Ретикулоциты кролика

Получение бесклеточной системы трансляции из ретикулоцитов кролика, обработанной микрококковой нуклеазой [c.221]

Факторы инициации ретикулоцитов кролика [c.363]

Ф н г. 203. Кривая седиментации в градиенте плотности сахарозы рибосом, освобожденных после лизиса и умеренного гомогенизирования клеток ретикулоцитов кролика, к которым за 45 с до лизиса (при 37 С) добавили С-аминокислоты. [c.409]

Все реакции типа (ХХ.З) протекают в цитоплазме. Ранее мы приводили соображения, из которых следует, что синтез белка должен осуществляться в рибосомах при участии активированных аминокислот и молекул-адаптеров. Подобной молекулой-адаптером, в состав которой входит активированная аминокислота, служит аминоацил-РНК. Необходимым этапом синтеза является перенос этого комплекса в рибосому и сборка белковой молекулы на РНК-матрице. Этот процесс катализируется особым ферментом переноса, который, по-видимому, обладает малой специфичностью. Фермент переноса, выделенный из бактерий, катализирует перенос аминоацил-РНК, полученной из любого источника, в рибосому бактерии (но не в рибосому животного). Аналогично фермент из кролика катализирует перенос аминоацил-РНК бактерии в рибосомы кролика. Таким путем можно, в частности, осуществить синтез гемоглобина в рибосомах, выделенных из ретикулоцитов кролика. Складывается впечатление, что ферменты переноса до некоторой степени специфичны по отношению к типу рибосом, но значительно менее специфичны к промежуточным комплексам. [c.373]

Рис. 86. Распределение полисом из ретикулоцитов кролика на фракции при центрифугировании

Р—меченые нуклеиновые кислоты из клеток млекопитающих (ретикулоцитов кролика) [c.250]

Р и с. 10.4. Схема выделения различных РНК из ретикулоцитов кролика. [c.251]

Фиг. 205. Кривая седиментации в градиенте плотности сахарозы рибосом, выделенных из ретикулоцитов кролика так же, как описано в подписи к фиг. 203, но подвергну-"ых перед центрифугированием краткой обработке рибонуклеазой.

Рис. 120. Электрофорез РНК в гелях различной концентрации [777]. На каждый гель наносили 40 мкг РНК, полученной из полисом ретикулоцитов кролика. Концентрация геля составляла 2,2% (А), 2,4% (Б), 2,6% (В). 3.0% (Г), 3.5% (Д), 5% ( ), 7.5% (Ж).

Фактор элонгации EF-1 из ретикулоцитов кролика после предварительного фракционирования суиернатанта осаждением сульфатом аммоння очищали на колонке гепарин-сефарозы сначала в статическом режиме. Элюцию вели 0,25 М раствором КС1 в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с 2 мМ -меркаптоэтанола. Очистку на гепарин- [c.423]

Белки, снятые с рибосом промывкой 0,5 М КС1, фракционировали осаждо-нием раствором сульфата аммония между 40 и 50% от насыщения, диализовали против буфера, содержавшего 0,1 М КС1, 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,6), 14 мМ -меркаптоэтанола, 10% глицерина и 0,1 мМ ЭДТА, и вносили в колонку (10 X 1,5 см) с рибосомальной РНК из ретикулоцитов кролика, иммобилизованной на целлюлозе Whatman F-11 с помош ью УФ-облучепия. Колонку уравновешивали и промывали тем же раствором. Элюцию вели линейным градиентом (200 мл) 0,1—0,5 М КС1 в том же буфере со скоростью 1 мл/мин. Фактор eIF-2 выходил при концентрации соли около 0,32 М. [c.424]

Геминконтролируемая инициация трансляции в ретикулоцитах. Давно было известно, что синтез белка (главным образом, гемоглобина) в ретикулоцитах кролика и других млекопитающих, а также в лизатах ретику-лоцитов и ретикулоцитных бесклеточных системах требует присутствия гемина. В отсутствие гемина синтез белка быстро затухает. [c.259]

Предшественник белка (Р23) головки бактериофага Т4 Белковый фактор, стимулирующий ДНК-зависимый синтез РНК из побегов гороха и кукурузы Белковые фракции из пострибосо-мальных супернатантов ретикулоцитов кролика и печени крысы Белки из бесклеточных экстрактов Es heri hia oli [c.357]

В настояшее время считают установленным, что код универсален, т. е. что один и тот же код действует у всех живых суш,еств [53, 191]. Например, гемоглобин можно синтезировать в системе, содержап1,ей s-PHK из Е. oli и рибосомы из ретикулоцитов кролика [69, 70]. [c.277]

Полисомы были впервые обнаруя ены в ретикулоцитах кролика, участвующих в синтезе гемоглобина I64, 79, 86, 87, 93 — 95, 178]. Если осторожно разрушить оболочки ретикулоцитов, меняя осмотическое давление раствора, то полисомы высвобождаются в виде комплекса с коэффициентом седиментации 1703 по-видимому, они состоят из пяти рибосом на нити т-РНК. Этот комплекс можно обнаружить с помощью электронного микроско- [c.280]

Поглощение аминокислот наблюдали и в других экспериментальных системах. Так, например, было найдено, что срезы коры головного мозга морской свинки накапливают L-глутами-новую кислоту против градиента концентрации [24]. L-Глутамин поглощался корой головного мозга значительно быстрее, однако конечные концентрации аминокислоты в ткани в опытах с глутаминовой кислотой и глутамином были примерно одинаковы. В опытах с глутаминовой кислотой нарастание ее концентрации в ткани прекращалось, когда разность между концентрациями кислоты в ткани и в окружаюш,ей среде составляла около 0,02 М. Эритроциты человека и утки, а также ретикулоциты кролика способны концентрировать аминокислоты. Активность ретикулоцитов кролика подавляется 2,4-динитрофенолом и цианидом на концентрирование аминокислот эритроцитами человека и утки эти агенты почти не оказывают влияния 125, 26]. [c.167]

Опубликованы также данные о наличии в некоторых клетках соединений, активирующих включение аминокислот. Например, включение аминокислот в белки ретикулоцитов кролика in vitro повышается при добавлении кипяченого водного экстракта из высушенной печени или фильтрата кипяченой плазмы крови. Активирующими соединениями являются, по-видимому, фрукто-зоаминокислоты, имеющие следующую структуру [c.279]

Универсальность кода. Было показано, что почти все 64 триплета при их испытании в бесклеточных системах несут какую-то смысловую нагрузку. Это делает естественным предположение, согласно которому какие-то черты генетического кода носят универсальный характер. Более того, гетерологич-ные бесклеточные системы (т. е. системы, содержащие рибосомы из организма одного вида, а транспортные РНК и активирующие ферменты — из организма другого вида) способны синтезировать полипептиды так же эффективно, как и соответствующие гомологичные системы, что опять-таки свидетельствует об универсальности кода. Имеются также косвенные данные, говорящие о том, что смысл данного кодона сохраняется неизменным для разных систем. Наконец,, было показано, что белоксинтезирующая система из Е. olt способна транслировать информацию, содержащуюся в РНК из вируса растений. Данные, полученные в опытах на Е. oli и других бактериях, на вирусах, дролоках, проростках растений, ретикулоцитах кролика, печени крысы, гемоглобине человека и т. д., убедительно подтверждают предполо- [c.499]

Время полужизни. Стабильность молекул РНК может варьировать в широких пределах. У высших организмов она в среднем намного выше, чем у бактерий. Такое различие, очевидно, частично обусловлено тем, что биосинтез белков у высших организмов протекает более медленно (при 37° в ретикулоцитах кролика за одну секунду включаются в белок 2 аминокислоты, а.у Е. oli — 100 аминокислот). Стабильность различных молекул тя-РНК может заметно варьировать даже в пределах одной и той же клетки. Молекулы РНК некоторых РНК-содер кащих фагов могут непосредственно выполнять роль /тг-РНК, не разрушаясь в течение жизненного цикла фага в зараженной бактериальной клетке (30—55 мин при 37°). У высших организмов т-РНК еще более стабильна. Активный цитоплазматический комплекс, состоящий из ге-РНК, рибосом и s-PHK, может, вероятно, функционировать непрерывно в течение нескольких дней в некоторых случаях синтез белка на стабильных РНК-матрицах происходит даже в отсутствие ядерной ДНК (эритроциты млекопитающих) и без сколько-нибудь заметного обновления РНК. [c.504]

О последней стадии синтеза белка — сборке белковой молекулы на рибосомах — предстоит еще выяснить очень многое. Информационная РНК, по-видимому, стимулирует агрегацию 70 5-рибосом. Эксперименты с введением меченых аминокислот в ретикулоциты кролика показывают, что для синтеза полипептидной цепи гемоглобина, происходящего последовательно в линейном порядке, начиная с аминного конца цепи, требуется 1—2 мин. Многие детали этой и других стадий синтеза белка еще неизвестны. Исследования этой сложной проблемы развиваются очень интенсивно, и мы привели здесь лищь беглый обзор полученных к настоящему времени результатов. [c.375]

Характерным примером такого исследования служит работа Гулда с сотр. (Gould et а/.,, 1969), которые обрабатывали 19 и 0 5 рРНК ретикулоцитов кролика [c.153]

Единственная существенная проблема в описанном выше подходе к фрагментации РНК заключается в том, чтобы в каждом опыте получать одинаковые фрагменты. В случае рРНК дополнительную гарантию воспроизводимости фрагментации можно получить, действуя нуклеазами на целую рибосому (Сох, 1969). Было найдено, что при обработке рибосом ретикулоцитов кролика панкреатической РНК-азой теряется 20-30% рибосомной РНК, однако при этом не наблюдается заметного изменения коэффициента седиментации рибосом или их вида на электронных микрофотографиях. Размеры фрагментов РНК, выделенных после нуклеазной обработки рибосом, указывают на то, что в большой субъединице рибосомы имеется около 40, а в малой - примерно [c.154]

Код является универсальным, т. а. обш,им для белкового синтеза организмов всех типов. Это подтверждается тем, например, что бесклеточ-ная система, составленная на основе клеточных элементов из Е. oli и ретикулоцитов кролика, способна синтезировать гемоглобин, который идентичен белку, образуюш емуся в организме кролика [c.487]

Таким образом, был получен совершенно неестественный комплекс между аланином и цистеиновой тРНК. Этот комплекс они добавили к другой реакционной смеси, содержащей полирибосомы ретикулоцитов кролика, АТФ, набор нерадиоактивных стандартных аминокислот, а [c.419]

В качестве бесклеточной системы для синтеза белка можно использовать зависимый от мРНК лизат ретикулоцитов кролика, приготовленный, как описано Престоном [30], или коммерческий препарат лизата. Для контроля следует параллельно получить мРНК из незараженных клеток. [c.155]

Относительная легкость получения большого количества мРНК реовируса привела к тому, что последние широко использовались для изучения функций мРНК вообще и соответственно транслировались в разнообразных бесклеточных системах. В большинстве случаев наиболее удобен лизат ретикулоцитов кролика, обработанный микрококковой нуклеазой для подавления эндогенного синтеза белка. Если планируется небольшая работа по трансляции in vitro, наиболее удобно, по-видимому, купить компоненты бесклеточной системы у поставщика и пользоваться системой в соответствии с его рекомендациями. Исследователи, планирующие работу большего масштаба, найдут краткое описание метода получения лизата ретикулоцитов кролика в приложении к данной главе. [c.215]

Смотреть страницы где упоминается термин Ретикулоциты кролика: [c.423] [c.211] [c.562] [c.199] [c.86] [c.31] [c.153] [c.169] [c.225] [c.250] [c.191] [c.280] [c.409] [c.507] [c.105] [c.123] [c.94] [c.54] [c.324] [c.391] [c.386] [c.58] [c.215]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология