Разделение электрофорезом

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Таблица 20.1. для аминокислот при разделении методом хроматографии на бумаге и подвижности при разделении электрофорезом [c.389]

Разделение. Электрофорез предпочтительнее хроматографии, так как приводит к более четким пятнам и в меньшей степени зависит от изменения условий. Разделение проводят при нескольких значениях pH, включая pH 1,9 (основные группы полностью ионизованы, почти все [c.394]

Одним из недостатков промышленных солюбилизаторов является их высокая стоимость. В связи с этим можно упомянуть работу [40] , в которой описан недорогой способ анализа меченных тритием РНК после разделения электрофорезом в геле. Гели, содержащие 2%) полиакриламида и 0,5% агарозы, вымачивают в течение ночи в 10%-ной уксусной кислоте, после чего их разрезают и отрезанные фрагменты помещают в изме- [c.143]

После разделения электрофорезом полоски бумаги высушивают при 90° в сушильном шкафу. Для окрашивания [c.247]

Рефрактометрия находит применение также в количественной тонкослойной хроматографии пятна разделенных компонентов экстрагируют подходящим растворителем, и концентрацию полученных растворов определяют по показателю преломления [39, 40]. В специальных методах разделения —электрофорезе, диффузии, ультрацентрифугировании — используется более сложная техника определения градиентов показателей преломления, рассматриваемая в гл. XV. [c.53]

Рис. 2. График элюции антител, содержащихся в одной и той же сыворотке и разделенных электрофорезом в агарозном блоке.

Обнаружение и локализацию белковых зон после их разделения электрофорезом в ПААГ в большинстве случаев осуществляют путем их прокраски в геле. Зоны проявляются как окрашенные полоски или пятна различной интенсивности, в зависимости от содержания в них белка. Для окраски гель вымачивают в растворе красителя, который диффундирует внутрь него и прочно связывается с белками. Процесс диффузии, как правило, занимает несколько часов. Во избежание размывания полос за это время белки иногда предварительно фиксируют осаждением. Для этого гель сначала вымачивают в 10%- или 50%-ной трихлоруксусной кислоте (ТХУ). Чаще фиксацию совмещают с окрашиванием, используя раствор красителя в. смеси уксусной кислоты и метанола или в ТХУ. [c.88]

Важное преимущество системы заключается в том, что такой гель можно расплавлять и извлекать разделенные электрофорезом полосы из жидкости, KaK описано ниже для гелей агарозы. [c.149]

РАЗДЕЛЕНИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ ГИГАНТСКИХ МОЛЕКУЛ ДНК [c.58]

Полиамидный характер цианокобаламина установлен по выделению 6 мол. аммиака при кислотном гидролизе. При кислотном гидролизе витамина В12 горячим раствором соляной кислоты обнаружен красный аморфный осадок, содержащий кобальт, представляющий собой смесь кислот, содержащих от одной до семи карбоксильных групп, разделенных электрофорезом. То обстоятельство, что отщепление -1-аминопропанола-2 происходит после отщепления нуклеотида (I), а также отсутствие основных групп в красном кобальтосодержащем продукте гидролиза позволило заключить, что аминопропиловый спирт этерифицирован фосфорной кислотой и соединен амидной связью с остальной молекулой. [c.682]

Наличие в арабогалактановой фракции 4-0-метилглюкуроноксилана, галактуронорамногалактана и арабана подтверждено разделением электрофорезом на бумаге в боратном буфере [126]. [c.222]

Для их разделения электрофорез обычно проводят при pH 1,8—2,0, когда все они мигрируют к аноду с незначительным, но уловимым различием в подвижности. После электрофореза местоположение аминокислот на электофореграмме выявляют с помощью химических реакций, а после элюции окращенных продуктов определяют их количественно. [c.43]

Цианокобаламин имеет полиамидный характер, что установлено по выделению аммиака (6 молей) при кислом гидролизе [11, 27, 88] и данным инфракрасного спектра. При анализе продуктов гидролиза цианокобаламина в кислых, нейтральных и щелочных растворах эф ктивно применен метод электрофореза и хроматографического разделения. Электрофорез на бумаге при pH 6,5 и 10 позволил разделить продукты расщепления на отдельные соединения по их ионным зарядам. Ступенчатый гидролиз в холодной разбавленной соляной кислоте показывает присутствие трех амидных групп, относящихся, по-видимому, к боковым цепям пропионовых кислот. Получены три одно-, три двух-, одна трех- и одна четырехосновная кислоты, содержащие нуклеотидную часть молекулы витамина эти кислоты были превращены с хлоругольным эфиром в смешанные ангидриды и затем с аммиаком в цианокобаламин [27]. [c.587]

Разделение электрофорезом. Добици и Грассини [160] разделяли ионы перйодата и иодата на тонких слоях алебастра. Слой алебастра насыщали 0,05 М раствором карбоната аммония, служившим электролитом, и проводили разделение при напряжении 300—400 В в течение 1,5—2 ч. Разделение было гораздо лучшим, чем при электрофорезе на бумаге. Могисси [129] использовал для электрофоретического разделения анионов слои силикагеля или кизельгура. Он применял как низковольтную, так и высоковольтную аппаратуру, но опубликовал только данные, полученные на высоковольтном приборе. Для разделения анионов использовался в качестве электролита 0,1 н. гидроксид натрия, и при продолжительности разделения 2 мин и напряженности поля 45 В/см получились следующие длины путей миграции (в миллиметрах) S N- 35 SeO 30 (образование [c.509]

Разделить с помощью одной лишь хроматографии эту сложную смесь продуктов частичного расщепления цепи — аминокислот, дипептидов, трипептидов, тетрапептидов и т. д. — было очень трудно. Зангер и Туппи применили другие методы разделения (электрофорез и адсорбцию на угле и на ионообменных смолах), с помощью которых они разделили пептидные обломки на группы. Теперь они подвергали анализу уже эти более простые смеси с помощью хроматографии на бумаге. Им удалось выделить из разрушенной цепи 22 дипептида, 14 трипептидов и 12 более крупных обломков (см. фиг. , А). Хотя эти вещества были получены лишь в микроскопических количествах, тем не менее специальными методами они были идентифицированы и была установлена последовательность расположения образующих их аминокислот. [c.97]

Хлорокомплексы родия 0,1 н. буферный раствор смесь 0,3 н. уксусной кислоты и 0.2 н. ацетата натрия бумага фирмы Шлейхер и Шюлл 2043 btngl условия разделения электрофорез выполнен за 30 мин при напряжении 3 кВ. [c.317]

РИС. 8.2. Двумерное разделение электрофорезом фосфоаминокислот в первом направлении при pH 1,9, во втором направлении при pH 3,5 [43]. [c.263]

Недавно описано разделение электрофорезом на пластинах 6%-ного ПААГ в 98%-НОМ формамиде фрагментов ДНК, выделенных из мононуклеосом. Окрашивание вели 0,005%-ным раствором Stains-all в 50%-ном формамиде в течение 16 ч [Lew et al., 1979]. [c.137]

При анализе разделенных электрофорезом молекул ДНК широкое распространение получил метод переноса нуклеиновых кислот из агарозных гелей на нитроцеллюлозную бумагу, разработанный Е. Саузерном в 1975 г. в отечественной литературе его принято называть блоттингом по Саузерну (от англ. blotting — промокание). Сначала молекулы ДНК (или их фрагменты), разделенные по размерам электрофорезом в пластинах агарозного геля, денатурируют шелочью, после нейтрализации щелочи [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология