Репликативные формы вирусной ДНК

Двухцепочечный комплекс, построенный из исходной (- -)-цепи вирусной РНК и комплементарной к ней (—)-цепи РНК, синтезирующейся в организме хозяина при вирусной инфекции, является промежуточным продуктом при воспроизведении вируса в клетке ( репликативная форма ). Для такого комплекса характерна устойчивость к действию небольших концентраций РНК-азы, он может быть выделен и отделен от других форм РНК с помощью центрифугирования в градиенте плотности или хроматографии на МАК (см., например,121). [c.37]

На молекулах репликативной формы ДНК происходит синтез не только (+)цепей ДНК, но и вирус-специфических мРНК- Следует сказать, что синтез мРН К должен предшествовать появлению новых молекул (+)цепей ДНК, так как без вирус-специфических мРНК в зараженной клетке не может появиться белок А. Трансляция фаговых мРНК приводит к накоплению вирус-специфических белков, в том числе и структурных, которые — при достаточной концентрации — начинают превращаться в сложные структуры— предшественники вирусного капсида. Генерируемые на этой стадии (+)кольца в результате специфических взаимодействий с белками фага вовлекаются в процесс сборки вириона. Тем самым предотвращается ставший уже ненужным переход -Ь)цепей в репликативную фор.му. [c.274]

Удобно расчленить раунд репликации ДНК на три стадии 1) переход родительского генома в репликативную форму 2) собственно репликация репликативной формы и 3) переход репликативной формы в зрелый дочерний геном. Рассмотрим несколько вирусных систем, у которых синтез ДНК осуществляется при участии двухнитевых кольцевых молекул (рнс, 148), Такие кольца — репликативные формы — могут возникать несколькими способа.ми путем синтеза комплементарной цепи на однонитевой кольцевой матрице (фаг с( Х174), в результате спаривания липких концов, (фаги Р2, Р4), в результате сайт-специфической (фаг Р1) илн общей (фаг Р22) внутримолекулярной peкo.vlбинaцни. между концевыми повторами и т. д. Наконец, в форме двухнитевого кольца [c.280]

Известно, что для инициации процесса репликации ДНК фага ФХ необходимо наличие в геноме фага специфического гена А. Недавно было показано, что этот ген детерминирует синтез белка с мол. весом 56 000 — специфической эндонуклеазы надрезающей вирусную цепь RF-формы, что необходимо для начала процесса репликации [209]. По-видимому, после появления такого разрыва стимулируется синтез небольшого участка РНК-затравки. Репликация ДНК протекает в большинстве случаев в двух направлениях (разд. Д,2), однако репликативная форма Ф X образуется, вероятно, только в одном направлении по механизму разматывающегося рулона (rolling ir le) [210]. В соответствии с этим механизмом [уравнение (15-9)], по мере того как вновь образующаяся цепь вирусной ДНК синтезируется вдоль комплементарной (минус) цепи-матрицы, исходная вирусная ДНК (плюс-цепь) вытеснется в виде одноцепочечного хвоста . [c.278]

Репликативная форма, РФ (Repli ative form) Промежуточная форма двухцепочечной вирусной нуклеиновой кислоты, служащая матрицей для синтеза ДНК и РНК. Представляет собой релаксированное (открытое) кольцо. [c.558]

Хроматографию на гидроксиапатите не применяют для выделения высокомолекулярной рРНК, поскольку при этом наблюдается деградация полимера [172] однако репликативные формы РНК и промежуточные формы, похожие в структурном отношении на ДНК, можно фракционировать на гидроксиапатите [71]. Тем не менее, несмотря на детальные исследования процессов фракционирования различных тРНК, вирусной РНК и полинуклеотидов [67], хроматография РНК на гидроксиапатите не нашла широкого применения. [c.84]

Кольцевая форма вирусной ДНК обнаружена также у двухцепочечной репликативной формы бактериофага ф Х174 (стр. 215), ДНК бактериофага % (стр. 161) и ДНК вируса нолиомы, которая существует и в виде кольца и в форме прямой цепи (49—51, 84). В последнем случае обе формы состоят из двойной цепи и обе они инфекционны. Кольцевую структуру можно наблюдать при помощи электронного микроскопа. Предполагается, что кольцевую форму имеет также ДНК бактериофага Т2 (стр. 157) [87]. [c.72]

В процессе размножения вируса в организме хозяина происходит отделение вирусного белка от РНК [28, 29]. При заражении растительной клетки свободной РНК синтез вируса в ней начинается раньше, чем после заражения интактным вирусом. Сначала размножается РНК вируса, претерпевающая превращение в двух-цепочечпую репликативную форму (стр. 250) [144, 145]. Затем под контролем РНК начинается образование вирусного белка и наконец белок и РНК соединяются, формируя полный вирус [51, 53]. [c.154]

В Е. oli, зараженной фагом MS2, специфичная РНК-зависимая РНК-полимераза (РНК-синтетаза) появляется вскоре после заражения и достигает максимума через 30—45 мин. Эта полимераза была выделена в очищенном виде из экстрактов зараженных клеток и отделена от ДНК-зависимой РНК-полимеразы и от полинуклеотидфосфорилазы [142, 171—173]. В очищенной форме она представляет собой голофермент, тесно связанный со своей природной матрицей, двухцепочечной репликативной формой РНК фага MS2. Этот голофермент синтезирует in vitro вирусную РНК фага MS2 тина родительской в присутствии четырех рибонуклеозид- [c.249]

На основании приведенных данных Очоа и его сотрудники [172, 173] пришли к выводу, что репликация вирусной РНК родительского типа ( плюс цепь) происходит в два этапа. На первом этапе внедряющаяся цепь вирусной РНК действует как т-РНК (стр. 271), т. е. вступает в контакт с рибосомами клетки-хозяина и контролирует образование РНК-зависимой полимеразы и синтез белков вирусной оболочки. С помощью полимеразы на <шлюс -цепи, действующей как матрица, образуются комплементарные минус -цепи, и в результате происходит образование двухцепочечной репликативной формы РНК. [c.250]

Из клеток, зараженных фагом ФХ174, наряду с одноцепочечной ДНК, присутствующей в вирусных частицах, можно с помощью центрифугирования в градиенте плотности и хроматографией на МАК получить двухцепочечный комплекс ДНК с вдвое большим молекулярным весом зэ — так называемую репликативную форму ДНК фага ФХ174. Присутствие в зараженной вирусом клетке форм вирусной ДНК, отличающихся по своей структуре от ДНК вирусных частиц, показано и для многих других вирусов. [c.32]

Репликативная форма РНК — один из типов макромолекулярной организации РНК с полностью двухспиральным строением. Репликативные формы РНК обнаружены в вирусах полиомиелита, сендай и энцефаломиокардита. Анализ комплементар-вости пар азотистых оснований в таких РНК, устойчивость к действию панкреатической РНК-азы, характер тепловой денатурации, отсутствие реакции с формальдегидом и рентгеновская дифракция — все подтверждает двухспиральное их строение. Репликация вирусных РНК проходит через стадию образования двухцепочечной репликативной формы. [c.73]

На первом этапе синтеза вирусной РНК происходит образование двухцепочечной репликативной формы РНК из одноцепочечной вирусной РНК -. В этой РНК одна из цепей идентична исходной вирусной РНК (Ч--цеиь), а другая комплементарна ей (—цепь). Матрицей в реакции служит —цепь репликативной РНК, следовательно, синтезируется - --цепь, т. е. синтез РНК прн участии РНК-синтетазы является комплементарным. Он осуществляется по полуконсервативному пути, когда происходит непрерывная замена одной цепи на другую. [c.445]

Трудности, связанные с выделением такого рода ферментов в свободном от нуклеаз виде, впервые были преодолены Харуной и Спигелманом в 1965 г. [186, 187, 464]. (Освобождение от нуклеаз весьма существенно, так как они вызывают деградацию продукта.) После этого, наконец, стало возможным наблюдать репликацию вирусной РНК in vitro и выделить РНК, принадлежащую потомству. Оказалось, что по своим физическим и химическим свойствам она не отличается от родительской РНК, использованной в качестве матрицы. Но самое важное заключалось в том, что вновь синтезированная РНК обладала инфекционностью (фиг. 58). Теперь уже ясно, что ни (—)-цепь, ни двухцепочечная репликативная форма [c.238]

В 1978 г. было опубликовано две работы [21, 38], показавшие, каким образом с помощью олигонуклеотидов можно осуществлять прецизионные изменения в структуре ДНК. В обеих работах мутациям подвергался геном бактериофага ФХ174. В зрелом вирусе ДНК этого фага находится в одноцепочечной форме, но при инфицировании перед образованием новых фагов превращается в двухцепочечную, или репликативную, форму (RF). Авторы [21, 38] использовали синтетические олигонуклеотиды, комплементарные к вирусной ( + ) цепи, в качестве праймеров для синтеза in vitro [c.102]

Скорость роста заражежых клеток на 25-50 % ниже, чем неинфицированных. Поэтому при титровании нитевидные фаги образуют на бактериальном газоне мутные бляшки. При размножении нитевидных фагов в бактериальной клетке их геном одновременно присутствует в виде большого числа копий двухцепочечной кольцевой плазмиды и одноцепочечной ДНК в составе вирионов. Из одного литра инфицированной культуры получают несколько миллиграммов одноцепочечной и репликативной двухцепочечной форм фаговой ДНК. На одноцепочечной вирионной ДНК многие манипуляции по созданию гибридных молекул, разработанные для вирусных и плазмидных двухцепочечных ДНК, реализовать нельзя. Однако они с успехом применимы к репликативной форме генома нитевидных фагов, которая инфекцион-на в тесте трансфекции клеток Е. oli. Все это обусловило использование нитевидных фагов для создания клонирующих векторов. [c.111]

ДНК (рис. 2.33). Субстратной матрицей в этом случае является двухцепочечная кольцевая ДНК, которая была репшщирована после превращения на ранних этапах инфекции линейной вирусной ДНК в кольцевую репликативную форму. Для того чтобы образовалась линейная ДНК потомства, двухцепочечные кольца надрезаются и асимметрично реплицируются, как это происходит в случае ДНК фагов М13 и фХ174. Однако отделяющиеся одиночные цепи превращаются в двухцепочечные структуры. Сначала во множестве сайтов вдоль одиночной цепи [c.90]

РИС. 2-23. А. Двойная спираль ДНК В-форма. (Arnott S., Hukins D. W. L.. JMB, 81, 93—105, 1975.) Б. Электронная микрофотография молекулы ДНК бактериального вируса (бактериофаг Т7) в момент ее репликации. Вирусная ДНК представляет собой длинный ( 14 мкм) дуплексный стержень, содержащий около 40 000 пар оснований. Виден небольшой репликативный глаз — участок, где происходит удвоение ДНК. Синтез ДНК начинается в особой точке (точке инициации), расположенной иа расстоянии, равном 17% длины молекулы, от одного из концов дуплекса. Окраска уранилацетатом негативное контрастирование. (С любезного разрешения Т. Wolfson [c.131]

У фага MS2 молекулярный вес частиц составляет 3,6-10 содерллание РНК — 31 % РНК находится в нем в виде компактной структуры с большим количеством водородных связей эта РНК инфекционна для бактериальных протопластов. РНК-содержащие фаги представляют значительный интерес для изучения репликации РНК в связи с образованием двухцепочечных молекул РНК (стр. 59) [136—139, 144]. Возможно, что при внедрении РНК-содержащего вируса в клетку РНК играет роль матрицы (стр. 271) для синтеза РНК-зависимой РНК-полимеразы (стр. 246) и белка вирусной оболочки. Образовавшаяся в результате полимераза синтезирует затем комплементарную цепь РНК, приводя к образованию двухцепочечной репликативной РНК. На этой синтезированной полимеразой комплементарной цепи двухцепочечной формы по,лимераза образует новые цепи вирусной РНК. К этому процессу мы еще вернемся в гл. XII (стр. 249). [c.161]

Ретровирусы представляют семейство РНК-содержащих вирусов, репликативный цикл которых отличается тем, что вирусный РНК-геном транскрибируется в ДНК-форму эту функцию обеспечивает обратная транскриптаза —фермент, кодируемый вирусным геномом. Жизненный цикл типичного ретровируса, такого, например, как вирус лейкоза мышей (МЬУ), показан в упрощенном виде на рис. 9.1. Вирусные частицы, каждая из которых содержит две копии одноцепочечного РНК-генома, образованы центральным нуклеопротеиновым кором, окруженным мембраной, которая несет на своей наружной поверхности специфическую оболочку из гликопротеинов. Инфицирование [c.274]

В ходе дальнейшего синтеза плюс-РНК образуются многоцепочечные репликативные промежуточные формы (РПФ) с poly (А) на З -конце, которая синтезируется на матрице poly(U) РПФ. Последняя связывается с гладким эндоплазматическим ретикулумом (этап 4), и синтезируется все большее количество плюс-РНК, при участии которой затем осуществляется трансляция (этап 5) и синтезируются минус-цепи РНК. По мере увеличения концентрации вирусных белков происходит упаковка плюс-РНК в вирионы (этап 7). [c.212]

Смотреть страницы где упоминается термин Репликативные формы вирусной ДНК: [c.269] [c.64] [c.191] [c.345] [c.269] [c.282] [c.206] [c.277] [c.274] [c.282] [c.495] [c.92] [c.868] [c.426] [c.379] [c.61] [c.190] [c.347] [c.17] [c.89] [c.139]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология