Ферменты концентрация

Рис. 75. Определение истинной константы Михаэлиса в реакции гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-валина, катализируемого а-химотрипсином, при селективном влиянии ионной силы раствора на константу скорости ацилирования фермента. Концентрации КС1 а — 0,1 М 6 — 0,3 М а — 0,5 М г — 0,8 М ( —1,0 М е—1,5 М ж — 2,0 М 3 — 2,7 М

Ряд факторов влияет на скорость ферментативной реакции, и некоторые из них оказывают глубокое влияние таковы концентрации субстрата, концентрация фермента, концентрация ионов водорода или электролита, присутствие активаторов или ингибиторов и температура. , [c.70]

В зависимости от целей эксперимента в каждом конкретном случае выбирается не только определенный тип детергента, но также подбираются оптимальные условия его действия в отношении мембранного фермента (концентрация, время и температура обработки, количество мембранного материала) При выборе оптимально действующей концентрации детергентов следует помнить, что в определенных условиях они склонны к образованию агрегатов — мицелл, эффективность действия которых отличается от эффективности мономерных форм детергентов. Концентрация, выше которой происходит образование ми-целлярной формы детергентов, называется критической концентрацией мицеллообразования (ККМ). Так, для неионного детергента тритона Х-100 (м. м =643 Да) и анионного детергента дезоксихолата натрия (м. м. = 420 Да) величины ККМ соответственно равны 0,24 и 5 мМ. [c.370]

К числу главных факторов, влияющих на скорости ферментативных реакций, относятся концентрация фермента, концентрация [c.178]

Определяют активность фермента, концентрацию белка, измеряют объем фракций [c.52]

Как правило, в случае катализа ионами металлов и ферментами концентрация катализатора мала по сравнению с концентрацией субстратов и концентрация свободного (не связанного в комплекс) субстрата [S] практически не отличается от полной концентрации субстрата S. Тогда [c.264]

Использование ферментного электрода не ограничивается определением продуктов ферментативной реакции. В принципе возможно определение любого вещества, участвующего в этой реакции, в том числе и активности самого фермента, концентраций активаторов и ингибиторов и т.д. [c.58]

Влияние температуры на стабильность ферментов. Фермент (концентрация его в пробе может варьировать в широких пределах) инкубируют в течение определенного интервала времени при серии фиксированных значений температуры (2° С, 20° С, 40° С, 60° С), после чего отбирают пробы для определения активности в стандартных условиях. [c.214]

Из полученной эмпирической модели следует, что главные и квадратичные эффекты наблюдаются для факторов pH, концентрации ФДА и концентрации фермента ЦП. Кроме того, существует статистически значимый эффект взаимодействия факторов концентрации субстрата (ФДА) и фермента (ЦП). С точки зрения аналитической химии это означает, что для определения фермента концентрацию субстрата следует контролировать как можно более строго. [c.509]

В клетках прокариот и эукариот имеются ферменты, концентрация которых не требует добавления индуктора это так называемые конститутивные ферменты. Количество фермента в клетке зависит от наличия продукта реакции, катализируемой данным ферментом, причем продукт реакции вызывает торможение синтеза фермента в результате репрессии (см. далее). [c.153]

Поэтому для определения константы диссоциации комплекса необходимо знать величины к и кх- Определить их можно учитывая, что концентрация субстрата во много раз больше, чем концентрация фермента. Концентрации фермента составляют обычно 10 —10 ° моля. При этих условиях в процессе течения реакции концентрация промежуточного комплекса фермент — субстрат будет практически постоянной, т. е. будет соблюдаться условие стационарности [c.254]

Оптимальная температура ферментативных реакций. Скорость ферментативных реакций возрастает с увеличением температуры так же, как и скорость большинства реакций между ковалентными молекулами, согласно известному закону Вант-Гоффа, а именно возрастание температуры на 10° увеличивает скорость реакции в 1,5—3 раза. Однако этот рост наблюдается лишь при сравнительно низких температурах. Выше определенной оптимальной температуры, при которой скорость максимальна, она уменьшается, а при более высоких температурах реакция прекращается. Это явление объясняется тем, что при более высоких температурах ферменты дезактивируются за счет денатурации белковой компоненты. Большинство ферментов становится совершенно неактивным в интервале 50—80°. Оптимальная температура не может быть точно определена, так как она изменяется в широких пределах с изменением концентрации фермента, концентрации ионов водорода и в зависимости от присутствия различных примесей в ферментативном препарате или субстрате. [c.794]

Для того чтобы из уравнения (3.2) вывести другие зависимости, Грейвс и Ву [3] сделали следующие допущения. Объем геля V включает меньший объем V раствора внутри сетки, построенной полимерными молекулами геля. Перед добавлением раствора фермента концентрация аффинного лиганда, связанного в геле, равна 0 (в молях на объем и), а концентрация фермента равна [c.22]

Откуда следует, что (У—У1)ЦУ—Уо) равно отношению концентрации комплекса фермент — растворимый ингибитор к общей концентрации фермента. Концентрация ингибитора, при которой (У—Уг)/( —Уо)=0,5, равна Ki- Уравнение (4.13) можно записать в другой форме [c.52]

Наоборот, при высоких насыщающих фермент концентрациях, когда [5] Кт, можно считать, что [c.110]

Фермент Концентрация Е, ккал моль РХ рг" РГ /Р2 [c.223]

В технике очистки сточных вод под субстратом подразумевают концентрацию загрязнений по БПК, а под концентрацией фермента — концентрацию ила. [c.376]

Знание скорости реакции как функции концентрации реагирующих молекул часто дает важные сведения о числе молекул, вступающих в реакцию (о порядке реакции). Желательно иметь возможность судить о влиянии на скорость реакции изменения температуры, концентрации ферментов, концентрации ионов водорода и т. п. Праг вильное определение и выражение скоростей реакции имеет поэтому фундаментальное значение. [c.53]

Ферментный электрод можно использовать для определения концентрации не только продуктов ферментативной реакции, но любого участвующего в этой реакции вещества, что особенно важно для многостадийных реакций, а также для определения активности фермента, концентраций его ингибиторов и активаторов. Применение ферментных электродов существенно расширило рамки ионометрии, позволив определять концентрацию недиссоциированных соединений и проводить анализ водных растворов многих органических соединений. [c.127]

Ферменты ускоряют биологические реакции, снижая энергию активации, не изменяя положения равновесия. Механизм их действия состоит в образовании комплекса фермента с субстратом, который вступает в реакцию, после чего комплекс распадается с образованием исходного фермента и продукта. Скорости реакций, катализируемых ферментами, зависят от активности или количества фермента, концентрации субстрата, pH и состава раствора, температуры, присутствия активаторов и ингибиторов. [c.539]

Скорость биохимических реакций, которая определяется по изменению концентрации реагирующих или образовавшихся веществ в единицу времени, зависит от активности ферментов и условий протекания реакции. Каждый фермент имеет свои оптимальные условия проявления активности. Оптимальными считаются условия, при которых ферментативная реакция протекает с максимальной скоростью. На скорость ферментативных реакций влияют количество фермента концентрация субстрата активная реакция среды (pH) температура присутствие активаторов и ингибиторов. [c.99]

Возникает вопрос, почему именно концентрация водородных ионов оказывает влияние на действие ферментов Имеется основание полагать, что ферменты наиболее активны в изоэлектрическом состоянии, т. е. когда их частички имеют суммарный электрический заряд, равный нулю, и не передвигаются в электрическом поле ни к аноду, ни к катоду. Установлено, что оптимальная для действия фермента концентрация водородных ионов соответствует наименьшей подвижности фермента в электрическом поле. Явно выраженная чувствительность ферментов к концентрации водородных ионов является одним из характерных их свойств. [c.170]

Рис. 3-54. При увеличении концентрации субстрата скорость ферментативной реакции V увеличивается до тех пор, пока не достигнет максимального значения Углах. Происходит это при такой концентрации субстрата, при которой уже не остается незанятых молекул фермента, и скорость реакции лимитируется скоростью каталитического процесса на поверхности фермента. Для большинства ферментов концентрация субстрата, при которой скорость реакции составляет половину максимальной К , отражает прочность связывания субстрата с ферментом. Большие

Модель 2. Представим себе клетку в виде трубы длиной I, сечением а, заполненную раствором фермента концентрации Ед. Пусть на одном конце трубки поддерживается постоянная концентрация субстрата 5 , а на втором конце концентрация субстрата 5). Примем, как и раньше, что скорость превращения субстрата в продукт задается формулой Михаэлиса — Ментен [c.79]

Может возникнуть сомнение в правильности приведенных оценок — там были заданы в качестве самых низких концентраций ферментов порядка 10 М. Казалось бы можно совершенствовать работу каждой молекулы фермента, увеличивать кг, еще сильнее уменьшая концентрацию фермента. Оказывается — нельзя. Предельно низкая концентрация ферментов определяется малыми размерами клеток. В самом деле в клетке не может быть меньше одной молекулы данного фермента. Одной молекулы, конечно, мало — ненадежно. Легко вычислить, что при характерных размерах клетки 10 -10 см и наличии в ней 10 — 10 молекул данного фермента, концентрации ферментов не могут быть ниже 10 —10 М. [c.81]

Параметр К/л.каж служит характеристикой сродства фермента к субстрату и, следовательно, является мерой той концентрации субстрата, которая необходима для насыщения фермента. При катализе иммобилизованными ферментами концентрация субстрата вблизи фермента (локальная) может отличаться от концентрации субстрата во всем объеме системы. В этом случае наблюдаемая на опыте /См.каж должна зависеть от распределения субстрата между свободным раствором и носителем, где сосредоточен фермент. Что касается параметра к ат, то он характеризует реакционную способность уже образовавшегося фермент—субстратного комплекса, поэтому не зависит от распределения субстрата в системе, а определяется состоянием, в первую очередь, конформацией самого фермента. [c.98]

Биоэлектрокатализ открывает новые возможности в изучении действия биокатализаторов. Электрохимические методы позволяют выяснить тонкие детали молекулярных механизмов действия ферментов. Экспериментальное исследование зависимостей тока от потенциала, концентрации фермента, концентрации ионов водорода и субстратов с последующим анализом на основе теории электрохимической кинетики помогает выявить механизм превращений субстрата в активном центре фермента. Например, исследование кинетики действия медьсодержащей оксидазы, иммобилизованной на электроде, показывает, что наиболее вероятный механизм действия активного центра включает стадию присоединения кислорода, быстрый равновесный перенос одного электрона, двух протонов и синхронный замедленный перенос двух электронов на лимитирующей стадии процесса. Кинетическое исследование с привлечением структурных данных дает представление о молекулярном механизме действия оксидазы. [c.69]

Скорость ферментативной реакции измеряется количеством субстрата, расщепившегося в единицу времени. На скорость фер1ментативной реакции оказывает влияние ряд факторов, как, например, концентрация фермента, концентрация субстрата, накопление продуктов расщепления, pH среды, присутствие активаторов и парализаторов, температура. [c.145]

Хотя оба способа имеют определенные недостатки, предпочтение все же следует отдать ферментативным методам. Из факторов, влияющих на действие фермента (концентрация фермента в растворе, температура, pH и др.), в первую очередь следует учитывать влияние фиксации на ткань. [c.101]

Из анализа данных, приведенных на фиг. 79, а также из ряда других данных следует вывод, что в карбоксипептидазе координационные связи образуются сульфгидрильной группой цисте-инового остатка и аминогруппой. Из металлов, обычно встречающихся в биологических системах, карбоксипептидаза наиболее сильно связывает цинк и, по-видимому, именно поэтому относится к классу цинксодержащих ферментов. Концентрация ионов цинка особенно велика в поджелудочной железе, где происходит синтез карбоксипептидазы. Исходя из сравнительно высокой константы стабильности связи цинка с сульфгидрид-ной группой, можно ожидать, что цинк связан с серой и в других цинксодержащих белках судя по всему, это так и есть. Замещение иона цинка в карбоксипептидазе на ион другого двухвалентного металла часто дает активный металлсодержащий фермент, активность которого иногда превосходит активность нативного, цинксодержащего фермента. [c.413]

Из всех тех факторов, от которых зависит определение активности фермента — концентрация фермента и субстрата, температура, pH и присутствие ингибиторов,— наибольший клинический интерес представляют последние три. Активность ферментов растет с повышением температуры, поэтому скорость метаболических процессов значительно повышается при лихорадке. Если температура в конце концов не понизится, последствия будут фатальны. С другой стороны, понижение температуры тела (гипотермия)— и, следовательно, понижение активности большинства ферментов—весьма полезно в тех случаях, когда требуется снизить общие метаболические потребности (например, при операции на сердце или транспортировке органов для трансплантационной хирургии). Кардинальным биологическим принципом является гомеостаз — поддержание внутренней среды организма в состоянии, максимально близком к норме. Активность многих ферментов и белков изменяется даже при сравнительно небольших изменениях pH. Большинство лекарственных препаратов оказывает свое действие, влияя на соответствующие ферментативные реакции. Многие такие препараты сходны с природными субстратами и потому могут действовать как конкурентные ингибиторы ферментов. Чтобы понять многие процессы, которые существенны для фармакологии и токсико- [c.76]

Схема (10.28) может быть интерпретирована таким образом, что субстрат при связывании индуцирует каталитически неаетивное конформационное состояние фермента, концентрация которого регулируется ионотенной группой с константой диссоциации К ь- [c.243]

АНТИФЕРМЁНТНЫЕ СРЕДСТВА (ингибиторы ферментов), подавляют активность ферментов и увеличивают в результате концентрацию их субстратов в организме. Специфичные А.с.-в-ва белковой природы, взаимодействующие только с определенными ферментами. Механизм этого взаимодействия м, б. конкурентным и неконкурентным. В первом случае препарат связывается с тем же активным центром фермента, что и субстрат. Последний, накапливаясь, начинает реактивировать фермент, вытесняя ингибитор. При неконкурентном механизме препарат фиксируется аллостерич. рецептором и для восстановления ф-цин фермента концентрация субстрата значения не имеет. [c.183]

Таким образом, синергизм между эндо- и экзодеполимеразами при действии на полисахаридный субстрат зависит от ряда факторов особенностей действия (специфичности) ферментов, концентрации и степени полимеризации субстрата, соотношения активностей компонентов ферментной системы и проявляется в заметной степени только при определенных условиях [115-117]. [c.78]

В случае достаточного избытка субстратов над ферментом концентрация трехкомпонентного комплекса может быть выражена через полную концентрацию фермента, полные концентрации субстратов 81 и 82, кинетические параметры, условия материального баланса по всем трем ферментным формам Е, ЕЗ и 8182 и условия квазистационарности по промежуточным комплексам Е81 и Е8182 [c.212]

Рассчитывают удельную активность фермента. Для этого надо знать содержание ферментного препарата в 1 мл пробы и концентрацию белка в нем. Так, если в 4 мл пробы содержится 0,4 мл ферментного препарата, то в 1 мл пробы — 0,1 мл фермента. Концентрацию белка в ферментном препарате определяют заранее биуретовым методом или пользуются готовым результатом. Например, концентрация белка в ферментном препарате [c.48]

Теоретически выведенная взаимосвязь между количеством сорбируемого фермента, концентрацией аффинного лиганда и константами равновесия лиганд — фермент рассмотрена в гл. 3. Из рис. 3.3 следует, что для систем с низким сродством Кь = = 10 2 моль/л) концентрация привязанного аффинного лиганда представляет собой критический параметр для получения эффективного сорбента. На рис. 5.6 показана аффинная хроматография глюкокиназы на 2-амино-2-дезокси-о-глюкопиранозо-N-(6-амино-гексаноил) —сефарозе при четырех концентрациях связанного аффинанта [15]. Видно, что оптимальная концентрация аффинного лиганда равна 3,75 мкмоль/г (рис. 5.6,6) при более низких концентрациях фермент не отделяется от неактивного материала, в то время как при более высоких концентрациях необходимо увеличить концентрацию глюкозы в элюате и при этом глюкокиназа выходит в большем объеме элюата. При концентрации 10 мкмоль/г глюкокиназа не может быть элюирована даже при высоких концентрациях глюкозы она может быть снята только пропусканием 0,5 М хлорида калия. [c.75]

Подобным образом Нишикава и др. [24] сопоставили гели, содержащие различные концентрации аффинанта, с учетом распределения лиганда в геле и рассмотрели как емкости по ферменту на единицу геля, так и аффинности гелей к ферменту. Концентрация лигандов в геле влияет на оба эти свойства, но не в одинаковой степени. Гранулы геля с высокой концентрацией аффинанта обладают высоким сродством и соответственно высокой емкостью в колонке. Если гель разбавить немодифицированной агарозой, концентрация лиганда внутри геля в модифицированных [c.77]

Конечно, совсем по-иному должно обстоять дело с конститутивными ферментами, разлагающими глюкозу. Эта ферментная система работает очень интенсивно, и концентрация ферментов должна здесь постоянно поддерживаться на очень высоком уровне. Тем не менее она не бывает слишком высокой. Возможности регуляции здесь следующие. Во-первых, индуктор и корепрессор могут быть родственны друг другу, т. е. либо индуктор возникает из корепрессора (или наоборот), либо индуктор и корепрессор образуются одновременно, на одной предшествующей стадии. Во-вторых, между индуктором и корепрессором может устанавливаться постоянное количественное соотношение (нечто подобное известно в органической химии), которое как раз таково, чтобы отдача информации опероном все время держалась на постоянном (высоком) уровне. Однако все это, собственно говоря, домыслы, лишенные экспериментального подтверждения. Возможно, в действительности все выглядит совершенно иначе. Но одно кажется совершенно ясным наше разделение ферментов на регулируемые и нерегулируемые (конститутивные) не вполне правильно. Лучше было бы говорить о ферментах, концентрация которых стабильно поддерживается на каком-то постоянном, весьма низком (нанример, ферменты биосинтеза коферментов) или высоком уровне (например, ферменты разложения глюкозы), и о ферментах, концентрация которых может сильно варьировать, т. е. быть очень высокой или нулевой в зависимости от требований (синтез аминокислот — регуляция посредством репрессии распад лактозы — регуляция посредством индукции). Поскольку нам важно, чтобы читатель хорошо усвоил принцип регуляции, попробуем кратко резюмировать все то, что мы рассказали. Итак, регуляция осуществляется посредством репрессоров, имеющих двойную (аллостерия) специфичность во-нервых, в отношении генов-операторов, находящихся в геноме, и, во-вторых, в отношении определенных малых молекул (корепрес-соров или индукторов), находящихся в цитоплазме. К. Брэш в своей книге Классическая и молекулярная генетика так хорошо описал все эти механизмы, что лучше всего привести здесь его собственные слова [c.287]

Рис. 54. Изменение фоточувствительности ЛДГ в присутствии азвда натрия (а), р-каротина и В-маннита (<5), гастидина (в). По оси абс1щсс — концентрации модификаторов, моль/л по оси ординат — ферментативная активность, %. — активность наттного фермента, — УФ-облу-ченного фермента. Концентрации модификаторов а) / — 6,640 моль/л

Превращение субстрата начинается сразу после того, как он вступает в контакт с ферментом. Концентрация субстрата в данной точке геля зависит как от скорости проникновения субстрата в гель, так и от скорости ферментативной реакции. Не-прореагировавшие молекулы субстрата диффундируют в более глубокие слои геля и благодаря высокой концентрации фермента подвергаются быстрому превращению. Следует также иметь в виду, что субстрат может достигать зоны данного фермента, двигаясь не только в направлении, перпендикулярном поверхности геля, но и параллельно ей. Кроме того, во время инкубации молекулы фермента не фиксированы в геле и могут диффундировать из зоны, сформировавшейся во время электрофо-реза. Перечисленные эффекты служат причиной образования каймы по краям зоны, содержащей фермент, что может приводить к ошибкам при денситометрии. Проблемы количественного анализа энзимограмм рассматриваются в обзоре Виме [1420]. [c.282]

В дополнение к традиционным внутриклеточным системам кальциевых насосов эндоплазматической сети и митохондрий, свойственным животным клеткам, зрелые расЛтельные клетки содержат также крупную Са-аккумулирующую органеллу — центральную вакуоль, занимающую от 10 до 90% клеточного пространства. В вакуолях запасаются ионы, сахара, органические кислоты и гидролитические ферменты. Концентрация Са + в вакуоли может достигать нескольких миллимолей на 1 л. Хотя в пластидах концентрация Са + еще выше (до 15 ммоль/л), очевидно, что из-за большого объема именно центральная вакуоль осуществляет функцию аккумуляции и хранения основной части клеточного Са . Большая часть Са2+, сосредоточенного в центральной вакуоли, не может мобилизоваться и поступать в цитоплазму ввиду того, что в вакуоли высока концентрация оксалата, с которым Са + образует малорастворимый комплекс. [c.107]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология