Анализатор автоматический аминокислот

Наиболее совершенным методом для количественного анализа аминокислотного состава белков и пептидов в настоящее время является их определение с помощью автоматических приборов — анализаторов аминокислот. Разделение аминокислот в них происходит по [c.125]

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ АВТОМАТИЧЕСКИХ АМИНОКИСЛОТНЫХ АНАЛИЗАТОРОВ [c.173]

Разделение аминокислот на колонках в настоящее время проводят автоматически в специальных приборах, называемых анализаторами аминокислот. [c.133]

Методическое руководство по биохимии и иммунохимии белка. Рассмотрены теоретические основы методов и современная аппаратура для гель-фильтрации, бумажной, ионнообменной н тонкослойной хроматографии, в том числе методы количественного аминокислотного анализа с помощью автоматических анализаторов. Подробно описан анализ производных аминокислот методом газовой хроматографии. Книга хорошо иллюстрирована и снабжена подробной библиографией. [c.4]

Разделение свободных аминокислот в безбелковых экстрактах тканей проводят методами ионообменной хроматографии на колонках (в автоматическом анализаторе аминокислот) и хроматографии на бу- [c.194]

Для разделения и количественного анализа аминокислот и родственных соединений в белковых гидролизатах и физиологических жидкостях предназначены автоматические аминокислотные анализаторы, выпускаемые многими фирмами. [c.91]

В отличие от ранее рассмотренных видов хроматографии ионообменная хроматография основана на химическом взаимодействии активных групп неподвижной фазы с ионами разделяемых соединений. Она используется для разделения смесей белков н аминокислот, которые в водном растворе находятся в виде ионов (см. 11.1.3). Ионообменная хроматография положена в основу действия специальных приборов — автоматических аминокислотных анализатор О В. [c.498]

Обсуждение. Важность этой реакции определяется не только тем, что она представляет собой качественную пробу, но и тем, что при этом образуется поглощающее свет вещество, которое можно определить количественно с помощью автоматического аминокислотного анализатора. Эту цветную реакцию используют также для установления присутствия и положения аминокислот после разделения их с помощью хроматографии на бумаге (гл.7). [c.279]

Разработка автоматических анализаторов аминокислот с применением ионообменников и элюированием буферными растворами с возрастающими значениями pH позволяет в настоящее время работать с приборами, производящими за несколько часов полный количественный анализ любого белка (для навески в 5 мг) с точностью до 1%. [c.509]

На основе нингидриновой реакции были разработаны методы количественного определения аминокислот, в частности метод распределительной хроматографии на бумаге, впервые внедренный в 1944 г. (А. Мартин и Р. Синдж). Эта же реакция используется благодаря своей высокой чувствительности в автоматическом анализаторе аминокислот. Впервые такой прибор сконструировали Д. Шпакман, С. Мур и У. Стейн (рис. 1.7). После разделения смеси аминокислот в колонках, заполненных специальными ионообменными смолами (сульфополистирольный катионит), ток элюента из колонки поступает в смеситель, туда же поступает раствор нингидрина интенсивность образующейся окраски автоматически измеряется на фотоэлектроколориметре и регистрируется самописцем. Этот метод нашел широкое применение в клинической практике при исследовании крови, мочи, спинномозговой жидкости. С его помощью за 2—3 ч можно получить полную картину качественного состава аминокислот в биологи- [c.42]

До настоящего времени проведены широкие исследования по разделению нескольких типов аминов, в частности катехоламинов и метаболитов триптофана. Разделению этих соединений самыми различными методами посвящено много публикаций. Что касается других аминов, например алифатических аминов, полиаминов и ароматических аминов, то их разделение представляет меньшие трудности, хотя иногда трудно добиться разделения этих аминов на указанные выше типы, так как они имеют близкие хроматографические характеристики. Кроме того, некоторые типы аминов, например триптамин и серотонин, хроматографируются вместе с аминокислотами. Разделение этих типов аминов не приводится ни в настоящей главе, ни в главе по хроматографированию аминокислот. Однако можно получить некоторое представление о разделении этих аминов на основе методов ионообменной, хроматографии, описанных в настоящей главе. Для разделения аминов широко применяются почти все варианты колоночной жидкостной ионообменной хроматографии. Скоростные методы и гель-проникающая хроматография в настоящее время не имеют широкого применения по всей вероятности, классические методы ионообменной хроматографии будут преобладать в области разделения аминов, так как они позволяют получать хорошее и быстрое разделение компонентов. Еще одним важным фактором является возможность использования для этой цели автоматических анализаторов аминокислот. [c.267]

Гуанидины (автоматический количественный анализ, биохимическое применение) Смола PQ-28 дауэкс 50-Х2 Буферные растворы цитрата натрия различного состава и pH (анализатор аминокислот) 14, 15 [c.303]

Аминокислотный анализатор содержит колонку с ионообменной смолой, через которую аминокислоты проходят с разными скоростями. Элюат автоматически смешивается с раствором нингидрина, который окрашивается, если элюируется аминокислота. Окраска контролируется спектрофотометром и автоматически рисуется график зависимости поглощения от времени. Поскольку время нахождения в колонке характерно для данной аминокислоты, а поглощение непосредственно связано с ее ко- [c.267]

КИСЛОТНЫХ анализаторов. Эти аппараты автоматически разделяют аминокислоты на ионообменной колонке, собирают их, добавляют нингидрин и нагревают смесь для развития окраски, после чего измеряют интенсивность окраски и регистрируют ее в виде графика. На фиг. 11 приведена типичная запись результатов автоматического хроматографического анализа смеси аминокислот. Положение пика, отвечающего канедой из аминокислот на хроматограмме, строго фиксировано, причем измерение площади пика позволяет определить содержание соответствующей аминокислоты. Точность такого анализа (занимающего несколько часов) составляет обычно 2%. [c.58]

Рис. 20-4. Часть хроматограммы смеси аминокислот, полученной на автоматическом аминокислотном анализаторе при анализе гидролизованного образца фермента рибонуклеазы.

Создание автоматического анализатора аминокислот явилось крупнейшим событием в аналитической биохимии, предопределившим современные успехи в изучении первичной структуры белка. [c.125]

Подобная идея в настоящее время осуществлена [24] путем создания специального аналогового счетно-решающего устройства, соединенного с автоматическим анализатором аминокислот, детектор которого выдает дискретные данные, пригодные для дальнейшей обработки. Указанный прибор позволяет получать точное содержание аминокислот, выраженное в процентах через несколько минут после окончания хроматографического анализа. [c.149]

Автоматические анализаторы аминокислот все время соверщенствуют-ся, повыщаются чувствительность методов и скорость проведения анализа. Так, в современных приборах высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) удается проводить анализ гидролизата белка за 45 мин, определяя при этом концентрацию аминокислот в пикомолях (рис. Т8). [c.43]

Очеиь широко используют ионообменную хроматографию для анализа ионизирующихся органических соединений (кислоты, амины, аминокислоты, компоненты нуклеиновых кислот и т. д.). Для анализа аминокислот создан -, автоматические анализаторы, которые в процессе хроматографирования изменяют pH элюента, ионную силу, вводят необходимые реагенты и пр. [c.609]

Гистидинсодержащие дипептиды определяют в безбелковом экстракте мышц после разделения их методами хроматографии на бумаге, в тонком слое силикагеля или ионообменной хроматографии на колонке (в автоматическом анализаторе аминокислот). Как и все первичные амины, дипептиды можно обнаружить по реакции с нингидрином, флуорескамином и с о-фталевым диальдегидом. Карнозин, кроме того, может быть определен по цветной реакции Паули с диазотиро-ванной сульфаниловой кислотой. [c.191]

Для установления количественного состава входящих в гликопротеин моносахаридов и аминокислот биополимер подвергают полному кислотному гидролизу, и состав гидролизата определяют обычными методами количественного анализа. Пептидные связи устойчивее гликозидных по отношению к кислотам, поэтому для полного расщепления на мономеры гликопротеины приходится гидролизовать в более жестких условиях, чем обычные полисахариды (6 н. НС1, 100—ПО °С, 24 ч) . Нужно иметь в виду, что как сахара, так и аминокислоты могут частично распадаться в условиях кислотного гидролиза, причем в ряде случаев можно с помощью ХОЛОСТЫХ опытов внести соответствующие поправки при анализе. Специфической для гликопептидов побочной реакцией в условиях кислотного гидролиза является возможная конденсация сахаров с аминокислотами, приводящая к окрашенной сложной смеси различных веществ, в том числе простейших карбонильных соединений (так называемая реакция Майяоа). Например, по данным Готшалка , потеря аминокислот при кислотном гидролизе богатых сахарами гликопротеинов может составлять до 30 %. Количественное определение моносахаридов проводят с использованием хроматографии, спектрофотометрической и колориметрической техники (см. гл. 14). Для анализа аминокислот применяют обычно методы, хорошо известные из химии белка. Так, количественный анализ аминокислотного состава проводят в автоматических анализаторах или с помощью газо-жидкостной хроматографии . [c.567]

Рис. 1.7. Работа автоматического анализатора аминокислот (принципиальная схема по Шпакману, Муру и Стейну).

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Во втором методе для определения всех аминокислот используют лишь одну колонку. Время, необходимое для анализа, в этом случае зависит от числа используемых буферных растворов, что в свою очередь определяется имеющейся аппаратурой. Если прибор, например анализатор Унихром фирмы Весктап (США), автоматически позволит производить однократную смену одного буферного раствора на другой, то предпочтительнее применять двухбуферную систему. В этом случае весь анализ занимает 4 ч. Если же прибор позволяет автоматически менять протекающий буферный раствор два или несколько раз, то используют систему из трех буферных растворов, что сокращает продолжительность анализа до 3 ч. При соответствующей комбинации методов продолжительность анализа двухколоночным методом можно еще уменьшить (см. ниже). [c.174]

Успехи в установлении строения и частичном синтезе инсулина еще в 50-х гг. вызвали большой интерес ученых к изучению строения других белков. В частности, внимание химиков привлек фермент рибонуклеаза, обладающий в отличие от инсулина одноцепочечной структурой. Американские ученые К. Хирс, У. Стейн и С. Мур, основываясь на опыте Ф. Сенгера и других исследователей, определили в 1960 г. полную формулу рибонуклеазы. При этом эффективным оказался новый метод, так называемый автоматический анализатор аминокислот , незадолго до этого разработанный У. Стейном, С. Муром и Д. Спекманом. [c.263]

Для изучения аминокислотного состава белков исгюльзуется глс жным образом метод гидролиза, т. е. нагревание белка с 6—10 моль/л соляной кислотой при температуре 100—110 "С. Получают смесь а-амипокислот, из которой, мож1ю выделить индивидуальные аминокислоты. Для количественного анализа эгоп смесн в настоящее время применяют иоисоомсниую и бул ажную хроматографию. Сконструированы специальные автоматические анализаторы аминокислот. [c.627]

Аминокислотный анализ проводился либо методом бумажной и тонкослойной (на силикагеле) хроматографии гидролиза с последующим проявлением пятен аминокислот раствором нингид-рина и изменением плотности смытых с сорбента нингид-риновых производных [17], либо на автоматическом кислотном анализаторе. [c.362]

По скорости и эффективности хроматография аминокислот уже начала превосходить классические системы детектирования, и дальнейшее усовершенствование анализаторов продолжалось на основе более глубокого изучения кинетики реакции аминокислот с нингидрином и отработки конструкции реактора и колориметра [7, 16, 17]. В результате удалось еще более повысить разрешение и чувствительность анализа. Время одного анализа составляло уже менее 8 ч, и, следовательно, появилась возможность увеличить эффективность за счет круглосуточной работы прибора. Большинство операций уже осуществлялось в автоматическом режиме, однако для полной автоматизации необходимо было иметь блок ввода образцов (автосамплер). Первая модель устройства с одной петлей для ручного ввода образца уже была разработана [18], поэтому не составляло труда преобразовать ее в блок для автоматического ввода большого числа образцов. В дальнейшем для этих целей были созданы специальные патроны [19]. Теперь рабочая программа, заложенная в программирующее устройство, стала включать и управление автосамплером. Высокая эффективность прибора потребовала включения в систему интегратора или ЭВМ для автоматического обсчета результатов анализа. В последующих разделах дано описание неавтоматического базового анализатора и анализатора Te hni on, а затем совсем коротко приведены основные характеристики современных аминокислотных анализаторов. [c.316]

Нингедриновое окрашивание аминокислот и других аминов широко используют в автоматических аминокислотных анализаторах. В смесительную камеру подают 2—4%-ный раствор реактива в смеси (3 1) метилцеллозольва или дн-метилсульфоксида с 4 Л1 ацетатным буферным раствором (pH = 5,5) к раствору добавляют также гидриндантин до концентрации 0,6 г/л (или хлорид олова, хлорид титана). После смешивания элюата с реактивом поток пропускают через капилляр, погруженный в кипящую водяную баню (90—100 С). Фотометрирование проводят при 440 и 570 нм. Чувствительность определения аминокислот — до 10 моль. [c.380]

Автоматические анализаторы аминокислот относятся обычно к типу, который был разработан Опэкманом, Муром и Стейном [c.28]

Что касается скорости, чувствительности и стоимости, любой из газохроматографических методов выгодно отличается от существующих автоматических анализаторов на смоле, но последние удобнее и проще в обращении. Более широкое использование ГХ будет зависеть главным образом от развития автоматизированных методов. Нетрудно представить себе прибор с помещенным в нем рядом образцов пептидов или белков, которые обрабатываются по очереди определенными реагентами и затем по одному подаются на хроматографическую колонку в ходе элюирования пики идентифицируются, интегрируются, а результаты печатаются в виде количества наномолей аминокислоты. Сароф (личное сообщение) уже работает в этом направлении, используя газофазное получение производных. Реагенты для приготовления ТФА-метиловых эфиров проходят вместе с газом-носителем над образцом, который затем упаривают в токе горячего газа и подают на колонку. Следует отметить, что при метилировании раствором НС1 в метаноле может протекать алкоголиз пептидов и белков, что позволяет обойтись без длительной и утомительной стадии гидролиза [11]. Сароф также снизил время элюирования менее летучих аминокислот и отказался от программирования температуры, применив колонку из трех секций с уменьшающейся температурой, каждая секция работает в изотермическом режиме [84]. С помощью кранов между секциями аминокислоты направляются или на следующую секцию, или же непосредственно в детектор. Этот метод должен облегчить автоматизацию, ускорить разделение и значительно увеличить срок службы колонки. [c.132]

В ионообменной хроматографии соединения разделяются в-соответствии с их зарядом. Например, карбоновые кислоты, которые диссоциируют с образованием анионов КСОг , оченз медленно проходят через колонку с анионообменной смолой (например, имеющей группы —М(СНз)зС1 ), тогда как нейтральные или положительно заряженные частицы проходят быстрее. В случае катионообменной смолы нейтральные и отрицательно заряженные частицы проходят быстро, тогда как катионы за-де рживаются дольше. Аминокислотный анализатор (машина длж автоматических анализов смесей аминокислот, см. гл. 12) основан на ионообменной хроматографии. [c.61]

Б.П1.6.6. Аминокислоты. Арикава и Макимо [120] успешно разделили аминокислоты на колонках с сульфокислотными смолами, содержащими цинк, кадмий и другие катионы, которые образуют комплексы с аминокислотами. Вымывающим раствором был ацетатный буфер, содержащий ион металла в концентрации 10 Ai этим восполнялись потери от вымывания ионов металла в виде аминокислотных комплексов. Для получения воспроизводимых результатов содержание металла в смоле должно быть постоянным. Этим методом проанализировали смеси двадцати аминокислот. По тому же принципу работает автоматический анализатор аминокислот. Имеются все основания для использования в методе обмена лигандов растворов солей металлов в качестве промывных растворов при условии, что ионы металла в растворе не будут мешать последующему анализу. Аминокислоты определяли при помощи нингидринового метода присутствие металла не мешало анализу. [c.230]

После того как мы разобрали все процессы, лежащие в основе автоматического анализа аминокислот, переходим к описанию автоматического анализатора Спекмана, Штейна и Мура, который изображен на рис. 7. [c.141]

Рис. 7. Автоматический анализатор аминокислот Спекмана, Штейна и Мура [6].

Подводя некоторые итоги, можно сказать, что автоматический хроматографический процесс, предложенный Спекманом, Штейном и Муром для определения аминокислот еще в 1954 г. и который по праву можно назвать классическим, оказался настолько хорошим, что им пользуются еще и теперь в большинстве лабораторий мира. Более того, в большей части фирменных автоматических анализаторов, выпускаемых до последнего времени в Японии (Хитачи KLA-З ), Англии (Эванс Электроселениум), США (Бекман, Спинко модель 120 , Феникс- Н-700 ), СССР ( ХАЖ-1 ), Чехословакии (мастерские Чехословацкой АН), использован указанный процесс. В эти приборы были внесены отдельные усовершенствования, касающиеся компановки, в виде специальных стендов, конструкции деталей и отдельных механизмов (насосы, колонки, фотометры, таймера и т. д.). Но j ie TBo процесса оставалось неизменным, и поэтому разрешающая способность колонок, продолжительность анализа и нижний предел количества анализируемых аминокислот (10" моль) не отличались от процесса Спекмана, Штейна и Мура. [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология