Колцемид

Применение колхицина против злокачественных новообразований ввиду значительной токсичности оказалось затруднительным. После выделения колхамина (за рубежом его называют демеколцин, колцемид и др.) и изучения его противоопухолевых свойств оказалось возможным ввести его в медицинскую практику. Он нашел применение цротив р [c.5]

Сначала клетки обрабатывают колцемидом, чтобы заблокировать образование веретена зто приводит к накоплению метафазных клеток в культуре. Такие клетки имеют более округлую форму и слабее прикреплены к пластику, чем другие клетки популяции, поэтому при встряхивании флакона они легко отделяются от субстрата. Метафазные клетки затем обрабатывают гипотоническим раствором (что приводит к их набуханию), после чего фиксируют в смеси метанол — уксусная кислота. Когда суспензию таких клеток по каплям наносят на предметное стекло, клетки лопаются и хромосомы расправляются на стекле по мере высыхания раствора. Реактивы для этой процедуры приведены в табл. 8.12, а сам метод описан в табл. 8.13. На следующем этапе хромосомы обрабатывают РНКазой, чтобы исключить гибридизацию зонда с хромосомной РНК, и затем уксусным ангидридом, который ацетилирует хромосомные белки и тем самым еще более уменьшает неспецифическое связывание зонда. Хромосомную ДНК денатурируют нагреванием и гибридизуют с зондом, предварительно меченным I- TP. Избыток меченого зонда удаляют серией промывок в низкосолевом буферном растворе и покрывают препарат фотоэмульсией. После необходимой экспозиции выявляют участки образования зерен серебра, соответствующие сайтам амплификации гена. Необходимые реагенты приведены в табл. 8.14, а сама процедура описана в табл. 8.15. [c.266]

Колцемид (10 мкг/мл). Растворите 5 мг колцемида в 5 мл воды. Разведите в 100 раз PBS и стерилизуйте фильтрованием через фильтр 0,2 мкм. Храните при 4 °С. [c.267]

Добавьте 20 мл инкубационной среды, содержащей 0,2 мл колцемида и [c.267]

Действие колцемида на клетку обратимо, причем по сравнению с другими митостатическими агентами этот алкалоид более эффективен и менее токсичен [81аЬЫе111(1, 1965]. Колцемид —наиболее часто применяемый ингибитор при выходе из метафазного блока. Этот алкалоид ингибирует полимеризацию блоковых субъ- [c.51]

Из результатов опытов (табл. 10) мы получили наглядную картину изменения жизненного цикла культуры клеток в зеркальной культуре после 24-часовой экспозиции с клетками, подвер-га15п1имися действию колцемида. [c.53]

Влияние культуры клеток, обработанных колцемидом, иа клеточный щкл зеркальпо1Ь> культуры клеток [c.54]

Sp опытных пренаратов также 31гачительпо ни ке (в 2 раза) Sp контрольных и зеркальных препаратов. Это связано с токсическим действием колцемида, а также с тем, что митотические клетки имеют слабый контакт с подлои<кой и легко смываются при вращении в барабане (на этом явлении основан оди) из методов получения синхронной культуры). Так как ЦПЭ в зеркальной камере, по нашим данным, запаздывает на 10—12 ч, то митотические клетки еще дери атся па стекле и их в 2 раза больше, чем в колцемидной камере. [c.54]

Рис. 10.12. Графический анализ клеточного цикла. Культуры клеток комара Aedes albopti us в чашках Петри диаметром 5 см регулярно анализировали для установления продолжительности времени удвоения (принимаемого за время генерации). После установления экспоненциального роста культуры к клеткам добавляли Н-тимидии и колцемид и клетки продолжали инкубировать для определения процента меченых клеток, митотического индекса и <02. Способ построения графика указан в тексте (см. разд. 10.7,4).

Если вернуться к табл. 11, то можно отметить, что средняя вероятность появления зеркального эффекта при действии колцемида ниже, чем вероятность появления зеркального эффекта для других экстремальных агентов, вызывающих гибель клеток. [c.58]

При применении ингибиторов клеточного цикла (колцемид) мы получаем в зеркальной культуре тот же процесс метафазного блока, что и в камере-индукторе. Эта модель уже иного толка, так как здесь идет передача информации не о гибели клеток мопослоя, а об изменении клеточного цикла. [c.98]

Рис. 10.9. Накопление митотических клеток. Показана зависимость функции накопления митотических клеток Ig (1+iVm) от времени для клеток китайского хомячка (Г=12,4 ч) и клеток HeLa (7 =20,1 ч), к которым в нулевое время добавляли колцемид. [Перепечатано с любезного разрешения автора (Риск,

Впервые выявлена важная роль структур цитоскелета в активации и регуляции депо-зависимого входа Са" в перитонеальные макрофаги. Агенты, нарушающие структуру микротрубочек (винбластин, колхицин, колцемид) и актиновых микрофиламентов (цитохалазины, фаллоидин), практически полностью подавляют депо-зависимый вход Са", индуцированный тапсигаргином или ЦПК. Следовательно, для нормального функционирования механизма депо-зависимого входа Са"" в макрофаги необходима интакность цитоскелетного аппарата макрофагов (Крутецкая и др., 2001 а). [c.151]

Препараты клеток костного мозга получают из материала пункции грудины или подвздошной кости. Клетки культивируют только 2 ч с колцемидом. Процедура приготовления препаратов несколько отличается от процедуры, описанной выше. Культуру фибробластов получ р/ из материала биопсии кожи. Ее измельчают и выращивают в культуральной среде таким образом, чтобы кусочки были прикреплены к поверхности культурального сосуда. Через 10 дней клетки начинают расти по этой поверхности, через 21 день готовят суспензию и делают препараты. [c.43]

Даже если геном эмбриона начинает экспрессироваться на стадии двух клеток, это еще не означает, что такая экспрессия необходима для нормального развития. Решению этого вопроса может помочь анализ генетических вариантов с аномалиями развития. Доминантная мутация олигосиндактилии обусловливает аномалии формирования конечностей и почек, у гомозигот по такой мутации развитие останавливается на шестом делении зиготы Метафазы при этом похожи на метафазы клеток, обработанных ингибитором митоза колцемидом. Дефект образования веретена, приводящий к накоплению метафазных клеток, был обнаружен уже на стадии бластоцисты, следовательно, уже на этой стадии необходима работа определенной части генов зиготы. [c.128]

Связываются с тубулином Колхицин, колцемид [c.98]

В разные сроки после удаления колцемида клетки обрабатывали флуоресцирующими антителами к тубулину. Микротрубочки сначала появляются в виде звездчатых структур, а затем растут по направлению к периферии клетки. (М. Osborn, К. Weber, [c.107]

Поскольку даже в экспоненциально растущей культуре лишь небольшая часть клеток находится в митозе, то возникает необходимость увеличить их число, добавляя в культуру колцемид, блокирующий клетки в митозе (разд. 10.2). Действуя на веретено, такая обработка облегчает также разделение индивидуальных хромосом. [c.102]

Более простой, хотя менее удовлетворительный по результатам метод заключается в выращивании клеток на покровном стекле и обработке их колцемидом, как указано выше. После этого покровное стекло с клетками инкубируют в течение 30 мин в теплом гипотоническом растворе (см. выше стадия в ), клетки фиксируют 10 мин и высушивают при комнатной температуре. После этого клетки окрашивают и покровное стекло монтируют на предметном клетками вниз. [c.103]

Растущие клетки обрабатываются колцемидом (0,4 мкг/мл в течение 3 ч при 37 °С), и если клетки росли в монослое, то их следует снять с подложки с помощью трипсина. [c.106]

Некоторую информацию можно получить, изучая накопление митотических клеток при добавлении агентов, блокирующих митоз. Культуры устанавливались, как указывалось выше, и в нулевой момент времени в культуры добавляли колцемид (0,25 мкг/мл). [c.136]

Рис. 10.10. Накопление меченых митотических клеток. Эксперимент с клетками HeLa S3, аналогичный отображенному на рис. 10.9, но в данном случае в нулевой момент времени вместе с колцемидом был добавлен Н-тимидин. После начального лаг-периода кривая накопления всех митотических клеток проходит параллельно кривой накопления меченых митотических клеток и расстояние между ними соответствует продолжительности фазы G2 [Перепечатано с любезного разрешения авторов (Риск, Steffen, 1963) и издателей.]

Если одновременно с колцемидом в культуры добавлять три-тированный тимидин, то можно построить три кривые накопления а) общего накопления меченых клеток, б) общего накопления митозов и в) накопления меченых митозов. На основании этих трех кривых можно вычислить продолжительность фаз S и 02, а следовательно, и фазы 01. [c.137]

Эксперименты для получения всей этой информации занимают 3—4 ч с использованием и без использования колцемида. [c.139]

Рис. 10.14. Влияние низких доз рентгеновского облучения на накопление митотических клеток. Эксперимент проводился так же, как описано для клеток HeLa на рис. 10.9, но через 3 ч после добавления колцемида половину культур облучали рентгеном (9 рад) (нулевое время на графике). Через 0,6 ч перед профазой (А) продвижение клеток к митозу полностью подавляется, но спустя еще 0,7 ч (Б) митотические клетки начинают накапливаться с нормальной скоростью. Следовательно, облучение влияет только на небольшую часть клеток, находящихся в положении 0,6—1,3 ч перед профазой. Через 1,95 ч в этих клетках восстанавливается способность к митозу, О контрольные необ-лученные клетки облученные клетки. (Риск, Steffen, 1963.)

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.98 , c.107 ]

Методы культуры клеток для биохимиков (1983) -- [ c.124 , c.125 , c.136 , c.147 ]

Анализ генома (2001) -- [ c.16 ]

Анализ генома Методы (1990) -- [ c.16 ]

Цитоскелет Архитектура и хореография клетки (1987) -- [ c.73 , c.82 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология