Роторы с вертикальными пробирками

Материал, полученный одним из описанных выше методов, обычно контаминирован клеточными компонентами. Однако в тех случаях, когда высокая степень очистки не обязательна (например, для постановки RIA или ELISA), его можно использовать уже на этой стадии. Тем не менее для большинства исследований необходима дальнейшая очистка вируса с помощью зонально-скоростного или изопикнического центрифугирования в градиенте. При скоростном центрифугировании положение вируса в градиенте определяется его коэффициентом седиментации, а при изопикническом — плавучей плотностью. Для достижения максимальной степени очистки вирусных частиц от примесей изменение концентрации образующего градиент вещества должно быть плавным в то же время на промежуточных стадиях очистки нередко используют ступенчатые градиенты. В некоторых случаях принципы скоростного и изопикнического центрифугирования совмещаются примером может служить использование градиентов глицерина — тартрата калия [14]. В таких градиентах концентрация тартрата калия возрастает в направлении дна пробирки, достигая плотности, соответствующей плавучей плотности вируса концентрация глицерина, наоборот, максимальна на мениске, что препятствует продвижению медленно седиментирующего материала в направлении дна. Все типы градиентов обычно центрифугируют в бакет-роторах, но в случае изопикнических градиентов такие же или даже лучшие результаты можно получить в угловых или вертикальных роторах с помощью приспособлений для медленного разгона и остановки, обеспечивающих переориентацию градиента без перемешивания. При очистке конкретного вируса часто приходится проводить целую серию последовательных стадий центрифугирования в разных типах градиентов, чтобы добиться нужной степени очистки. [c.100]

Усовершенствование воздушных ультрацентрифуг, у которых ось ротора находится в вертикальном положении, облегчило конструирование и эксплуатацию роторов для ячеек большой емкости, пригодных для препаративных целей. Описанные Пикель-сом [278] роторы снабжены большим числом изготовленных из пластмассы пробирок, устанавливаемых обычно под углом приблизительно 35° к вертикали. При таком устройстве для достижения внешней стенки пробирки отдельным молекулам белка необходимо пройти относительно короткое расстояние, после чего собирающийся концентрированный раствор под действием силы тяжести сползает вниз вдоль наклонной стенки пробирки на дно. [c.66]

РОТОРЫ с ВЕРТИКАЛЬНЫМИ ПРОБИРКАМИ [c.191]

Рис. 70. Переориентация градиента плотности а —г) при вращении ротора с вертикальными пробирками

Однако ротор с вертикальными пробирками можно успешно использовать и для зонально-скоростного центрифугирования вместо бакет-ротора. В отличие от углового ротора относительно тяжелые частицы не будут здесь попадать на стенку пробирки вплоть до момента прохождения ими всего градиента плотности. Приведенные выше рассуждения о том, что стенка пробирки углового ротора не влияет на образование градиента плотности солевого раствора, не относятся к поведению фракционируемых частиц при зонально-скоростном центрифугировании, ведь плотность этих частиц заведомо больше, чем максимальная плотность раствора сахарозы. Попав в любой части пробирки на ее стенку, частицы, а тем более их агрегаты, будут легко соскальзывать по стенке на дно пробирки. Всего этого не будет в вертикально стоящей пробирке. [c.257]

Ввиду весьма кардинальной перестройки градиента при разгоне и остановке использование роторов с вертикальными пробирками требует особенно плавного протекания этих процессов. В современных центрифугах для этой цели предназначены специальные устройства. [c.258]

Таким образом, на практике в настоящее время бакет-рото ры используют для зонально-скоростного центрифугирования, угловые —для равновесного, а роторы с вертикальными пробирками — как для того, так и для другого. Для сбора осадков при дифференциальном центрифугировании одинаково пригодны как угловые, так и бакет-роторы, а роторы с вертикальными пробирками неудобны осадок образуется не на дне. а вдоль образующей цилиндрической части пробирки. [c.258]

Следует еще раз обратить внимание на важность выбора материала пробирок для угловых роторов и роторов с вертикальными пробирками при равновесном центрифугировании в солевом градиенте, особенно в том случае, когда градиент заполняет лишь часть объема пробирки и на него наслаивают масло. Нагрузка на пробирку в поперечном направлении оказывается очень значительной и неравномерной. Пробирки из более жестких материалов (полипропиленовые и поликарбонатные) могут трескаться, поэтому предпочтение следует отдать прочным и пластичным полиалломерным пробиркам. [c.258]

При выделении из больших объемов культуры используйте угловые роторы или роторы с вертикальным расположением пробирки. [c.89]

Рассмотрим особенности фракционирования препаратов в угловом роторе. В момент достижения равновесия зоны частиц будут расположены вертикально (рис. 69, а). В ходе остановки ротора произойдет обратная переориентация всего градиента плотности, а вместе с тем и разделенных зон частиц (рис. 69, б). Зоны при этом не нарушатся. Когда пробирка будет вынута из ротора и установлена вертикально для раскапывания градиента, его окончательная ориентация произойдет под действием силы тяжести, а зоны расположатся горизонтально (рис. 69, в). Расстояние между зонами при этом увеличится, что облегчит их фракционирование. [c.255]

Особое применение находят роторы с пробирками, ориентированными вертикально в течение всего процесса центрифугирования. Достоинства вертикального расположения пробирок и возможности таких роторов будут рассмотрены ниже. Здесь лишь укажем, что роторы этого типа выпускают все три ведущие фирмы Весктап , MSE и Dupont-Sorvall . [c.191]

Фирма Весктап производит роторы с вертикальными пробирками четырех типов VA1-26, VTi-50, VTi-65 и VTi-80. Буквой V обозначен ротор с вертикальными пробирками далее указаны материал ротора и максимально допустимая частота вращения (в тысячах об/мин). Два первых ротора несут по восемь пробирок объемом 39 мл каждая, два последних — по восемь пробирок объемом 5,1 мл. [c.191]

После формирования градиента плотности раствора сахарозы в вертикальной пробирке на него, как обычно, наслаивают раствор исходного препарата. Находясь в растворе сахарозы малой концентрации, препарат в ходе переориентации градиента оказывается распластанным вдоль ближайшей к оси ротора стенки пробирки. Толщина его слоя при этом уменьшается в несколько раз, что способствует лучшему разделению зон. Для того чтобы к моменту начала осаждения частиц слой препарата отошел от стенки пробирки и принял оптимальную форму прямоугольного сечения, на него предварительно иаслаи- [c.257]

Фиг. 39. Разрешение фракций в угловом роторе при изопикниче-ском разделении улучшается после извлечения пробирки из ротора и перевода из рабочего положения (А) в вертикальное (Б) [12].

Центрифугируйте 15 мин при 5000 об/мин в роторе GSA на центрифуге Sorvall R 5 (или в аналогичных условиях). Слейте надосадочную жидкость через тонкую ткань, чтобы удалить крупные плавающие хлопья клеточных остатков. Соберите надосадочную жидкость и добавьте 0,6 объема пропан-2-ола. Оставьте на льду на 30 мин. Выпавший тяжелый осадок открутите при низких скоростях. Удалите остатки надосадочной жидкости и ресуспендируйте осадок в ТЭ. Объем ТЭ зависит от размера ультрацентрифужной пробирки, которую вы потом будете использовать, Л1ы пользуемся вертикальным ротором VTi 65 с 5-миллилитровыми пробирками и поэтому ресуспендируем осадок в 5 мл ТЭ, разливая затем пробу в две пробирки, [c.64]

Роторы препаративных центрифуг обычно бьшают двух типов — угловые и с подвесными стаканами. Угловыми они называются потому, что помещаемые в них центрифужные пробирки все время находятся под определенным углом к оси вращения (обычно 20— 35°). В роторах с подвесными стаканами пробирки устанавливаются вертикально, а при вращении под действием возникающей центро- [c.52]

Зональное центрифугирование лучше всего проводить в бакет-роторах или вертикальных роторах, чтобы избежать нежелательного взаимодействия материала со стенками пробирки. Линейные градиенты сахарозы (5—20%, вес на вес) готовят одним из стандартных методов (см. гл. 1, разд. 2.5.1) и сверху осторожно наслаивают раствор вируса. Поскольку при использовании данного метода отсутствует эффект концентрирования в результате образования зоны с соответствующей плавучей плотностью, объем образца не должен превышать 1/10 объема градиента. Центрифугирование следует проводить при 4°С. Время и скорость центрифугирования во многом зависят от геометрии используемого ротора, поэтому можно дать лишь самые приблизительные указания относительно режима. Первоначально используемый режим центрифугирования обычно приходится модифицировать после первых опытов с учетом полученных результатов. В бакет-роторе, например SW27, центрифугирование в течение 2 ч при 27 ООО об/мин позволяет получить достаточную степень очистки большинства тогавирусов. [c.101]

Такое послойное смещение будет реально иметь место в том случае, если преформировать ступенчатый градиент плотности в пробирке углового ротора. Начнем, очевидно, с наслаивания растворов разной плотности в вертикально стоящей пробирке (рис. 67, а). Затем установим ее наклонно в ротор (рис. 67, б). Границы раздела слоев разной плотности, очевидно, останутся горизонтальными. По мере ускорения вращения ротора и нарастания центробежной силы более плотные слои жидкости будут стремиться занять наиболее удаленную от оси вращения часть объема пробирки, вытесняя оттуда менее плотную жидкость. Аналогичным образом поведут себя и остальные слои, в каждом случае уступая удаленную часть объема пробирки более плотному слою жидкости, в результате при достаточно большой скорости вращения ротора (когда центробежные силы во много раз превысят силу тяжести) все слои расположатся в том же порядке, что и вначале,, но границы между ними будут проходить вертикально (рис. 67, в). Произойдет переориентация слоев. [c.254]

Проведенное рассмотрение переориентации градиента в угловых роторах делает возможным ознакомление с крайним случаем такой переориентации — в роторах с вертикально стоящими пробирками. Оказалось, что такие роторы имеют определенные преимущества по сравнению с угловыми и бакет-роторами. Сначала преформируют градиент плотности и его слои располагаются горизонтально (рис. 70, а). По мере плавного разгона ротора до частоты вращения 1 ООО об/мин слои градиента переориентируются. так, что в конце концов распо- лагаются вертикально (б—г). При остановке ротора происходит обратная переориентация градиента и зон частиц, как и в случае углового ротора. Даже в этом, крайнем случае ни градиент, ни зоны не искажаются, если остановка ротора производится достаточно плавно. Преимущество быстроты формирования равновесного градиента плотности здесь выражено максимально, так как вся длина градиента укладывается в диаметре пробирки. [c.257]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология