Флуорогены

Неорганические соединения, у которых возможен переход возбужденных электронов на основной уровень только с определенных энергетических уровней, обладают флуоресценцией. Этим требованиям удовлетворяют соединения редкоземельных элементов и урана (1П, IV, VI). Флуоресценция свойственна, в основном, органическим соединениям. Поэтому в анализе неорганических веществ используют флуорогенные органические аналитические реагенты, образующие флуоресцирующие комплексы с нонами металлов. Чем сильнее поглощает органическое соединение в ультрафиолетовой области спектра, тем интенсивней его флуоресценция. Этому условию удовлетворяют алифатические, насыщенные циклические соединения, соединения с системой сопряженных двойных связей, и в меньшей степени ароматические соединения с гетероатомами. Введение электро-нодонорных заместителей в молекулу органического соединения [c.95]

Поэтому флуоресцируют в основном ароматические органические соединения (бензол, нафталин, антрацен и их производные) или комплексы металлов с флуорогенными реагентами. Флуорогенные реагенты обычно содержат два или больше ароматических кольца, соединенных ненасыщенной связью. В состав молекул этих реагентов входят кислород или азот присутствие гидроксильных групп или аминогруппы в молекулах реагента облегчает образование комплексов. [c.107]

Растворимость в ацетоне—испытание Пригодность в качестве субстрата для флуорогенного определения эстераз и липаз — испытание [c.229]

Применение. В качестве флуорогенного субстрата для определения и гистохимического выявления эстераз и липаз [16]. [c.229]

Пригодность в качестве флуорогенного субстрата для определения эстераз и липаз — испытание [c.229]

Применение. В качестве флуорогенного субстрата для выявления липаз и определения пестицидов [18]. [c.230]

В 1972 г. в качестве селективного флуорогенного реагента на первичные амины был предложен флуорескамин [375], а не- [c.276]

Некоторые нефлуоресцирующие соединения разделяют в виде производных с флуорогенными веществами. Производные получают до хроматографического разделения или после, вводя реагент в Т-образное устройство между колонкой и детектором. Амины и фенолы образуют диазильные производные при взаимодействии с 5-диметил-амино-1-нафтилсульфохлоридом до разделения, а аминокислоты после разделения обрабатывают флуорескамином. [c.155]

Точность метода измерения гашения флуоресценции ниже, чем точность прямого измерения флуоресценции, и стандартные отклонения /38, 39/ составляоот 4-7%, Чувствительность метода гашения суже, чем чувствительность, достигаемая при использовании большинства обычных обнаруживающих реагентов, и примерно равна 5-10 мкг. Как и в случае измерения флуоресценции, в зависимости от того, происходит гашение без предварительного опрыскивания или после опрыскивания флуорогенными реагентами, например родамином В можно различить два случая /40/. [c.175]

Флуорескамин — очень чувствительный флуорогенный реагент, способный почти мгновенно реагировать с первичными аминосо-единениями при этом образуются флуорофоры, характеризующиеся максимумами поглощения и излучения соответственно при 390 и 475 нм. Реагент позволяет обнаружить пикомольные количества первичных аминов, он реагирует с незамещенными аминогруппами нерастворимого носителя в мягких условиях с образованием сильно флуоресцирующих производных [c.241]

Титрование активного центра химотрипсина, ковалентно связанного с сефадексом 0-200, описано Гейблом [25], который в качестве титрующего агента использовал 4-метилумбеллифернл-п-(К, Ы-триметиламмоний)циннамат (МУТМАЦ). Этот флуорогенный титрующий активные центры реагент позволяет определять даже 0,02 нмоль фермента. [c.252]

Особой областью флуоресцентного анализа является изучение ферментативной активности в жидких средах, тканях и клетках. Для большинства известных в настоящее время ферментов разработаны чувствительные флуоресцентные методы анализа, основанные на собственной флуоресценции самих ферментов или продуктов их метаболизма. В то же время в последние годы разработаны очень чувствительные методы определения активности ферментов с помощью флуоресцирующих метчиков. Для этого используют флуорогенные соединения, являющиеся комплексом субстрата фермента и химически связанного с ним флуорохрома (обычно флуорохромом является аминофлуоресцеин). В растворе флуорогенные соединения не флуоресцируют, а при наличии в исследуемой среде активного специфического фермента субстрат подвергается разрушению, флуорохром высвобождается и возникает интенсивная флуоресценция. Для анализа активности клеточных эстераз был предложен диацетат флуоресцеина, который легко проникает в живые клетки и, расщепляясь с освобождением флуоресцеина, придает клеткам с активными эсте-разами зеленую флуоресценцию. Аналогичным образом можно определять и лигазную активность клетки — об использовании метчиков энзимологии см. работы Рубина [57] и Мейселя [24]. [c.297]

Применение. В кач[естве флуорогенного субстрата для спектрофдуориметри-ческого определения и гистохимического выяв ления - -арабинозидазы [3—5]. Хранение, Плотно укупоренныйд защищенный от света и влаги. [c.227]

Применение. Б качестве флуорогенного субстрата для спекгрофлуориметри-- аЯ( 1С0го определения и гистохимического выявления Д-глюкозйдазы 7, 15, Ш]., Хранение. Плотно укупоренный, защищенный от света и влаги. [c.231]

Свойства. Кристаллический порошок. Температура плавления 107—108 °С, Применение. В качестве флуорогенного субстрата ддя спектрофлуориметрического определения и гистохимического выявления 6- >-глюкуронидазы Г4, 7, 9.. 15, 22, 23]. [c.231]

Применение. В качестве флуорогенного субстрата для спектрофлуориметрического определения и гистохимического выявления р-С-ксилозидазы [5, 9, 24]. Технические показатели (по каталогу н. п. Лахема, ЧССР) [c.232]

Свойства. Кристаллический порошок. Температура плавления 223 °С. Применение. В качестве флуорогенного субстрата для спектрофлуориметрического определения и гистохимического выявления а-/)-маннозидазы [4, 7, 9, 11,14,25,26]. [c.232]

Свойства. Кристаллический норошок. Температура плавления 208—210 "С. Применение. В качестве флуорогенного субстрата для спектрофлуориметрИ ческого определения фосфатаз [4, 9, 11, 28]. [c.233]

Термин флуоресценция был введен Стоксом (1852) для давно известного явления [68] — способности некоторых веществ светиться при обыкновенной температуре под влиянием освещения и только во время освещения (способность светиться после освещения получила название фосфоресценции). Стокс сформулировал свой известный закон, согласно которому длина волны в спектре флуоресценции всегда больще длины волны поглощенного света. Ломвдель (1871) на примере хлорофилла и некоторых других органических соединений показал, НТО закон Стокса имеет исключения. С начала 80-х годов химики начали изучать зависимость между способностью веществ к флуоресценции и их химическим строением. Р. Мейер (1897) связал эту способность с присутствием в молекулах особых групп — флуорофоров . Кауфман, автор монографии Флуоресценция и химическая конституция (1906), ввел понятие о группах — флуорогенах , способность которых к флуоресценции проявляется в присутствии других групп ауксохромов. Штарк (1907) открыл способность флуоресцировать при освещении ультрафиолетовыми лзгчами. Однако к этому времени стало ясно, что спектры флуоресценции для структурной органической химии менее перспективны, чем ультрафиолетовые спектры. Со всей определенностью это положение сформулировал Штарк Так как связь флуоресценции с коротковолновыми полосами поглощения может считаться надежно установленной и так как полосы поглощения легче обнаружить и измерить, чем полосы флуоресценции, представляется целесообразным вопрос о связи между положением полос флуоресценции и молекулярной конституцией заменить вопросом о связи между спектрами поглощения и конституцией [69, с. 223]. За 50 лет положение мало изменилось. Спектры флуоресценции, несмотря на их успешное применение в отдельных случаях (о чем будет упомянуто далее), не стали таким же мощным средством исследования в аналитической органической химии, как другие методы, рассмотренные [c.241]

В качестве источника фермента используют сыворотку крови, а для выбора подходящего субстрата имеются различные возможности. Фотометрическое измерение расщепления карбоксихолинов с помощью рН-индикатора чрезвычайно чувствительно, но при этом необходимо улавливать соответствующими фильтрами из воздушного потока все кислые газы и пары. Вполне пригодны такие флуорогенные субстраты, как индоксилацетат, который дает возможность с большой чувствительностью определять активность фермента. Недостаток, связанный с их применением, заключается в необходимости более сложного аппаратурного оформления для измерения флуоресценции. [c.246]

Все оптические отбеливатели относятся к классам соединений, способных флуоресцировать [9]. Кауфман [10] разработал эмпирическую классификацию органических соединений,, обладающих заметной флуоресценцией. Основные структуры, общие для всех этих веществ, он назвал люминофорами. В сочетании с флуорогенами люминофоры образуют флуорофоры. Последний термин был введен Майером [11]. Типичными люминофорами являются ароматические системы (бензол, нафталин, фенантрен, антрацен) и псевдо-ароматические гетероциклические системы (кумарин, Симм-трп-азин, бензоксазол) примерами наиболее распространенных флуо-рогенов могут служить следующие группы атомов и заместители —СН=СН- -СО— -СН = М— п-фенилен, -СН=СН-СООН и —СЫ [12]. [c.336]

Часто для локализации фосфатаз применяют флуорогенные субстраты. Гели инкубируют 10—20 мин с 4-метилумбеллифе-рилфосфатом, который непосредственно перед использованием растворяют в подходящем буфере. Флуоресценция освобождавшегося 4-метилумбеллиферона наблюдается при длине волны возбуждения 360 нм. Метилумбеллиферон растворим в воде и поэтому вымывается из геля. Гели, окрашенные этим субстратом, можно повторно окрасить нафтилфосфатом и солью прочного синего В fll98]. [c.300]

Обнаружение и количественное определение фосфатазной активности проводят также с другим флуорогенным субстратом—нафтол-А5-МХ-фосфатом (2-окси-3-амидо-М- (2 , 4 диметил-фенил)-нафталинфосфатом), который под действием фосфатаз превращается в сильно флуоресцирующее соединение. Инглис и др. [611] применили для этой цели метод индикаторного геля. Для его приготовления 2 /о-ный агар смешивают с равным объемом раствора 4 мМ нафтол-АЗ-МХ-фосфата в 0,4 М 2-ами-нО 2-метил-1-пропаноловои буфере (pH 11,2). После электрофореза пленки из ацетата целлюлозы кладут на пластину этого геля, тщательно разглаживая их, и инкубируют при 37 °С. При освещении пленок УФ-светом в тех местах, где произошла реакция, появляется флуоресценция. С помощью сканирующего устройства в УФ-свете можно проводить количественное определение фермента. Аналогичный метод был описан для выявления щелочных фосфатаз после электрофореза на ацетате целлюлозы [110]. [c.300]

Автоматизация анализа флуорогенных соединений предъявляет повышенные требования к их устойчивости, которым uq удовлетворяют аддукты ОФА-меркаптоэтаноламинокислоты. Более длинный период полупревращения имеют ОФА-этантиоль-ные производные. Хотя падение интенсивности флуоресценции на 20—50%) за 6—8 ч наблюдается и у этих соединений [342], процесс их синтеза и последующего разделения в автоматическом варианте был опробован при исследовании аминокислот плазмы [111]. [c.280]

J.6. Флуорометрические методы. Очень перспективен как высокочувствительный метод анализа флуорометрический метод естественно при условии, что в белок или полипептид можно ввести флуорогенную метку. Этет метод на конкретных примерах обсуждался в разд. 8.16.3. [c.292]

Гель-электрофорез. Электрофорез в полиакриламидном геле [на 7%-ном (масс./об.) геле] проводят, как описано в работе 24] гели окрашивают на белок по методике [24] или на GGT-активность с применением флуоресцентного метода, используя в качестве субстрата 7-( у-ь-глутамил)-4-метилкумарил-амид [25]. Готовят флуорогенный субстрат растворением 7-( - [c.152]

Некоторые ткани или клетки содержат большие количества эндогенных флуоресцирующих веществ или полифенолов. Такие примеси можно удалить, экстрагируя GUS буфером, в который добавлен Poly lar (нерастворимый поливинилпироллидон), с последующим пропусканием через колонку с сефадексом G-25. Поврежденные растительные протопласты, корни и другие клетки и ткани, обработанные ПЭГ или подвергнутые электропорации, могут накапливать флуорогенные соединения, которые, вероятно, представляют собой промежуточные продукты биосинтеза лигнина и других фенилпропаноидов. Эти вещества in vivo не флуоресцируют, но активируются при лизисе клетки, если при этом высвобождаются ферменты, способные расщеплять конъюгаты флуорохромов с гликозидами и другими компонентами, а проблема может быть устранена при центрифугировании экстрактов через микроколонки можно проконтролировать и кинетику накопления флуорохрома, которая при наличии эндогенных флуорохромов не будет зависеть от субстрата и, следовательно, не связана с GUS. [c.367]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология