Флуорескамин

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

Флуорескамин и о-фталевый альдегид могут быть использованы для количественного определения белков и пептидов. При работе с флуорескамином белки открываются в количестве 0,05—0,5 мкг. [c.130]

Проявление флуорескамином. Помимо нингидрина для проявления аминокислот в настоящее время используют реагенты, дающие с аминокислотами пептидами и белками флуоресцирующие [c.129]

Белки 280 Флуорескамин Ацетонитрил - вода -СРзСООН, пиридин муравьиная кислота [c.251]

Амино- кислоты Флуорескамин 275 370 Ци ратные буферные растворы. [c.261]

Идентификация аминокислот производится в больщинстве случаев с помощью окращенных или флуоресцирующих производных или с помощью радиоактивных реагентов [118]. Особенно важными являются реакции с нингидрином и флуорескамином. [c.56]

В результате реакции первичного амина с флуорескамином (см. разд. Аминокислоты ) образуются соединения, дающие пятна с сильной флуоресценцией в УФ-свете (чувствительность 1 нмоль). [c.382]

УФ-свет. См. Аминокислоты , разд. 4. УФ-спектроскопия используется для пептидов со свободными аминогруппами. Следует избегать нагревания, так как некоторые пептиды впоследствии невозможно выделить с хорошими выходами. Опрыскивание флуорескамином ( Аминокислоты , разд. 2) дает возможность в УФ-свете с большой чувствительностью локализовать пептиды со свободными аминогруппами. [c.395]

Для повышения чувствительности вместо нингидрина в ряде анализаторов применяют флуорескамин или о-фталевый альдегид. [c.36]

При проявлении флуорескамином высушенную хроматограмму погружают в 3—5%-ный раствор пиридина в безводном ацетоне - . Высушивают 5 мин на воздухе. Затем ее опрыскивают из пульверизатора 0,001—0,005%-ным раствором флуорескамина в безводном ацетоне. Основной раствор флуорескамина (2 мг/мл безводного ацетона) может храниться при 4°С в течение нескольких месяцев. Рабочий раствор флуорескамина готовят из основного раствора к 80 мл сухого ацетона добавляют 0,4 мл основного раствора. Продукт реакции имеет [c.130]

Для определения белков с помощью флуорескамина к анализируемому препарату, растворенному в 2 мл 0,05 М калий-фосфатного буфера (pH 7), добавляют 10 мкл ацетонового раствора флуорескамин [c.130]

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой. [c.191]

Некоторые нефлуоресцирующие соединения разделяют в виде производных с флуорогенными веществами. Производные получают до хроматографического разделения или после, вводя реагент в Т-образное устройство между колонкой и детектором. Амины и фенолы образуют диазильные производные при взаимодействии с 5-диметил-амино-1-нафтилсульфохлоридом до разделения, а аминокислоты после разделения обрабатывают флуорескамином. [c.155]

Флуорескамин. Чувствительный реагент для определения липидов, содержащих свободные аминогруппы. Хроматограмму опрыскивают 0,5 %-ным раствором флуорескамина в ацетоне. Для выявления флуоресцирующих пятен пластинку наблюдают в УФ-свете. [c.407]

Нуклеотиды, как и многие другие поглощающие свет соединения, определяют количественно по их спектрам поглощения (рис. 13-11 и 13-12) 146]. Еще более чувствительным методом является флуоресцентный анализ. Например, он позволяет обнаружить на тонкослойной хроматограмме рибофлавин в количестве 3 пикомоль (1 нг) (рис. 2-34) [147]. Один из новых реагентов, флуорескамин, взаимодействует с любым первичным амином, образуя интенсивно флуоресцирующие продукты. С его помощью можно обнаружить очень малые количества аминокислот— менее 50 пикомолей (рис. 2-36) [148]. [c.180]

При определении очень малых количеств аминокислот применяют проявление ТХ-пластинки флуорескамином [раствор 10 мг флуорескамина в смеси аиетон/гексан (1 4)] [145]. После элюирования подходящим растворителем наблюдают флуоресценцию при 366 нм. Предел обнаружения метода при проявлении с помощью производного флуорескамина 10 пмоль. [c.58]

Флуорескамин. Хроматограмму опрыскивют 0,05%-ным раствором флуорескамина в ацетоне далее вымачивают последовательно в 0,1 М уксусной кислоте в ацетоне, а затем в 0,1 М растворе N-хлоросукцинимида в ацетоне оставляют на 5 мин промываться в ацетоне и нагревают при 110°С 5 ч-10 мин. Вторичные амины превращаются в первичные амины, которые реагируют с флуорескамином и флуоресцируют в УФ-свете (очень чувствительный метод). [c.383]

Флуорескамин. Этот реагент реагирует с первичными аминогруппами аминокислот и пептидов. Хроматограмму опрыскивают 0,05%-ным раствором флуорескамина в ацетоне и наблюдают флуоресцирующие пятеа. Предварительное и последующее опрыскивание хроматограммы 10%-ным раствором триэтиламина в метиленхлориде повышает чувствт ельность методики (1 нмоль), а также устойчивость образующихся флуоресцирующих пятен. Пятна пролина и гидроксипролина медленно проявляются при нагревании в течение 3 ч при 110°С или через два дня при комнатной температуре. В другом варианте методики бумагу или пластинку, обработанную флуорескамином, вымачивают последовательно в 0,1 М растворе уксусной кислоты в ацетоне и 0,1 М растворе Ы-хлоросукцинимида в ацетоне. Выдерживают 5 мин, промывают ацетоном и нагревают 5-10 мин при 110°С. [c.390]

Было обнаружено, что нингидрин может образовывать сильно флуоресцирующие продукты с соединениями, содержащими аминогруппу [70, 71]. Чувствительность метода, основанного на измерении флуоресценции, выше в 10—100 раз. Фенилаланин в реакции с нингидрином образует фенилацетальдегид, который реагирует с избыточным нингидрином и первичным амином, образуя сильно флуоресцирующий продукт. Было установлено строение этого продукта [72] и на основе этого исследования был синтезирован новый реагент [73]. Это 4-фенилспиро [фуран-2(ЗН), Г-фталан]ДИОН-3,3, получивший название флуорескамина, зеагирует с первичными аминами непосредственно, образуя такие же флуоресцирующие соединения (возбуждение при 390 нм, излучение при 475 нм), как и при реакции нингидрина с фенилаце- [c.486]

Флуорескамин. Растворяют 100 мг флуорескамина в 100 мл безводного ацетона (ч), перед применением раствор выдерживают 24 ч при комнатной темпе-ратуре. [c.487]

Пробу растворяют в метаноле или в воде. В пробирку емкостью 15 мл вносят аликвотную часть раствора (0,1 мл), эквивалентную 10 мкг соединений, 15 мл буферной смеси и перемешивают. Затем прибавляют 0,1 мл раствора флуорескамина (100 мкг флуорескамина) снова перемешивают, выдерживают 15 мйн и измеряют интенсивность флуоресценции с помощью спектрофотометра. При необходимости раствор разбавляют, чтобы отсчет показаний прибора был в пределах шкалы. [c.487]

Сам флуорескамин и продукты его гидролиза не флуоресцируют, поэтому они не мешают количественному определению продуктов реакции. Данные табл. 11.54 иллюстрируют применимость флуорескамина для определения различных первичных ароматических и алифатических аминов. [c.487]

Под действием галогенирующих реагентов вторичные аминокислоты подвергаются окислительному декарбоксилированию с образованием иминов, которые гидролизуются в первичные амины. Таким образом, с помощью флуорескамина можно определять и вторичные аминокислоты [75]. В качестве галогенирую-щего агента для пролина служил N-хлорсукцинимид аликвотную часть 1,0 мл 4 10 — 4 10 М раствора пролина или соответственно гидроксипролина смешивали при pH = 2 с 1 мл 4-10 М водного раствора хлорсукцинимида, 1 мл 2%-ного раствора бикарбоната натрия и 1 мл 2 10 М раствора флуорескамина в ацетоне. Интенсивность флуоресценции измеряли через 2 мин после введения флуорескамина. Для производных саркозина оптимальная флуоресценция получается при использовании бромной воды (2-10- М) вместо хлорсукцинимида. [c.489]

Нагрузка полимера растущими пептидными цепями, как правило, невелика и составляет 0,1 — 0,3 ммоля пептида на 1 г полимера. Полнота реакции ацилирования оценивается на основании реакции с нингидрином и.аи флуорескамином (см. с. 35 и 36) и.аи физико-химическими мето 1ами. [c.146]

Еще более современный метод высокоскоростного разделения первичных аминов основан на применении производных флуорескамина. В отличие от анализа аминокислот (см. гл. 32) лишь [c.279]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.180 ]

Справочник биохимии (1991) -- [ c.383 , c.390 , c.407 ]

Биоорганическая химия (1987) -- [ c.36 , c.46 , c.54 ]

Основания глобального анализа (1983) -- [ c.0 ]

Органические люминофоры (1976) -- [ c.291 , c.295 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.28 ]

Транспорт электронов в биологических системах (1984) -- [ c.26 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.28 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.184 ]

Новые методы имуноанализа (1991) -- [ c.153 ]

Методы органического анализа (1986) -- [ c.489 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.28 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология