Альбумин сывороточный, гидролиз ферментами

НЫМИ катионогенными и анионогенными группами. В отличие от этого кислотный гидролиз сывороточного альбумина приводит к образованию фрагментов, проявляющих иные сорбционные свойства по сравнению со свойствами исходного белка. Анализ взаимодействия белков с ионообменными смолами весьма существен для развития представления о механизме межмолекулярных взаимодействий белков с другими электролитами и полиэлектролитами. Так, например, взаимодействие фермент—субстрат в том случае, когда субстрат является электролитом, также должно определяться и расположением ионогенных заряженных групп в обеих молекулах. [c.196]

Были синтезированы конъюгаты сывороточного альбумина человека с аденозиндезаминазой — ферментом, катализирующим гидролиз аденозина с образованием инозина и аммиака. Для регистрации ферментативной активности использовали чувствительный к аммиаку ионселективный электрод. Метод прост и. позволяет определить белок в концентрации 1 мкг/мл. [c.118]

В то же время уже более тридцати лет известно, что большинство найденных в природе белков при парентеральном введении в организмы другого вида действуют как антигены [38, с. 430] и результаты анализа продуктов гидролиза очищенных антител. .. показывают, что по своему аминокислотному составу антитела очень близки (если не идентичны) нормальным сывороточным 7-глобулинам [38, с. 438]. Измерение соотношения глобулин / альбумин проводится при рутинном анализе крови. Очевидно, что при недостаточном изменении свойств иммобилизованного белка не исключено его взаимодействие по типу антиген - антитело с 7-глобулинами плазмы крови, содержащимися в пробе. В случае анализа слюны в пробе неизбежно присутствуют ферменты, которые также могут сильно удерживаться и отрицательно воздействовать на привитые молекулы альбумина (разрушать их) в случае сохранения доступных участков с нативной структурой. [c.544]

Из табл. 26 следует, что действие фермента наиболее эффективно в отношении субстратов, содержащих более крупные боковые цепи. Ароматические остатки меиее чувствительны относительно медленно гидролизуются амиды аминокислот, имеющих полярные боковые группы. Скорости гидролиза пептидов зависят также от природы аминокислот, примыкающих к N-концевому остатку. В ряде случаев оказалось возможным частично выяснить N-концевую последовательность при подМощи лейцинаминонептидазы. Окисленные А и В-цепи инсулина легко гидролизуются ферментом до свободных аминокислот. Путем кинетического исследования удалось установить последовательность первых шести N-коицевых аминокислот В-цепи инсулина. При помощи лейцинаминопептидазы были получены важные данные об N-концевой последовательности ряда природных пептидов и пептидных фрагментов, полученных из белков. Некоторые белки, например рибонуклеаза, лизоцим, Zn-инсулин и сывороточный альбумин, устойчивы к действию фермента, но легко гидролизуются после окисления надмуравьиной кислотой или после удаления Zn (в случае инсулина). Полное расщепление пептида или белка до аминокислот указывает на L-конфигурацию всех входящих в его состав аминокислот. f [c.183]

Реактивация фермента. Прежде всего с помощью гидролиза в мягких условиях снимают ацильные группы модифицированных аминокислот. Раствор белка разбавляют вдвое 0,2 М трис-ацетатным буфером (pH 8,1). При содержании белка <1 мг/мл в раствор добавляют бычий сывороточный альбумин до суммарной концентрации белка 1 мг/мл. Раствор осторожно титруют при комнатной температуре насыщенным (при 23 С, 100%-ное насыщение) сульфатом аммония, подкисленным до pH 2 концентрированной серной кислотой. Белок начинает выпадать в осадок при pH ,6,5. Суспензию выдерживают при pH 4,6 и комнатной температуре в течение 30—60 мин. а затем центрифугируют при 28 ООО и 4 °С в течение 30 мин. Осадок ресуспендируют в охлажденном до 4 X буфере следующего состава 100 мМ калнйфосфат (pH 8,5)+ 10 мМ дитиотрент+0,5 мМ калий ЭДТА+Ю мкМ флавинмононуклеотид. Небольшая примесь бычьего сывороточного альбумина (0,1 мг/мл) способствует растворению осадка. Сульфат аммония удаляют с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 в указанном буфере. Обессоленный образец (1—2 мг/мл) инкубируют в буфере для реактивации при 25 °С. [c.60]

Путь катаболизма триацилглицеролов начинается с их гидролиза до жирных кислот и глицерола под действием липазы в основном этот процесс происходит в жировой ткани. Высвободившиеся жирные кислоты поступают в плазму крови, где связываются сывороточным альбумином. Затем свободные жирные кислоты переходят в ткани, где они либо окисляются, либо вновь подвергаются эстерификации. Ткани многих органов (печени, сердца, почек, мышц, легких, семенников, мозга), а также жировая ткань способны окислять длинноцепочечные жирные кислоты. Однако поступление этих кислот в клетки мозга затруднено. Что касается судьбы глицерола, то она зависит от того, присутствует ли в данной ткани необходимый активирующий фермент— глицеролкиназа (рис. 25.1). Значительное количество этого фермента обнаружено в печени, почках, кишечнике, бурой жировой ткани и в молочных железах в период лактации. [c.247]

Триацилглицеролы гидролизуются гормон-чувствительной липазой до свободных жирных кислот и глицерола. Этот фермент отличается от липопротеинлипазы, катализирующей гидролиз липопротеиновых триацилглицеролов перед их поглощением внепеченочными тканями (см. с. 262). Поскольку жировая ткань практически не способна утилизировать глицерол, он диффундирует в плазму крови, откуда поступает в такие ткани, как печень или почки, в которых подвергается дальнейшим превращениям благодаря наличию активной глицеролкиназы. Свободные жирные кислоты, образовавшиеся в процессе липолиза, превращаются в жировой ткани в ацил-СоА под действием ацил-СоА-синтетазы, а затем вновь эстерифицируются глицерол-З-фосфатом с образованием триацилглицеролов. Таким образом, в жировой ткани осуществляется непрерывный цикл, включающий липолиз и эстерификацию. Однако если скорость липолиза превышает скорость эстерификации, в жировой ткани накапливаются свободные жирные кислоты, которые затем диффундируют в плазму, где связываются сывороточным альбумином в результате уровень свободных жирных кислот в плазме увеличивается. Свободные жирные кислоты плазмы служат одним из основных источников энергии для многих тканей. [c.268]

Белки и, в первую очередь, сывороточный альбумин и иммуноглобулины представляют собой полимеры-носители с биологической активностью. Последние обычно используют для придания ФАП биоспецифичности в отношении антигенов клеточной поверхности или рецепторов, подверженных специфическому эндоцитозу. В этом отношении они не имеют конкурентов среди других полимеров. Недостатками белков как носителей ФАВ являются невысокая стабильность, а для иммуноглобулинов — низкая емкость по присоединяемому веществу из-за возможного нарушения конформации активных центров и снижения иммунологической активности. Присоединение ФАВ к белкам может придать им антигенность (см. гл. 4). В большинстве случаев ФАВ связывают с белками амидной связью, используя концевые аминогруппы остатков лизина. Такие связи гидролизуются лизосомальными ферментами. [c.49]