Альбумин сывороточный, гидролиз

Структурообразующие белки тела человека называют фибриллярными белками (или волокнистыми, они имеют вытянутую, нитеобразную форму). Важнейшие фибриллярные белки животных — это кератин и коллаген белок кератин входит в состав волос, ногтей, мышц, рогов, игл и перьев коллаген — структурный компонент сухожилий, кожи, костей, соединительной ткани. При кипячении коллаген гидролизуется и образует растворимый в воде белок, называемый желатиной. В теле человека имеются растворимые белки, именуемые глобулярными белками. Альбумины, такие, как сывороточный альбумин, получаемый из крови животных, овальбумин яичного белка, лактальбумин молока, растворяются в холодной воде и слабом растворе соли. Глобулины, например глобулины плазмы крови, фибриноген, глобулин яичного белка, глобулин молока, растворяются в разбавленных растворах солей, но не в холодной воде. [c.384]

Исследуя наиболее хорошо изученные к тому времени белковые вещества (альбумины плазмы крови и яичного белка, фибрин, казеин и т. д.), Мульдер установил, что они содержат различные количества фосфора и серы, которые, как тогда полагали, входили в состав белков в виде фосфорнокислых или сернокислых солей натрия, калия или кальция. Мульдер считал, что кроме этих связанных форм фосфора и серы белки содержат некоторые количества свободной серы, а в отдельных случаях — свободного фосфора. При этом подразумевалось, что свободные сера и фосфор как-то связаны только с радикалами белковой молекулы. Количественно анализируя полученную при сжигании белков золу и определив в ней содержание серы и фосфора, ученый, сопоставив полученные им данные процентного содержания этих элементов, а также углерода, кислорода, водорода и азота и вычисленные им молекулярные веса отдельных белков, пришел к результатам, почти ничего не добавившим к уже известным тогда фактам [330, 334]. Выведенные им молекулярные веса отдельных белковых веществ и процентное содержание в них отдельных элементов представляли собой величины такого Же порядка, что и найденные его предшественниками. После этих предварительных опытов Мульдер попытался выделить из белковых веществ отдельные, составляющие их фрагменты, используя для этого уже известные ранее приемы — воздействие слабых растворов кислот при 50—60° С. Для гидролиза белка он впервые использовал щелочь. При этом было обнаружено, что при обработке раствором едкого калия при 50° С фибрина, сывороточного или яичного альбумина, предварительно очищенных смесью спирта, эфира и слабой соляной кислоты, происходило полное растворение белков. При нейтрализации полученного раствора слабой уксусной кислотой выпадал белый хлопьевидный осадок, который, как и предполагал Мульдер, был полностью лишен свободной серы и свободного фосфора. Определив элементарный состав и процентное содержание углерода, водорода, азота и кислорода и вычислив молекулярный вес этих осадков, ученый обнаружил, что независимо от того, какой белок [c.30]

Сывороточный альбумин быка гидролиз 30 мин 0,1 н. НС1 4 час [c.196]

Биливердин, первый продукт размыкания цикла, восстанавливается в билирубин, который транспортируется в печень в виде комплекса с сывороточным альбумином. В печени билирубин превращается в глю-курониды [уравнение (12-12)], образующиеся за счет гликозилирования боковых остатков пропионовой кислоты. Многие из конъюгатов билирубина поступают в желчь. В кишечнике они вновь гидролизуются до-свободного билирубина, который восстанавливается кишечными бактериями в уробилиноген, стеркобилиноген и жезо-билирубиноген. Эти соединения бесцветны, но легко окисляются кислородом в уробилин и стер кобилин. Некоторая часть уробилина и других желчных пигментов вновь поступает в кровь и выделяется с мочой, придавая ей всем известный характерный желтый оттенок. [c.130]

Благодаря наличию единственного остатка триптофана в молеку-. ле человеческого сывороточного альбумина можно расшифровать один из центров связывания [308]. С помощью спектральных методов исследования и путем частичного гидролиза белка установлена аминокислотная последовательность этого центра — Лиз —Ала — Три — Ала — Вал — Ала — Apr—. [c.233]

Белковый гидролизат. Проводят гидролиз сывороточного альбумина (см. гл. 7) или желатины 100 мг белка кипятят с обратным холодильником в течение ночи с 3 мл концентрированной соляной кислоты и 2 мл воды. Гидролизат разбавляют 10 мл воды, нейтрализуют 2 н. раствором едкого натра до pH 7 [по потенциометру или же в присутствии внешнего индикатора — фенолового красного и бромкрезолового зеленого (1 1) изменения цвета pH 6,6 — желтый, 6,8 — зеленоватый, 7,0 — серый, 7,2 — пурпурный, 7,4 — темно-пурпурный] и доводят объем водой до 50 мл. [c.25]

НЫМИ катионогенными и анионогенными группами. В отличие от этого кислотный гидролиз сывороточного альбумина приводит к образованию фрагментов, проявляющих иные сорбционные свойства по сравнению со свойствами исходного белка. Анализ взаимодействия белков с ионообменными смолами весьма существен для развития представления о механизме межмолекулярных взаимодействий белков с другими электролитами и полиэлектролитами. Так, например, взаимодействие фермент—субстрат в том случае, когда субстрат является электролитом, также должно определяться и расположением ионогенных заряженных групп в обеих молекулах. [c.196]

Расщепление типа все или ничего наблюдалось также при действии кристаллического трипсина на кристаллический сывороточный альбумин или глобулин или при гидролизе пепсином сывороточного альбумина или фибрина [18]. [c.366]

Щавелевоуксусную кислоту иногда называют катализатором этой реакции. И в предыдущем примере сывороточному альбумину можно приписать роль катализатора в гидролизе АТФ. Важно отметить, что в противоположность обычным катализаторам эти биомолекулы при регенерации (или, точнее, при образовании заново равного количества того же вещества) проходят целые серии точно регулируемых химических превращений. [c.20]

Гидролиз сывороточного альбумина протеазами до аминокислот [c.22]

Были синтезированы конъюгаты сывороточного альбумина человека с аденозиндезаминазой — ферментом, катализирующим гидролиз аденозина с образованием инозина и аммиака. Для регистрации ферментативной активности использовали чувствительный к аммиаку ионселективный электрод. Метод прост и. позволяет определить белок в концентрации 1 мкг/мл. [c.118]

Липолиз (гидролиз) резервных липидов в периферических тканях катализируется гормончувствительной липазой до глицерола и свободных высщих жирных кислот. Наиболее активно этот процесс идет в жировой ткани, которая распространена по всему организму под кожей, в брющной полости, образует жировые прослойки вокруг отдельных органов. Свободные жирные кислоты либо вновь вовлекаются в синтез липидов, либо подвергаются р-окис-лению, либо диффундируют в плазму крови, где связываются с сывороточным альбумином и транспортируются в другие ткани, являясь одним из основных источников энергии. [c.326]

Особый интерес представляет общий метод выделения триптофансодержащих пептидов, разработанный на примере сывороточного альбумина человека и цитохрома с лошади [50]. Остатки триптофана в белках количественно модифицировали с использованием высокоспецифичного реагента, 2,4-динитрофенил-сульфинилхлорида, проводили триптический гидролиз, после чего соответствующие пептиды избирательно извлекали на колонке с фиксированными анти-ДНФ-антителами. Получение сор- [c.416]

Изучение реакции Ы-замещенной изомочевины, конъюгированной сефарозой, с аминами и бычьим сывороточным альбумином [93] помогло понять расхождение между опубликованными данными о стабильности конъюгатов. Соединения, содержащие нуклеофилы, например амины или белки, расщепляют связи изомочевины согласно приведенной выше схеме. Если расщепление связей наблюдается в отсутствие таких соединений, то это происходит, вероятнее всего, благодаря освобождению адсорбированных молекул аффинного лиганда, которые были плохо отмыты. Количество освобождающегося лиганда в результате очень медленного гидролиза изомочевины обычно очень мало и не мешает нормальному процессу аффинной хрохматографии. Как показано в разд. 8.5, отщепление аффинного лиганда от специфического сорбента существенно главным образом в системах с высоким сродством или при выделении небольших количеств вещества. Шнапп и Шалитин [65] предотвращали отщепление аффинных лигандов под действием нуклеофилов после присоединения к сефарозе, активированной бромцианом, путем замены связи изомочевины более устойчивой связью гуанидина, для чего бромцианом активировали носитель, содержащий аминогруппы. [c.189]

Скорость освобождения п-нитрофенола может быть определена путем измерения оптической плотности раствора при 400 нм. Одновременно со связыванием аминокислот или белков на НФОМ-геле имеет место гидролиз п-нитрофениловых эфиров в водной среде в присутствии избытка гидроксил-ионов. На рис. 8.4 показано влияние pH на освобождение п-нитрофенола при связывании фенилаланина на НФОМ-геле. Зависимость от pH эффективности связывания фенилаланина и сывороточного альбумина на НФОМ-гелях иллюстрируется данными табл. 8.6. Очевидно, что наибольшие количества фенилаланина связываются при pH 9. Этот выра- [c.206]

Обработка карбоновых кислот диазосоединениями является обычным методом получения сложных эфиров. При действии диазометана [148] в 85%-ном этаноле происходит частичное метилирование карбоксилов -лактоглобина, а диазоацетамид и метилдиазоацетат [149] этерифицируют карбоксилы сывороточного альбумина человека. Недавно для этих целей стали использовать диазоацетоглицинамид [150—152]. В этом случае при кислотном гидролизе образующегося сложного эфира получают свободный глицин, по избытку которого судят о степени модификации. В рибонуклеазе таким путем не удается модифицировать Asp 14, Asp 38 и Asp 83, вероятно вследствие образования водородных связей с остатками тирозина. [c.365]

АЛЬБУМИНЫ — простейшие представители природных белков, присутствующие во всех растит, и животных тканях в отличие от глобулинов, с к-рыми они составляют группу растворимых белков, растворяются в гюлунасыщенном (50% насыщения) р-ре сернокислого аммония и в дистиллированной воде. Изоэлоктрич. точка А. в пределах pH 4,6—4,8 мол. в. не превышает 75 ООО. Вое А. — глобулярные белки. А. способны к образованию хорошо оформленных кристаллов в электрофоретич. поле А., как правило, могут быть ра.зде.лены на 2 и более комнонептов. А. растворимы в к-тах, щелочах, при нагревании свертываются нри гидролизе образуют различные аминокислоты, для состава к-рых характерно отсутствие или относи 1 ельно низкое содержание глицина (не более 2%). А. богаты серусодержащими и дикарбоно-выми аминокис.потами. В живых тканях А. обычно находятся в виде соединений с липидами, углеводами и др. белками содержатся в белке яиц, сыворотке крови, мо,локе, семенах растений. А. получают из плазмы крови фракционир, осаждением при пизких темп-рах этот препарат широко применяют в медицинской практике, особенно для питания, путем введения в кровь. Кроме того. А, получают также из крови животных (сывороточный А.), отделением белка яиц от желтка (яичный А.), а также из молочной сыворотки при нагревании до 75° (молочный А.). А. применяются в фармацевтич., кондитерской, текстильной и др. отраслях промышленности и для осветления вии. [c.68]

Из табл. 26 следует, что действие фермента наиболее эффективно в отношении субстратов, содержащих более крупные боковые цепи. Ароматические остатки меиее чувствительны относительно медленно гидролизуются амиды аминокислот, имеющих полярные боковые группы. Скорости гидролиза пептидов зависят также от природы аминокислот, примыкающих к N-концевому остатку. В ряде случаев оказалось возможным частично выяснить N-концевую последовательность при подМощи лейцинаминонептидазы. Окисленные А и В-цепи инсулина легко гидролизуются ферментом до свободных аминокислот. Путем кинетического исследования удалось установить последовательность первых шести N-коицевых аминокислот В-цепи инсулина. При помощи лейцинаминопептидазы были получены важные данные об N-концевой последовательности ряда природных пептидов и пептидных фрагментов, полученных из белков. Некоторые белки, например рибонуклеаза, лизоцим, Zn-инсулин и сывороточный альбумин, устойчивы к действию фермента, но легко гидролизуются после окисления надмуравьиной кислотой или после удаления Zn (в случае инсулина). Полное расщепление пептида или белка до аминокислот указывает на L-конфигурацию всех входящих в его состав аминокислот. f [c.183]

Соединение аминокислот друг с другом, приводящее к образованию пептидов или белков, связано с освобождением воды по этой причине синтез подобных соединений должен был бы сопровождаться увеличением, а гидролиз — уменьшением объема раствора (см. гл. III). В соответствии с этим следует ожидать ускорения гидролиза белка под влиянием высокого давления. Вопреки этому недавно появились сообщения о том, что триптический гидролизат сывороточного альбумина под давлением 6 000 атм при 38° превращается в сывороточный альбумин [17] Необходимо отметить, что имеющиеся в литературе сообщения о ферментативном синтезе белков весьма противоречивы и нуждаются в дальнейшей проверке. Истинный ферментативный синтез пептидов был осуществлен Бергманом [18], который получал анилиды аци,паминокислот из ациламинокислот и замещенных анилинов, действуя на них папаином или химотрипсином. Этим способом был получен гиппуриланилид из гиппуриламида и анилина под действием папаина [c.385]

Обсуждая вопрос о реакционной способности белков, нельзя не упомянуть о прочности образующихся связей. Известно много случаев медленного спонтанного отщепления заместителей. Хорошо, известно, например, что формальдегид может связываться с белками как прочной связью, так и обратимо [1]. Росс и Стенли [25] описали даже реактивацию обработанного формалином вируса табачной мозаики после длительного его диализа. Несмотря на то, что некоторые исследователи этот факт не подтвердили [44], другие [45] привели в его пользу достаточные основания. Имеются доказательства того, что при длительном стоянии [34] происходит гидролиз ацетилированных фенольных групп вируса табачной мозаики (но не его фенилуреидопроизвод-ного). Подобным же образом в результате спонтанного гидролиза отщепляются малонильные заместители от фенольных ги-дроксильных групп сывороточного альбумина. [46]. В отличие от природных фосфопротеидов фосфорилированный сывороточный альбумин при стоянии легко претерпевает частичное дефосфори-лирование [47]. Такое поведение производных белка следует всегда учитывать при оценке доли участия реакционноспособных групп в исследуемых процессах. [c.277]

На основании обстоятельного изучения действия электронов с энергией 2 Мэе на твердый бычий сывороточный альбумин в бескислородных условиях Александер и Гамильтон [376] пришли к выводу, что в этом белке имеют место два типа радиационных повреждений во-первых, рас-кручивание молекулы, связанное с разрывом водородных связей, и, во-вторых, химические изменения, определяемые по исчезновению боковых цепей аминокислот и появлению карбонильных групп и групп, из которых при мягком гидролизе отщепляется аммиак. Раскручивание молекулы альбумина под действием излучения можно изучать, измеряя число дисульфидных связей, способных вступать в реакции. Так, в молекуле природного белка в изоэлектрической точке все семнадцать дисульфидных связей находятся в нереакционноспособном состоянии [377]. Если же облучать этот белок, то при увеличении дозы облучения до 50% дисульфидных связей приобретают реакционноспособность. Однако Александер и Гамильтон нашли, что при этом не происходит исчерпывающего образования межмолекулярных поперечных связей — 3 — 3 — за счет окисления сульфгидрильных групп. [c.431]

Для гидролиза белков в мягких условиях было предложено использование твердой ионообменной смолы в присутствии очень разбавленной кислоты. Однако Паульсон и Дитередж [7] обнаружили, что после обработки сывороточного альбумина быка и эдестина пятикратным (по весу) количеством смолы, содержащей группировки сульфоновых кислот (дауэкс-50), и 50—100-кратным количеством 0,05 н. соляной кислоты при 100° остаются значительные количества пептидов, даже если нагревание продолжалось 100 час. Относительные скорости освобождения различных типов аминокислот были сравнимы с величинами, наблюдаемыми при гидролизе более концентрированной соляной кислотой. Однако реакция, особенно на последних стадиях, идет слишком медленно, чтобы гидролиз с дауэксом-50 стал удобным методом получения полных белковых гидролизатов. Эта методика может быть эффективной для более легко гидролизуемых соединений и была использована при определении гексозаминов [8]. [c.122]

Окислительный метод дает надежные результаты с сывороточным альбумином в присутствии 20-кратного по весу количества добавленных углеводов. Для веществ с высоким содержанием углеводов рекомендовано использование увеличенного объема 6 н. соляной кислоты при гидролизе и первоначальное вымывание 0,1 н. хлоруксусной кислотой, чтобы снизить оптическую плотность раствора сравнения в области пика цистеиновой кислоты [108]. [c.148]

Хорошим примером биомолекул, находящихся в динамическом состоянии, могут служить сывороточные белки позвоночных. Их концентрация в крови поддерживается на одном уровне в результате функционирования специфических циклов. Так, сывороточный альбумин образуется в рибосомах клеток печени из аминокислот в ходе хорошо известного процесса синтеза белков, протекающего под контролем ДНК, при участии мРНК и сопровождающегося затратой энергии (2, Б). Эта энергия высвобождается при гидролизе АТФ — универсального агента переноса энергии 6,А). В стационарном состоянии уровень циркулирующего сывороточного альбумина с той же скоростью падает в результате гидролиза протеиназами. [c.20]

Для выделения микоплазм из дыхательных путей к Е-агару (разд. 8.5.17) и Е-бульону (разд. 8.5.18) добавляют ацетат таллия в концентрации 0,032%. Экстракты проб тампоном переносят в жидкую среду (2 мл), содержащую соевую муку и гидролизах казеина (разд. 8.5.45) и 0,5% бычьего сывороточного альбумина. 0,1 мл суспензии инокулируют в двухфазную среду Е (разд. 8.5.17), а также в чашки с агаром, приготовленным на среде Е. Культуру выращивают в аэробных условиях при 37 °С, поместив чашки в закрытые контейнеры. В течение 30 дней с помощью препаровальной лупы (Х20—60) следят за появлением мелких колоний (10— 100 мкм в диаметре), напоминающих яичницу-глазунью. В случае двухфазной культуры наблюдают в микроскоп через боковую стенку пробирки, стараясь обнаружить так называемые сферулы , т. е. колонии в жидкой среде. Контролируют также подкисление среды, сопровождающееся пожелтением индикаторного красителя фенолового красного. Для получения отдельных колоний содержимое двухфазной среды инокулируют в чашки с агаром Е. [c.298]

Реактивация фермента. Прежде всего с помощью гидролиза в мягких условиях снимают ацильные группы модифицированных аминокислот. Раствор белка разбавляют вдвое 0,2 М трис-ацетатным буфером (pH 8,1). При содержании белка <1 мг/мл в раствор добавляют бычий сывороточный альбумин до суммарной концентрации белка 1 мг/мл. Раствор осторожно титруют при комнатной температуре насыщенным (при 23 С, 100%-ное насыщение) сульфатом аммония, подкисленным до pH 2 концентрированной серной кислотой. Белок начинает выпадать в осадок при pH ,6,5. Суспензию выдерживают при pH 4,6 и комнатной температуре в течение 30—60 мин. а затем центрифугируют при 28 ООО и 4 °С в течение 30 мин. Осадок ресуспендируют в охлажденном до 4 X буфере следующего состава 100 мМ калнйфосфат (pH 8,5)+ 10 мМ дитиотрент+0,5 мМ калий ЭДТА+Ю мкМ флавинмононуклеотид. Небольшая примесь бычьего сывороточного альбумина (0,1 мг/мл) способствует растворению осадка. Сульфат аммония удаляют с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 в указанном буфере. Обессоленный образец (1—2 мг/мл) инкубируют в буфере для реактивации при 25 °С. [c.60]

Смотреть страницы где упоминается термин Альбумин сывороточный, гидролиз: [c.612] [c.315] [c.405] [c.219] [c.153] [c.762] [c.98] [c.364] [c.186] [c.196] [c.186] [c.279] [c.363] [c.308] [c.153] [c.353] [c.371] [c.385] [c.68] [c.267]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология