Вирус герпеса простого клеток

Экспрессия гена тимидинкиназы вируса простого герпеса в соматических клетках мыши после инъекции рекомбинантного гена в яйцеклетки [c.428]

На примере ДНК вируса простого герпеса показано, что сразу после соосаждения с фосфатом кальция вирусная ДНК становится устойчивой к разрушению ультразвуком, но комплекс фосфат кальция - ДНК остается чувствительным к ДНКазе в течение 4 ч. При взаимодействии этого комплекса с культурой клеток животных ДНК становится устойчивой к ДНКазе уже в течение первого часа. Дальнейшие исследования показали, что ДНК образует с фосфатом кальция прочный комплекс, который при оптимальных условиях поглощают практически все реципиентные клетки. Эффективность поглощения клетками комплекса фосфат кальция - ДНК в значительной степени зависит от pH, при котором формировался этот комплекс, и концентрации ДНК. Важно, чтобы осадок фосфата кальция получился мелкодисперсным. Но даже в оптимальных условиях проведения трансфекции данным методом лишь в 1-5 % клеток комплекс достигает ядра. По-видимому, проникновение ДНК из цитоплазмы в ядро является критическим этапом, наиболее сильно влияющим на эффективность трансфекции клеток вирусной ДНК. Электрон-но-микроскопическая визуализация позволила сделать заключение, что микрокристаллы комплекса фосфат кальция - ДНК проникают в клет- [c.333]

Глиобластома, СПИД, рак яичников Тимидинкиназа вируса простого герпеса Клетки опухоли, Т-лимфоциты [c.486]

С появлением в середине 1970-х гг. методов генетической инженерии стала реальной возможность встраивать в вирусные геномы чужеродные гены, направляющие синтез желаемых белков. В 1980 г. проведены первые эксперименты на вирусе простого герпеса человека, в 1981 г. — на аденовирусе человека, в 1982 г. — на вирусе осповакцины. Возникла идея создания гибридных вирусов, способных при заражении человека или животных синтезировать не только свои белки, но и протективные белки других патогенных вирусов, для которых нет эффективных вакцин. Такие гибридные вирусы получили название живые поливалентные вакцины. Как уже отмечалось, важное значение для защиты от вирусной инфекции имеет Т-кле-точный иммунный ответ. Цитотоксические Т-лимфоциты продуцируются только в ответ на антиген, синтезируемый эндогенно в клетках организма, и не продуцируются при введении этого же антигена извне, т. е. в составе убитой вакцины или в виде индивидуального белка. Поэтому разработка живых поливалентных противовирусных вакцин открывает новые, ранее не доступные возможности иммунопрофилактики различных инфекционных заболеваний. [c.437]

Долгое время вирусология оставалась особой, несколько таинственной областью микробиологии, увлекательной для тех, кто стремился понять природу вирусов, но совершенно недоступной большинству биологов. Необходимость изучения вирусов обусловлена тем, что они вызывают широко распространенные тяжелые заболевания растений, животных и человека. Хотя оспа в настоящее время ликвидирована, многие вирусные инфекции, например грипп, ящур, простой герпес или бешенство, можно контролировать лишь частично. Кроме того, идентификация новых вирусных заболеваний, таких, как лихорадка Ласса, африканская чума свиней или синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), требует проведения вирусологических исследований в самые сжатые сроки. В то же время в результате вклада, внесенного в становление молекулярной и клеточной биологии, и сама вирусология поднялась на новый уровень развития. Вирусологи постоянно применяли технические достижения других наук, в первую очередь методы исследования биологических макромолекул, однако лишь недавно специалисты в области молекулярной и клеточной биологии стали использовать вирусы как удобную модель для изучения структуры и функции клетки. [c.7]

В иммунном ответе на инфекцию эпителиальных покровов, вызванную вирусом простого герпеса 1 типа (HSV-I), главной эффекторной клеточной популяцией служат Т-клетки D4 . Они, как и в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (см. гл. 26), мобилизуют и привлекают макрофаги, и это ускоряет ликвидацию вируса. Макрофаги служат важными участниками этого процесса (рис. 16.6). В качестве ключевых цитокинов в ответе на герпесвирусную инфекцию действует ИФу, необходимый для активации моноцитов, и фактор некроза опухолей (ФНО), оказывающий ряд противовирусных эффектов, сходных с эффектами ИФу, но осуществляемых иными путями. [c.310]

Из других вирусов упомянем вирус простого герпеса, который потенциально полезен для генной терапии болезней Паркинсона и Альцгеймера, поскольку он инфицирует нервные клетки и его ДНК не интегрируется в клеточный геном. Изучаются возможности для генной терапии аденоассоциированного вируса (AAV). Этот дефектный вирус размножается только в присутствии аденовируса или вируса простого герпеса, а в отсутствие помощников его ДНК интегрируется в определенный сайт хромосомы 19 человека, позволяя одновременно достигать стабильности введенного гена и избегать нежелательных последствий из-за непредсказуемости интеграции генов. [c.424]

IV, Раеномерно распределенная крупнозернистая деструкция клеток (рис. 27), Клетки округлые, увеличенные в размере. Такого рода изменения культур клеток вызывают вирус герпеса простого, вирус В. [c.109]

Многие из этих 5-замещенных нуклеозидов, особенно 5-замещенные 2 -дезоксиуридины, являются аналогами тимидина, и было опубликовано много работ по исследованию антивирусных свойств этих соединений [19, 203—208]. Однако, в 1974 г. [203] 2 -дезокси-5-иодуридин был всего лищь одним из трех соединений, официально одобренных для ограниченного клинического применения в антивирусной химиотерапии и используется в лечении герпеса простого зернистого кератита. Существует несколько возможных путей ингибирования развития вирусов в клетках. Они заключаются в ингибировании адсорбции вируса, ингибировании проникновения вируса и его развертывания и, наконец, в ингибировании внутриклеточных явлений. Именно этим последним свойством мы и интересуемся больще всего при обсуждении действия аналогов ти- 1идина. Однако даже здесь способ действия многих существующих аналогов неизвестен, и многие явно схожие соединения обладают очень различным действием. Проблема может быть наилуч-Шим образом проиллюстрирована на примере 5-галоген-2 -дезокси- [c.123]

Методы выделения вирусов простого герпеса довольно сложны по сравнению с другими вирусами. Более того, метод, хорошо зарекомендовавший себя при работе с одним штаммом вируса на определенной клеточной линии, может оказаться неприемлемым для других штаммов на той же линии или того же штамма вируса на других клетках. Поэтому мы опишем два метода. Мы показали, что первый метод можно успешно применять для получения штамма HFEM и некоторых других при условии, что для выращивания вируса используют клетки Нер-2. Данный метод прост и позволяет получать вирусные препараты высокой степени чистоты. Второй метод позволяет достигнуть удовлетворительных результатов со всеми штаммами вируса и различными типами клеток. Для выбора оптимальных условий получения высокого выхода вируса и качественного исходного материала для дальнейшей очистки следует вначале изучить кривую роста исследуемого вирусного штамма на различных линиях клеток. На рис. 10.4 показана кривая роста штамма HFEM на клетках Нер-2 при высокой множественности инфекции и культивировании клеток при 32 °С. Оптимальные условия, которые требуются для приготовления исходного материала, в общих чертах описаны в разд. 2.5.1. [c.279]

Установлено, что вирус простого герпеса содержит ген тимидинкиназы и инфекция клеток ТК вирусом герпеса, инактивированным ультрафиолетом, приводит к появлению клонов ТК -трансформантов (1971 г.). Геном вируса значительно меньше генома клетки, поэтому относительное содержание гена тимидинкиназы в препарате вирусной ДНК намного больше, чем в клеточной ДНК. Это создало прекрасные предпосьшки [c.340]

В лаборатории X. Темина в 1981-1983 гг. была разработана система клонирования генов в составе генома вируса некроза селезенки (SNV). Использована клонированная в плазмиде ДНК провируса SNV. В различные места этой ДНК встраивали фрагмент генома HSV-1, содержащий ген тимидинкиназы. Во всех случаях после встройки гена tk провирусная ДНК была неинфекционна из-за нарушения каких-либо функций, но интегрировалась в геном клеток ТК , обусловливая их генетическую трансформацию к фенотипу ТК При инсерци-онном повреждении LTR эффективность генетической трансформации была низкой, что доказывает важную роль LTR в процессе интеграции ретровирусной ДНК. Чтобы получить потомство гибридных вирусов SNV, в клетки кроме гибридной ДНК ввели котрансфекцией ДНК вируса ретикулоэндотелиоза для продукции ви-руса-помощника. В результате удалось получить в высоком титре потомство гибридного вируса SNV, при инфекции которым ТК -клеток цыпленка или крысы происходила их генетическая трансформация к фенотипу ТК" . Объединение в составе генома ретровируса легко селектируемого маркера генетической трансформации и любого другого гена позволяет упростить работу с гибридными ретровирусами. Данный подход успешно реализован в 1982 г при встройке в ДНК ретровируса SNV хромосомного гена а-глобина мыши или гена tk вируса простого герпеса. [c.403]

Вектор для позитивно-негативной селекции обычно содержит следующие элементы 1) два блока последовательностей (НВ1 и НВ2), гомологичных отдельным участкам сайта-мишени 2) трансген (ТО), кодирующий новую функцию реципиента 3) последовательность, кодирующую устойчивость к соединению 0-418 (КеоО 4) два разных гена тимидинкиназы 1к1 и 1к2) вируса простого герпеса типов 1 и 2 (Н8У-Г / и Н8У-/ 2) (рис. 19.5, А). Ключевым для позитивно-негативной селекции является взаимное расположение этих элементов. Трансген и ген устойчивости к 0-418 (МеоО должны находиться между двумя участками ДНК, гомологичными сайту-мишени, а гены Н8У- А / и НБУ-(к2 - по бокам этой конструкции. Если встраивание происходит в случайный сайт (не в НВ1 и НВ2), то с высокой вероятностью вместе с другими последовательностями интегрируют один или оба гена Н8У-/ (рис. 19.5, А). Напротив, если интеграция происходит в результате гомологичной рекомбинации путем двойного кроссинговера в нужный сайт, то в геном встроятся только трансген и ген N60 а гены Н5У-/Л - нет (рис. 19.5, Б). При выращивании трансфицированных клеток в присутствии 0-418 клетки, не несущие ген Neo расти не будут. Выживут только клетки, в которых произошла интеграция -иными словами, осуществляется позитивная селекция. Если одновременно с 0-418 в среду [c.422]

Изучение реконструкции вирусов растений и мелких бактериофагов in vitro указывает на то, что сборка простых вирусов — это спонтанный процесс, осуществляемый за счет общего повышения энтропии процесс этот происходит быстро — после того, как концентрация белка и нуклеиновой кислоты достигнет некоторой достаточной величины. С другой стороны, мы уже обсуждали необходимость в факторе созревания для стабилизации пикорнавирусов (гл. IX, разд. Б). Как показывают результаты полученные с аденовирусами и вирусом группы герпеса ДТП может носить более общий характер [407] Что касается созревания РНК-содержащих фагов то после того, как синтез потомства фага завершен (обычно когда накапливается около 10 ООО частиц на клетку) клетки Е. oli лизируют, а фаговые частицы высвобож даются в окружающую среду. В отличие от ДНК-содержа щих фагов в этом случае нет никаких указаний на суще ствование лизирующего фермента. Вирусы же растений остаются в клетках до тех пор, пока механические причины или же биологические переносчики не доставят их новому хозяину. [c.260]

Известно несколько типов аденовирусов, трансформирующих определенные клетки животных. Особый интерес представляет вирус Эпштейна—Барр, поскольку считают, что он имеет отношение к лим-фоме Беркитта и носоглоточной карциноме у людей. Опухоли шейки матки, возможно, связаны с вирусом простого герпеса (тип 2), а вирус гепатита В часто ассоциируют с некоторыми формами рака печени. [c.357]

Уменьшение уровня фибронектина также обнаружено в клетках почки новорожденных хомяков (NHK), инфицированных вирусом простого герпеса (HSV) ( hen et al., 1978). Нормальные первичные культуры и не образующие опухолей линии клеток, инфицированных вирусом (HSV), имели высокий уровень фибронектина, количество которого определялось с помощью радиоиммунологического анализа. [c.95]

Как показал Виглер, при введении гена тимидинкиназы вируса простого герпеса HSV-tk) в Ь й -клетки и применении селективного давления (среда ГАТ) появляются стабильные трансформанты, которые наследуют ген HSV-tk (Wigler et al., 1977). Следовательно, при добавлении среды ГАТ нетрансфор-мированные клетки элиминируются, и благодаря этому можно получать чистую популяцию трансформированных клеток. Другими доминантными селектируемыми генами являются ген резистентности к неомицину пео ) и ген резистентности к мпко-феноловой кислоте gpt). [c.39]

Так, К. Чу с соавторами (1979 г.) обрабатывали гидроксиламином определенные E oRl-фрагменты ДНК вируса простого герпеса и затем вводили их в чувствительные клетки животных одновременно с неповрежденной ДНК вируса дикого типа. Мутагенизированные фрагменты за счет генетической рекомбинации встраивались в вирусный геном, в результате чего были отобраны температурно-чувствительные (ts) мутанты вируса. Причем расположение мутаций было ограничено участками генома, покрываемыми соответствующими E oRl-фрагментами. [c.175]

В 1981 г Д. Влажны и Н. Френкель показали, что после трансфекции культуры клеток кролика смесью нативной ДНК вируса простого герпеса и мономерной повторяющейся единицы (8,3 тпн) дефектного HSV-1 образуется полноразмерный (около 150 тпн) дефектный геном, состоящий из тандемных повторов введенного фрагмента 8,3 тпн. По-видимому, такой вирусный геном получался в результате репликации мономерной единицы по механизму катящегося кольца. При этом нативная ДНК HSV-1 обеспечивала транс-функции, необходимые для репликации и созревания вирусной ДНК. Дефектный геном эффективно упаковывался в капсиды. Аналогичные результаты были получены в 1982 г, когда в клетки кролика котрансфекцией с нативной ДНК HSV-1 ввели повторяющийся 5й Л1-фрагмент (3,9 тпн) дефектного вируса простого герпеса штамма Patton. [c.388]

Поскольку ДНК этих вирусов имеет большие размеры и, как следствие, большое число мест гвдролиза рестриктазами, классическая генно-инженерная реконструкция вирусной ДНК in vitro обычно неприменима. В данном случае необходимо использовать подход, первоначально опробованный на вирусе простого герпеса. Целевой ген встраивают внутрь фрагмента вирусной ДНК, клонированного в составе векторной плазмвды. В результате получают конструкцию, в которой целевой ген фланкирован последовательностями ДНК из определенного района вирусного генома. Котрансфекцией в чувствительные клетки вводят нативную вирусную ДНК и гибридную плазмиду. В процессе рекомбинации по участкам гомологии, происходит встройка целевого гена в выбранный участок вирусного генома. [c.417]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология