипохромизма в области собственного поглощения азотистых оснований при 2600 А (см. стр. 288—290). Интенсивность полосы поглощения 2600 А у двуспиральной нуклеиновой кислоты значительно меньше, чем у денатурированной формы. Степени спиральности ДНК и РНК определяются по гипохромному эффекту без труда. [c.498]

Чистые нуклеиновые кис,лоты содержат около 15% ааота и 10% фосфора. В их состав входят гетероциклические основания, которые обусловливают сильное поглощение в ультрафиолетовой области спектра с максимумом вблизи 260 ммк (см. ниже). На 1 г-атом фосфора в нуклеиновой кислоте приходится 1 моль сахара в рибонуклеиновой кислоте (РНК) это D-рибоза, а в дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) — 2-дезокси-В-рибоза. Сахара можно идентифицировать и их содержание определить количественно [c.121]

L5. Спектрофотометрические методы. Спектрофотометрические методы определения белков имеют ряд преимуществ по сравнению с другими методами и могут быть рекомендованы во многих случаях. Они просты, быстры и не вызывают структурных разрушений в исследуемом материале. Один из наиболее ранних прочно утвердившийся метод Варбурга и Христиана [388] основан на определении соотношения величин поглощения при 280 и 260 нм и позволяет определять белок в присутствии нуклеиновых кислот. В нескольких методах, предложенных позднее, для измерений используются другие длины волн. [c.292]

Поглощение белков в дальней УФ-области определяется пептидными хромофорами, а в ближней — главным образом боковыми группами ароматических аминокислот. В нуклеиновых кислотах основной вклад в поглощение вносят основания. [c.60]

Кинетические процессы в нуклеиновых кислотах определяются двумя основными видами взаимодействия — стэкингом оснований и их спариванием, т.е. теми же факторами, которые определяют структуру нуклеиновых кислот. Нередко исследование кинетики этих взаимодействий может оказаться полезным для более детального понимания процессов, происходящих в полимерах. Образование стэкинга оснований в олигонуклеотидах является внутримолекулярной реакцией, поэтому его кинетику можно исследовать только путем возмущения системы. В качестве параметра, по которому производится возмущение, естественно выбрать температуру, поскольку ее изменение, как известно, меняет долю оснований, участвующих в стэкинге. Если за время порядка микросекунд поднять температуру раствора олигонуклеотидов, будет наблюдаться разрушение стэкинга, сопровождающееся увеличением поглощения. Однако скорость изменений оказывается слишком большой для количественной регистрации, даже если использовать весьма совершенные методы изучения релаксационных процессов (см., впрочем, работу Dewey, Turner, 1979). [c.332]

Методы количественного определения нуклеиновых кислот основаны на определении содержания составляющих их компонентов азотистых оснований (как правило, спектрофотометрически благодаря поглощению в ультрафиолетовой области спектра) пентоз (с помощью химических реакций, позволяющих отдельно определять рибозу и дез-оксирибозу) и фосфора нуклеиновых кислот. [c.161]

Для удаления РНК из тканевых срезов Поллистер и Рис [236] употребляют не рибонуклеазу, а 0,3 М раствор трихлоруксусной кислоты, в котором срезы выдерживаются при температуре 90 в течение 15 мин. Этот способ воздействия, основанный на аналитическом методе Шнейдера (стр. 100), не нарушает целостность клеточных структур в тканевых срезах или цитологических препаратах. Фотометрически определяют поглощение изучаемой структуры в лучах с длиной волны 254 ммп. Затем нуклеиновую кислоту удаляют горячей трихлоруксусной кислотой, после чего вновь измеряют поглощение. Разность в величинах поглощения соответствует поглощению, обусловленному присутствием нуклеиновой кислоты. Это позволяет рассчитать количество нуклеиновой кислоты. Удаление РНК из гистологических препаратов может быть достигнуто также обработкой их холодной хлорной кислотой [44—46], 0,1 н. раствором КОН ]47] илл горячей 1 н. НС1 [48]. [c.122]

Автор предполагает, что изменения в оптическом поглощении определяются не взаимодействием белка с нуклеиновой кислотой, однако такое предположение обосновано не для всех случаев. Заключения о наличии или отсутствии водородных связей между пуринами и пиримидинами в рибонуклеопротеидах, основанные только на характере изменения оптических свойств, также сомнительны, так как можно себе представить другие механизмы, которые предполагают ограничение внутринуклеотидного вращения (а отсюда и изменения в ультрафиолетовом поглощении). [c.631]

Молекулы воды, непосредственно окружающие макромолекулы, образуют сольватную оболочку. Их поведение отличается от молекул воды в объеме. Число молекул воды, образующих соль-ватную оболочку, определяет степень гидратации макромолекулы и зависит от характера взаимодействия макромолекул с водой. Метод определения степени гидратации макромолекул, основанный на измерении ЯМР ( Н) спектров поглощения замороженных водных растворов этих веществ, был предложен в работах Кунтца с сотр. [582, 649, 650]. Они обнаружили в ЯМР-спектрах (60 МГц) замороженных водных растворов белков и нуклеиновых кислот при температуре —35 °С относительно узкие (2504-900 Гц) сигналы резонансного поглощения от протонов воды. Найдено, что количество гидратной воды составляет 0,3ч-0,5 г на 1 г белка. Нуклеиновые кислоты оказываются в 24-5 раз более гидратированы, чем белки. [c.243]

Фотоденатурация нуклеиновых кислот является следствием разрушения кооперативной системы слабых нековалентных связей (водородные, гидрофобные и т. д.) и частичного (локального) или полного нарушения двуспиральной структуры Уотсона — Крика (эффект расплетания ). Наиболее вероятно, что денатурация нуклеиновых кислот представляет собой вторичный темновой процесс, вызванный образованием фотопродуктов, хотя не исключена возможность прямого разрыва слабых связей при тепловой диссипации энергии электронного возбуждения оснований, как это предполагается для белков. Несмотря на то, что спектр действия денатурации ДНК совпадает со спектром поглощения тимидина, причастность тиминовых димеров к образованию денатурированных участков в ДНК остается до сих пор сомнительной. Г. Б. Завильгельским твердо установлено, что локальные нарушения вторичной структуры ДНК при ее облучении коротковолновым светом определяются индукцией сшивок между комплементарными нитями ДНК. Наиболее точно такой вывод подтверждается опытами, в которых миграционным путем с ацетофенона на тимин изменялось количество тиминовых димеров в ДНК. При этом каких-либо различий в кривых плавления, отражающих состояние вторичной структуры, у образцов ДНК, содержащих 0,17 и 30% димеров, обнаружить не удалось. В то же время кинетика образования сшивок и локальных денатурационных участков в ДНК идентична. [c.241]

Этот способ стал использоваться для определения количества белка с тех пор, как Варбург и Христиан 174] сообщили о методе, основанном на измерении оптической плотности при 260 и 280 нм, что позволяет ввести поправку на содержание в препаратах нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Такая поправка очень важна, когда работают с сырыми экстрактами, но становится менее существенной по мере очистки белков и удаления мешающих веществ. В этом случае достаточно просто определить оптическую плотность при 280 нм. Белки поглощают при 280 нм единственно из-за присутствия в их молекулах остатков тирозина и триптофана (если только они не содержат поглощающих в УФ-свете простетических групп). Так как содержание этих двух аминокислот в белках очень сильно варьирует, коэффициент поглощения, выражаемый обычно как 280 или 280 также варьирует в значительной степени. У большинства белков величина 280 лежит в интервале 0,4—1,5, но имеются белки, занимающие по этому показателю крайние положения в ряду всех известных белков — это некоторые пар-вальбумины и сходные с ними Са +-связывающие белки (0,0), с одной стороны, и лизоцим (2,65) — с другой. Поглощение при 280 нм дает лишь приблизительное представление об истинном содержании белка исключение составляют чистые белки. Если точно известен коэффициент экстинкции чистого белка (он должен быть стандартизирован относительно сухого веса или по крайней мере относительно поглощения при 205 нм — см. ниже), то величина поглощения при 280 нм позволяет точно определить его содержание. По существу, это самый точный метод для определения чистых белков, поскольку в этом случае не требуется производить с ним никаких манипуляций, за исключением соответствующего разбавления. Разумеется, растворитель не должен поглощать при 280 нм, а если он поглощает — необходим точный контрольный опыт. Во время измерений белки не подвергаются никаким вредным воздействиям и не ра зрушаются, поэтому, хотя для точного определения нужно около 1 мг бел- [c.312]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология