Нормальная среда для культивирования

Однако культивирование одной или нескольких клеток связано с определенными трудностями, состоящими в том, что одиночная клетка живет, но не делится в тех условиях, которые разработаны для нормального роста и размножения клеток каллусной ткани. Поэтому при культивировании одиночных клеток потребовалась выработка специальных методов. Все они основаны на использовании так называемого кондиционирующего фактора — метаболитов, выделяемых в среду делящимися клетками. Когда на питательную среду высаживается одна клетка или небольшое их количество, они не делятся, так как вьщеляемого кондиционирующего фактора не хватает для индукции деления. Следовательно, необходимо повысить концентрацию фактора в питательной среде. Этой цели служат следующие методы [c.167]

Д. Нормальная среда для культивирования [c.282]

Метод проточных культур открывает широкие перспективы для автоматизации процессов выращивания. На гранях биологических наук и технической кибернетики возникла новая область— биоинженерия. Недавно в нашей стране создан автоматизированный аппарат для непрерывного культивирования микробов, позволяющий длительное время выращивать чистые культуры их Б стерильных условиях. Процесс можно вести одновременно в нескольких приборах. Каждый из них имеет многоканальную систему введения свежей питательной среды, позволяющую оперативно изменять состав ее и скорость притока, а также целую систему датчиков, при помощи которых можно получать точную информацию о концентрации клеток, растворенного кислорода, температуре и кислотности среды. В приборе вся жидкость тщательно перемешивается и непрерывно снабжается воздухом, чтобы обеспечить нормальное дыхание размножающихся клеток. С датчиков показания поступают на централизованную систему контроля, которая, автоматически опросив все датчики (одного или нескольких сосудов), вырабатывает управляющие сигналы и воздействует на системы подачи питательной среды, воздуха, регулирования температуры и др. Таким путем поддерживают все параметры процесса на строго определенном, постоянном уровне. [c.135]

Правильность сделанного вывода о предельной величине объемного коэффициента массопередачи, обеспечивающей нормальное функционирование особей популяции, была проверена при исследовании процессов роста животных клеток линии ВНК-21 в аппаратах, где создавались различные величины коэффициентов массопередачи но кислороду. Полученные результаты приведены в табл. 4.8, анализ данных которой показывает, что в тех случаях, когда коэффициент массопередачи аппарата не ниже порогового значения ( >0,45 ч ), получаемая предельная концентрация биомассы такая же, как и при =1,3 ч . Однако при культивировании клеток в аппарате с = 0,5 Ч- по сравнению с условиями =1,3 ч происходит некоторый сдвиг обмена в сторону гликолиза коэффициент метаболизма по кислороду уменьшается и в то же время увеличивается коэффициент метаболизма по бикарбонату натрия, отражающего расход этого компонента питательной среды на нейтрализацию кислых продуктов гликолиза. [c.282]

Швейцер [178] установил возможность культивирования Е. mus- ae на искусственной питательной среде, состоящей из желатина, стерилизованного газом, бычьей крови, водной вытяжки из мяса, d-глюкозамина и говяжьего жира. Было установлено, что без жиров гриб растет лишь до определенной стадии, для его дальнейшего нормального развития необходим d-глюкозамин, как один из продуктов неденатурированных белков и активных ферментов. Затем грибу необходимы жиры. Такое развитие гриба на искусственной питательной среде соответствует его развитию в теле хозяина, где происходит разрушение хитина в месте прорастания гриба, разжижение жирового тела и некоторых мышечных тканей. [c.326]

С развитием гонад дифференцируются самки и самцы. До 1938 г. имелись противоречия в описаниях размеров самок нематод, так как самки, образовавшиеся при разведении нематод на питательной среде, по размеру отличались от самок, развившихся в хозяине, и, кроме того, самки разных поколений из одного и того же вида хозяина также бывают разной величины. По экземплярам, собранным в природе, было установлено [44], что длина самок иногда достигает 8000—9000 мк при нормальной длине 2500—3000 мк, как это ранее указывал Глезер [16]. При культивировании нематоды на агаровой питательной среде выяснилось [44], что как гигантские, так и нормальные самки дают потомство с нормальными личинками и развивающимися из них самками. Гигантские самки нематод были обнаружены в природных условиях лишь.в тех пораженных личинках японского жука, в которых содержалось очень небольшое число особей паразита (до 10 самок нематод). [c.571]

Это представление подтверждается существованием стволовых клеток, сохраняющих некоторые черты эмбриональных клеток при каждом делении стволовой клетки образуется новая стволовая клетка плюс дифференцированная клетка. Последнее явление трудно объяснить только как реакцию на химические сигналы из окружающей среды. Согласно некоторым наблюдениям, клетки животных обладают ограниченным потенциалом деления [176, 177]. Например, нормальные диплоидные фибробласты человеческого эмбриона при выращивании в культуре делятся примерно 50 10 раз, после чего погибают независимо от условий культивирования. Фибробласты, полученные от людей старшего возраста, погибают после меньшего числа клеточных деле яйй. АнаЛОгнтаым йбразом быс трее norti6atdlf в культуре клетки жи- [c.360]

В связи с тем что стероидные гормоны и другие факторы, вырабатываемые фолликулярными клетками, оказывают влияние на созревание ооцитов, было сделано предположение, что культивирование ооцитов с фолликулярными клетками может повысить их способность к нормальному оплодотворению и последующему эмбриональному развитию. Многие явления внутри фолликула, включая биосинтез стероидов и синтез белков, регулируют гонадотропные гормоны. Поэтому при культивировании ооцитов внутри фолликулов или с фолликулярными клетками гонадотропины должны быть обязательной составной частью среды. [c.210]

Изучение условий образования антибиотиков при культивировании микроорганизмов преимущественно на синтетических средах. При этом определялись место накопления антибиотика (в культуральной жидкости или внутриклеточно), период его максимального образования и другие факторы. Подбирались условия культивирования, при которых прекращается биосинтез антибиотика при нормальном росте продуцента (это обстоятельство имеет существенное значение для изучения организмов, образующих внутриклеточные антибиотические вещества). Сравнивались физиологические и биохимические свойства клеток, содержащих антибиотик и не имеющих его, что помогало выяснению влияния антибиотика на метаболизм изучаемого организма. [c.105]

Во-первых, антибиотики, вносимые в среду для культивирования собственных продуцентов перед началом их посева в концентрациях, которые обычно характерны для них в условиях нормального развития, могут угнетать рост продуцентов. Во-вторых, антибиотики (бацитрацин) в ряде случаев непосредственно участвуют в образовании спор собственного продуцента в-третьих, в зависимости от концентрации и времени внесения в среду антибиотики способны оказывать ингибирующее или, наоборот, стимулирующее действие на процесс споруляции клеток, задерживать прорастание спор, усиливать биосинтез собственного антибиотика (грамицидина С) в-четвертых, они могут выступать в качестве своеобразных регуляторов энзиматических процессов (новобиоцин, ристомицин, нистатин и др.). [c.121]

Приготовление и стерилизация питательной среды, технологического оборудования и коммуникаций. Процесс биосинтеза в производственных условиях начинают с получения посевного материала в инокуляторах и (или) посевных аппаратах. Питательная среда для культивирования продуцентов лизина содержит в качестве основного источника углерода мелассу, уксусную кислоту или их смеси. Среди источников азота наиболее часто используют соли аммония и мочевину, а также кукурузный экстракт, гидролизаты кормовых, пекарских дрожжей и казеина. Последние играют, кроме того, роль ростовых факторов содержат в себе дефицитные для ауксотрофного мутанта аминокислоты и витамины. Нормальное течение процесса биосинтеза обеспечивается добавками солей макроэлементов калия, фосфора, магния. Добавок микроэлементов, как правило, не производят, они содержатся в достаточном количестве в кукурузном экстракте и гидролизатах дрожжей. [c.32]

Среда первоначально рекомендуется использовать среду для культивирования нормальных протопластов, прежде чем испытывать растворы, составленные специально для электропорации ). [c.217]

В культурах иногда образуются гигантские клетки — особенно в случаях роста в неоптимальных условиях. Образование таких клеток обусловлено тем, что растущие клетки теряют способность делиться и могут увеличиваться в размере, пока не достигнут в диаметре 1 мм и более. Частота образования гигантских клеток заметно увеличивается в результате облучения (Tolma h, Mar us, 1960). Наличие небольшого количества гигантских клеток Б популяции, вероятно, не представляет особенных проблем для биохимических исследований, но если их число растет, то это отражает плохие условия культивирования такие культуры должны быть выбракованы и заменены новыми культурами, растущими в нормальной среде. [c.23]

Одновременную инкубацию обоих конкурентов (меченого и немеченного миозина) с первичными антителами использовали Кларк и соавторы для отбора моноклональных гибридбм — продуцентов антител против миозина. Роль иммунной сыворотки в этих опытах каждый раз играли среды культивирования различных гибридом, полученных в результате слияния клеток селезенки крыс и мышей, иммунизированных миозином, и клеток миеломной линии P3-X63-Ag8. Инкубацию проводили в боратном буфере (pH 8,4), содержащем 40 мМ пирофосфата натрия, по 1% Тритона Х-100 и дезоксихолата, а также 2% нормальной сыворотки крысы или мыши. Эту сыворотку вводили опять-таки ради создания эквивалентного соотношения концентраций при последующем добавлении вторичных антител в составе анти сыворотки козы против иммуноглобулинов крысы или мыши Использовав для конкуренции миозин гомологичного и гетеро логичного происхождения, авторы выясняли степень специфич ности антител, синтезируемых гибридомами [ lark et al., 1980] [c.282]

Попытки усовершенствовать технологию переработки картофеля и рационально утилизировать отходы предпринимались и в СССР. В 60-х годах Б. А. Векслером (ВНИИ по производству крахмала) предложена новая технологическая схема производства кормовых дрол<жей на Климовском крахмальном заводе. Клеточный сок картофеля выделяли двумя центрифугами конструкции ВНИИК и польской. В клеточном соке содержалось 3— 4% СВ, 0,2—0,4% (иногда 0,6%) сахаров относительно массы сока. Эксперимент дал отрицательные результаты, так как недостаток сахаров, высокая концентрация в среде мезги и крахмала, использование клеточного сока без стерилизации и отделения коагулирующих белков, приводящее к развитию посторонней микрофлоры и забиванию сепараторов коагулятами, препятствовали нормальному процессу культивирования дрожжей. [c.24]

Микробиологический контроль осуществляется каждые 8—12 ч. При отсутствии посторонней микрофлоры и нормальном развитии мицелия содержимое инокулято-ра передается для засева посевного аппарата большого объема, где аналогичным образом проводится культивирование в течение 24 ч. При хорошем качестве посевного материала он передается для засева ферментера. Среда для ферментера стерилизуется и охлаждается в установке непрерывной стерилизации (УНС), перед засевом проверяются биохимические показатели и стерильность среды. Культивирование в ферментере идет 72 ч. При достижении выхода сухой биомассы 8—15 г/л ферментацию можно считать законченной. Жидкость сливают из ферментера и передают через промежуточный сборник на фильтр. Отфильтрованный от культуральной жидкости мицелий сушат при температуре 45—60 °С на ленточной сушилке, измельчают и упаковывают в крафт-мешки. Возможно использование продукта и в виде прессованной влажной массы. Сухой продукт имеет вид светло-коричневого порошка с грибным запахом, содержит не менее 35% белка, витамины, жиры и может быть использован в пищу как белковая добавка, источник незаменимых аминокислот. [c.177]

Среда Гамборга и Эвелега хорошо подходит для культивирования клеток и тканей бобовых растений и злаков, среда Уайта обеспечивает укоренение побегов и нормальный рост стебля после регенерации, а среда Нича и Нич пригодна для индукции андро-генеза в культуре пыльников. [c.162]

Вероятно, такая специфика связана с эндогенным содержанием фитогормонов и с компетентностью клеток. Однако при длительном культивировании практически у всех тканей может возникать специфическое свойство гормоннезависимости, т.е. автономности по отношению к ауксинам и цитокининам. Эти ткани могут расти на среде без гормонов, что делает их похожими на опухолевые клетки и резко отличает от нормальных каллусных тканей. Внешне же такие гормоннезависимые ткани ничем не отличаются от каллусных. [c.172]

Подобного рода опыты не могли проводиться с еловой древесиной ввиду имевшейся уже значительной степени лигнификации. Однако Вачек с сотрудниками [202] установили, что флоэма, при нормальных условиях никогда не вступающая в цветную реакцию с флороглюцином — соляной кислотой, дала резко выраженную цветную реакцию (в частности, в сердцевинных лучах) после культивирования в среде, содержавшей кониферин. [c.771]

Нарушить последовательность процессов репликации бактериальной хромосомы и клеточного деления также можно, выращивая бактерии при разной температуре. Культивирование Ba illus subtilis на богатой питательной среде при 37 °С приводит к интенсивному делению бактериальной хромосомы и росту клеток, в результате чего в культуре образуются нитевидные клетки, содержащие множество хромосомных копий с отсутствующими совсем или недосформированными (незамкнутыми) поперечными перегородками. При замедлении скорости роста наблюдается деление нитевидных клеток, приводящее к образованию бактериальных клеток нормальной длины. [c.61]

Для получения культур грибов, обильно образующих активные ферменты, особое значение имеет выбор источника азота в питательной среде. Аспергиллы относятся к группе грибов, способных нормально развиваться и образовывать ферменты как на средах со сложными азотистыми веществами, так и с минеральными источниками азота. Поэтому при культивировании этих грибов можно в качестве источников азота использовать аммонийные соли неорганических и органических кислот, нитраты, гидролизаты белков, содержащие аминокислоты, продукты неполного гидролиза белка и сами белки. Усвоение,последних двух источников азота связано со способностью грибов к образованию протеолитических ферментов, которые должны расщепить белки, пептоны и полипептиды до усвояемых аминокислот. Многие исследователи считают кислотные гидролизаты белков наилучшими источниками азота для образования грибами ферментов. Однако высокая активность амилазы в культурах Asp. oryzae достигается и при культивировании на средах с нитратами. [c.139]

Аспергиллы не нуждаются в добавлении к среде витаминов и факторов роста, так как способны сами синтезировать их из более простых химических соединений, содержащихся в среде. Более того, некоторые виды аспергиллов, например Asp flavus, по данным ЦНИИСПа, образует очень большое количество рибофлавина и, следовательно, на применении этого гриба может быть основан биосинтез рибофлавина. Естественные среды, используемые для культивирования грибов, обычно содержат достаточное количество всех питательных Беществ, необходимых для нормального роста гриба. Только к бедным средам, состоящим из отходов производства, иногда добавляют источники углерода, азота и минеральных солей, недостаток которых тормозит развитие гриба и образование им активных ферментных комплексов. [c.140]

Как отмечалось ранее, биологические клеточные объекты представляют собой типичные лиофильные объекты. Для них, в отличие от лиофобных золей, характерно сильное взаимодействие вещества дисперсной фазы с дисперсионной средой. Такое взаимодействие приводит к образованию протяженных сольватных оболочек из молекул иммобилизованной дисперсионной среды вокруг частиц дисперсной фазы. Слизистые оболочки, капсулы и другие поверхностные структуры, образующиеся в результате нормального роста либо при неблагоприятных воздействиях окружающей среды,препятствуют контакту клеток во втором энергетическом минимуме. Например, грамотрицательные бактерии могут образовывать в процессе культивирования полисахаридные оболочки и капсулы, толщина которых порою достигает 400-500 нм [15]. В работе [21] показано, что при pH 4,0 или при наличии в среде 5- 10" моль/л AI I3 достигается изоэлектрическое состояние клеток Е.соИ, однако они не коагулируют из-за стерических препятствий, обусловленных гидратным барьером. Следовательно, адсорбционные слои гидрофильных материалов служат причиной высокой агрегативной устойчивости биоколлоидов. [c.20]

Структурной основой используемого на практике явления служит специфика строения точки роста растений дистальная ее часть, представленная апикальной меристемой, у разных растений имеет средний диаметр до 200 мкм и высоту от 20 до 150 мкм. В более нижних слоях дифференцирующиеся клетки меристемы образуют прокамбий, дающий начало пучкам проводящей системы. Известно, что успех клонального микроразмножения зависит от размера меристематического экспланта, чем больше листовых зачатков и тканей стебля, тем легче идет процесс морфогенеза, заканчивающийся получением целого, нормального пробирочного растения. Вместе с тем зона, свободная от вирусных частиц, очень различна для разных вирусов. Это зависит также от вида и сорта растения. В колеоптиле злаков, например, размеры участка верхушки, не содержащей сосуды, могут достигать до 250 мкм. Такая особенность строения апикальной меристемы исключает проникновение в нее вируса путем быстрого транспортирования по проводящей системе, но допускает возможность медленного распространения через плазмодезмы, соединяющие меристематические клетки. При культивировании апикальной меристемы картофеля величиной 200 мкм на питательной среде и дальнейшее получение из нее растений-регенерантов показали, что среди полученных растений только 10% были свободны от Х-вируса, но 70% — от Y-вируса. [c.116]

Условия культивирования и, в частности, нарушение гормонального баланса питательной среды — одна из причин возникновения генетического разнообразия культивируемых клеток вследствие нарушения клеточного цикла, в частности митоза. От соотношения фитогормонов, входящих в состав питательных сред, во многом зависит цитогенетическая структура клеточных популяций. Однако морфологическая и цитогенетическая разнокачественность клеточных популяций может возникнуть и вследствие влияния отдельных компонентов питательной среды некоторых минеральных солей, сахарозы или другого источника углеродного питания, витаминов, растительных экстрактов, а также от режима выращивания. Длительное культивирование клеток in vitro также способствует повышению генетического разнообразия сомаклонов. Причем для некоторых видов показано, что, несмотря на присутствие в культуре клеток разной плоидности, регенерировавшие растения были преимущественно диплоидными. Это явление было объяснено тем, что в процессе культивирования отбирались растения-регенеранты с более или менее нормальной морфологией, которые регенерировали, как правило, в первую очередь. [c.141]

В принципе подобное сопряжение должно обеспечивать метаболическую кооперацию клеток, так как внутриклеточные малые молекулы, производимые лишь какой-то субпопуляцией клеток данной ткани, могут использоваться и остальными ее клетками. Хотя до сих пор не удалось прямо продемонстрировать такую метаболическую кооперацию in vivo, было показано, что она имеет место в тканевых культурах. Например, мутантные линии клеток, у которых отсутствует фермент тимидинкиназа, не способны включать в ДНК радиоактивный тимидин. Но радиоавтография после добавления в среду радиоактивного тимидина показывает, что при совместном культивировании таких клеток с нормальными клетками (клетками дикого типа), имеющими тимидинкиназу, ДНК мутантных клеток, непосредственно соприкасающихся с нормальными, оказывается меченой (рис. 12-30). Это означает, что какой-то предшественник ДНК, содержащий радиоактивный тимидин, переходит из клетки дикого типа в контактирующие с ней мутантные клетки. В аналогичных экспериментах с мутантными клетками, неспособными образовывать щелевые контакты, подобной метаболической кооперации не наблюдается. [c.215]

Необходимо подчеркнуть, что принцип двухфазности развития большинства микроорганизмов — продуцентов антибиотических веществ характерен для нормально развивающихся культур. Иными словами, эта закономерность имеет место при развитии микроорганизмов в условиях периодического культивирования в среде, которая в процессе роста продуцента антибиотика изменяется самим организмом, а не экспериментатором, и организм засевается в субстрат не на стадии биосинтетической активности (40-96 ч), а спорами или молодыми (не более 20-24 ч) вегетативными клетками (мицелием). При засеве среды большими объемами относительно старого по возрасту посевного материала (40 ч и более) эта двухфаз-ность нарушается. При внесении больших объемов уже продуцирующего антибиотик мицелия и культуральной жидкости, обогащенной продуктами жизнедеятельности организма, естественно, трудно ожидать наступления первой фазы, так как она уже закончилась в процессе подготовки посевного материала. [c.99]

Грамицидин С, добавленный к среде для культивирования В. ba illus в концентрации от 30 до 100 мкг/мл, тормозит или, наоборот, ускоряет процесс спорообразования клеток этого организма. Например, при внесении антибиотика в концентрации 30 мкг/мл в среду, в которой происходит нормальный синтез грамицидина С культурой В. ba illus Р -варианта, или при ингибировании процесса биосинтеза (среда с р-фе-нил-р-аланином) через 13 ч развития бактерий наблюдается заметная стимуляция спорообразования изучае- [c.109]

Можно регенерировать трансформированные растения из косматых корней, индуцированных у определенных видов (приложение 2[УП1]). Из некоторых корончатых галлов дикого типа, индуцированных у определенных видов (тополь и люцерна), тоже удалось регенерировать трансформированные растения с нормальной морфологией и фертильностью. Таким образом, если в качестве помощника уг>-функций бактериального хозяина используют штаммы А. rhizogenes или А. tumefa iens, содержащие Ri- или Ti-плазмиды дикого типа, то можно разработать среды -и условия культивирования, позволяющие регенерировать из опухолей резистентные к антибиотику трансформированные побеги. Часть последних может утратить онкогенную Т-ДНК и представлять собой морфологически и физиологически нормальные побеги (сведения относительно отдельных видов даиы в приложении 2[Vni]). [c.115]

Микроинъецированные протопласты можно культивировать различными способами. Полагают, что частота трансформации среди выживших клеток довольно высока, поэтому основная проблема заключается в культивировании небольшого количества клеток для обеспечения нормального образования колоний и регенерации побегов. [c.230]

Обычно клетки из первичных эксплантатов здоровых тканей проявляют себя как нетрансформированные в течение первых генераций после выделения. Некоторые клетки остаются такими в течение 50 генераций и более. Такие нормальные клетки требуют обязательного присутствия в определенных количествах высокомолекулярных белков, гормонов и факторов роста даже при культивировании в улучшенных средах. Трансформированные клетки могут расти без ростовых факторов при условии обеспечения незаменимыми неспецифическими добавками. Появляется все больше данных о том, что опухолевые клетки способны стимулировать собственную пролиферацию, продуцируя аутокринные ростовые факторы. [c.43]

Незараженная микоплазмами линия В95-8 растет в виде. монослоя, обладающего слабой адгезивностью к подложке. Для культивирования используют среду RPMI-1640, содержащую 8% сыворотки плода коровы (СПК) и стандартную добавку L-глутамина, антибиотиков и, если необходимо, фунгицидов. Как правило, линию выращивают в стандартных флаконах для культивирования, поместив их горизонтально в термостат во влажную атмосферу, содержащую 5% СОг. Для рассева культуры нужно плотно завернуть крышку и, встряхивая флакон, добиться отделения части клеток от пластика, затем перенести их в новый флакон. При нормальной скорости роста это надо делать 1—2 раза в неделю. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология