Разделение и концентрирование аминокислот

В. М. Лауфер показали, что необходимо специальное исследование физиологической безвредности ряда анионитов, например, ММГ-1, ТН и других. Во всяком случае, применение ионитов, открывает новые возможности перёд медициной и позволяет вмешиваться по новому в ряд важных биохимических и физиологических процессов, протекающих в организмах человека, животных и растений. Метод ионного обмена позволяет более тонко и дифференцированно изучать различные процессы жизнедеятельности, протекающие в организме. Наиболее важным является возможность разделения, концентрирования аминокислот, витаминов, антибиотиков. Ионообменные смолы можно также применять для медицинской диагностики различных заболеваний, для очистки антител при помощи антигенов, связанных с зернами ионитов, и в других случаях. [c.276]

ЭТОМ оказалось, что оптимальная скорость элюирования основных аминокислот достигается лишь при использовании более концентрированных буферных растворов. Однако при значительном изменении концентрации и pH буфера наблюдалось увеличение объема набухшего ионита и возрастание гидродинамического сопротивления колонки. Одновременно повышался уровень базовой линии. Кроме того, в этих условиях после каждого опыта приходилось извлекать иониты из колонки, а затем, после их регенерации, вновь набивать колонку. В итоге оказалось удобнее проводить анализ образца на двух колонках. На первой осуществляли анализ кислых и нейтральных аминокислот, а сумму основных аминокислот вытесняли в конце анализа гидроокисью натрия. На второй, более короткой колонке вначале в виде суммарного пика элюировали смесь кислых и нейтральных аминокислот, а затем осуществляли разделение основных аминокислот. После получения более качественных ионитов и усовершенствования метода детектирования был разработан современный одноколоночный аминокислотный анализ. [c.306]

РАЗДЕЛЕНИЕ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТ [c.118]

В случае лигандообменной хроматографии [170 —173] применяют хи-ральные полимерные носители, которые содержат ионы переходных металлов (Си " , и др.), координационно связанные оптически активными аминокислотами так, что остаются ненасыщенные координационные связи. В ходе разделения свободные координационные связи занимаются лигандами подвижной фазы. Таким образом был разделен ряд оь-аминокислот на полистирольных смолах с ь-пролином, сульфированным фенилаланином (174], ь-гидроксипролином [175] и другими энантиомерами аминокислот в качестве фиксированных лигандов. Некоординированные энантиомеры элюировались в виде комплекса с ионом Си " , координированные энантиомеры вымывались концентрированным аммиаком. [c.63]

Для количественного определения аминокислот в отличие от обычной количественной ГХ важно парциальное содержание в смеси не аминокислотного производного, а исходной аминокислоты. Ошибки всех операций, проводимых перед разделением и идентификацией, оказываются включенными в общую ошибку конечного аналитического результата. Поэтому превращение аминокислот должно быть количественным или по крайней мере количественно воспроизводимым. Большие различия в выходах, даже если они воспроизводимы, заведомо усложнят работу и сделают ее чрезвычайно трудоемкой. Как показано при исследовании образования бутиловых эфиров ТФА-аминокислот, средние выходы для определенных аминокислот почти не отличались друг от друга и составляли около 96% [16, 53]. Однако при получении летучих ТФА-метиловых эфиров Ала, Гли и Вал происходили значительные потери вещества даже при аккуратном концентрировании образцов [19, 53]. Если для аминокислотного анализа выбраны производные с высокой летучестью, подобных операций лучше изрыгать. [c.336]

В биологии и агропромышленной сфере хроматографическое разделение и концентрирование используют перед количественным определением микроэлементов, а также для обнаружения пестицидных соединений в окружающей среде. При технологическом контроле пищевых производств хроматография служит для очистки веществ, анализа смесей органических кислот, аминокислот и других продуктов. [c.417]

По-видимому, для частичного анализа аминокислот алифатического класса может быть использован метод дезаминирования аминокислот до оксикислот действием концентрированной азотистой кислоты [22] или окислением а-аминокислот смесью соляной и азотной кислот с последующим анализом соответствующих а-хлоркислот [23]. Для удовлетворительного разделения хлор-и оксикислот желательно модифицировать стационарную фазу путем добавления какой-либо неорганической кислоты, в частности фосфорной, или переводить эти кислоты перед хроматографированием в соответствующие эфиры [24, 25] (рис. 5). [c.260]

Общие черты процесса разделения и концентрирования основных аминокислот на колонке ионообменной смолы заключается в следующем (Блок, сб. Ионный обмен , 1951). [c.122]

Эрхардт и Крамер [148] продемонстрировали применение ТСХ при разделении КБО-аминокислот, а также соответствующих производных пептидов и эфиров пептидов. Эти производные играют важную роль в синтезе пептидов, а следовательно, весьма важно уметь отделить их друг от друга и от непрореагировавших компонентов. Для их разделения применяли различные с.меси н-бутанол—уксусная кислота—5 %-ный гидроксид аммония, н-бутанол—уксусная кислота—вода—пиридин или гидроксид аммония. Если элюент представляет собой двухфазную смесь, то в камеру для разделения помещают обе фазы, но силикагель должен при этом контактировать только с верхней фазой. Эрхардт и Крамер [148] приводят список соединений с их величинами Rf (табл. 17.9). По окончании разделения пластинки сушат 10—15 мин при 120—150°С, после чего еще горячими опрыскивают 0,2 %-ным раствором нингидрина в 95 %-ном н-бутаноле, к которому добавляют 5 % 2 н. уксусной кислоты. Это приводит к разложению аминокислот, пептидов и гидрохлоридов эфиров аминокислот. Пластинки затем вновь нагревают до 120— 150°С и опрыскивают насыщенным раствором бихромата калия в концентрированной серной кислоте. При этом пятна КБО-про-изводных пептидов или аминокислот, содержащих фенильные группы, окрашиваются в темно-зеленый цвет. (Иногда пластинки после опрыскивания окислительной смесью нагревают на горячей плитке.) [c.507]

Применение ионитов для разделения основных аминокислот может итти по двум направлениям приготовление смесей для концентрирования в технических масштабах аргинина, гистидина II лизина и разделение основных аминокислот для целей анализа. [c.305]

Для разделения аминокислот (гидролизата белка) методом тонкослойной хроматографии широкое применение находят пластинки, покрытые тонким слоем ионообменной смолы полистирольной природы с сульфокислотными группировками (типа Дауэкс 50X8 ) или ионообменной целлюлозой. Такие пластинки выпускаются промышленностью, например Фиксион 50x8 (Венгрия), или могут быть приготовлены в лаборатории. В этих пластинках катионообменная смола находится в Na-форме. Пластинки стабильны в водных и органических растворителях, инертны по отношению к окислителям и восстановителям, но подвергаются воздействию щелочей и концентрированных кислот. [c.133]

Глутаминовая кислота, например, кристаллизуется прямо из концентрированного гидролизата, насыщенного хлористым водородом, цистин и тирозин отделяют благодаря их плохой растворимости в воде. Селективное отделение ароматических аминокислот удается выполнить с помощью адсорбции на активированном угле. Полученную при гидролизе смесь аминокислот лучше всего разделить хроматографически. Выделению отдельных компонентов предшествует обычно разделение на кислые, основные и нейтральные группы аминокислот, при этом большое значение имеют электрофорез и специфические иоиообменники. Раннее распространенные методы разделения, такие, как фракционная перегонка эфиров (по Фишеру), экстракция моноаминокарбоновых кислот н-бутиловым или амиловым спиртом (по Дакину), осаждение гексоновых оснований лизина, аргинина и гистидина фосфорновольфрамовой кислотой или флавиановой кислотой, теперь имеют только второстепенное значение. [c.39]

Применению ионообменных сефадексов препятствует их неустойчивость, очень медленная скорость сорбции, неполнота десорбции. Выгоднее сочетать методы разделения по химической природе соединений на ионообменных целлюлозах, а также разделение по размерам молекул на нейтральных сефадексах. Предложена схема систематического анализа, основанная на сочетании методов разделения исследуемых веществ по химической природе на ионообменных целлюлозах с последующим разделением определенных классов веществ на нейтральных сефадексах. На ионообменных целлюлозах можно разделить растворенные органические вещества природных вод на три группы кислотную, основную, нейтральную причем для кислотной и основной групп получают высокую степень абсолютного концентрирования. Разделение веществ сходной химической природы на нейтральных сефадексах облегчает определение индивидуальных веществ во фракциях (фульвокислоты и низкомолекулярные кислоты, фенолы и полифенолы, белки и аминокислоты, полисахариды и моносахара). [c.200]

КБ-4 представляет собой слабокислотный катионит получают щелочным омылением сополимера метакриловой кислоты и диви-тшлбензола. Механическая и химическая стойкость катионита очень высокая катионит выдерживает длительное нагревание с концентрированными растворами щелочей при температуре 200°. Может быть применен для поддержания постоянного pH а процессе смягчения высокоминерализованной воды (вплоть до. морской), для извлечения из растворов металлов и разделения аминокислот. Кроме марки КБ-4 выпускается еще ионит марки КБ-4П-2 для сорбции крупных органических молекул, например антибиотиков. [c.62]

Близко к цели подошел Холли, работающий методом противоточного распределения Крэга. С помощью каскада из 150 элементов ему удается почти полностью расфракцпонировать РРНК на компоненты — акцепторы, специфичные к определенным аминокислотам. Распределение осуществляется в каждом элементе между двумя жидкими фазами — концентрированным фосфатным буфером II органической фазой, состоящей из 80% изопропилового спирта и 20% формамида. Уже небольшое число элементов (6—10) позволяет разделить некоторые типы РРНК. Для полного разделения требуется большой каскад. [c.434]

Зайлер и Вейхман [133] исследовали разделение 1-диметилам ино-5-нафталинсульфаниламинокисл от (ДАНС-аминокислот) [134] на тонких слоях силикагеля. Используя метод двумерного хроматографирования смесями метилацетат—изопропанол—концентрированный аммиак (9 7 4) (в одном направлении) и хлороформ—метанол—уксусная кислота (15 5 1) или хлороформ— этилацетат—метанол—уксусная кислота (30 50 20 1) (в другом направлении), они добились почти полного разделения смеси 30 производных аминокислот. Перед вторым элюированием пластинки сушили 10 мин при 100°С. Поскольку вводимая в аминокислоту группа достаточно велика, метод отличается высокой чувствительностью. Таким способом при двумерном хроматографировании удается определить 10 ° моля кислоты желтые флуоресцирующие пятна становятся заметными в УФ-свете на еще влажной хроматограмме. [c.504]

Применение ионного обмена в аналитической химии началось уже давно. Но лишь в последнее время ионный обмен получил значительное развитие в связи с появлением многочисленных ионитов, значительно различающихся по своим свойствам. Так, гидратированный алюмосиликатный катионит (реактив Ллойда) широко применяется для удаления аммиака перед определением мочевины [173] и для апалитического разделения аминокислот [58]. Концентрирование растворов микроэлементов на таких катионитах, как алюмосиликаты [1] и фильтровальная бумага [114], широко используется уже на протяжении многих лет. Важное значение в аналитической практике имеет применение методов ионного обмена для изучения природы осадков в весовом анализе [294], при изучении механизма стеклянного электрода [145] и для выяснения источников ошибох при измерениях со стеклянным электродом в разбавленных небуферных растворах [145]. Ионным обменом объясняют также изменения, возникающие при хранении весьма разбавленных растворов в стеклянной посуд [26, 28, 478]. Эти применения имели, однако, в аналитической химии весьма небольшое значение по сравнению с их применением в настоящее время. Синтез ряда ионообменных смол, содержащих различные функциона,льные группы и в некоторых случаях отличающихся высоко чистотой ( для анализа ), значительно способствовал широкому примепепию иоп1 тов в аналитической химии. [c.120]

Сборник статей но теорпп н применений) ионного обмена. Описано применение ионного обмена для очистки води, сахарных сиропов, для разделения и анализа сложных органических веществ (аминокислоты, алкалоиды). Дано описание ионного обмена для концентрирования и извлечения металлов из руд, а также для разделения редкоземельных элементов. [c.4]

Аминокислоты можно также анализировать, вводя С1 в а-положение хлор, путем обработки смесью концентрированной соляной и азотной кислот [35]. Хлорированные кислоты переводят затем диазометаном в их метиловые эфиры и подвергают хроматографическому разделению. Лучшего разделения сложных смесей достигают, проводя анализ на 2-метровой колонке с полиэтиленгликолем и затем на 2-метровой колонке, содержащей смесь силиконового масла и стеариновой кислоты. При таком сочетании удается разделить производные а-аланина, глицина, а-аминомасляной кислоты, валина, норвалина, лейцина, изолейцина и норлейцина при температуре 130 и скорости потока водорода 2,6 л/час. [c.541]

Шау и Рилей [9] использовали ТСХ для разделения аминокислот, содержавшихся в образцах морской воды. Сначала, тотчас после отбора пробы морскую воду фильтровали через мембранный фильтр с размерами пор 0,5 мкм. После этого воду нагревали до 60 °С в течение 1 ч, охлаждали и,доводили до рН=4,0 добавлением НС1. Для ингибирования микробиологической активности к пробе добавляли хлороформ в количестве 1 мл/л. Затем 2,5 л морской воды упаривали в пленочном испарителе до объема 400—800 мл. Концентрирование продолжали в пленочном роторном испарителе при температуре жидкости выше 40 °С. Соль периодически удаляли фильтрацией промывной смесью, состоящей из этанола, воды и НС1 (конц.) (80 20 1). Концентраты и промывную жидкость вновь подавали в испаритель и упаривали досуха. Сухой остаток растворяли в 500 мл воды и пропускали через колонку с кислой формой катионообменной смолы амберлит G-120 (100/200 М ш). После этого через колонку пропускали 0,1 Л1 раствор пиперидина (8,5 г дважды перегнанного пиперидина а л). Первые 600 мл элюата отбрасывали. Элюирование проводили до тех пор, пока элюат не приобретал щелочную реакцию (по лакмусу) и из колонки не выходил фронт пиперидина. Затем отбирали дополнительно 200 мл элюата. Объединенные растворы общил объемом около 3 л упаривали до небольшого объема в роторном испарителе, концентрат переносили в 10-миллилитровую грушевидную колбу и упаривали почти досуха. Образовавшийся коричневый осадок рас-теоряли в 10 мл воды и снова пропускали через ионообменную колонку. Элюирование проводили 0,1 М пиперидином. Полученный элюат упаривали почти досуха. Подготовку полученной пробы для ТСХ разделения проводили следующим образом. Около 0,5 мл почти бесцветного концентрата переносили при помощи стеклянной трубки с оттянутым концом в ампулу длиной 7,5 см и внутренним диаметром 6 мм. Туда же добавляли небольшое количество воды, -которой обмывали колбу. Ампулу нагревали на водяной баНе, для ускорения процесса через раствор пропускали азот. После удаления воды к сухому остатку добавляли 50 мкл 0,1 н. НС1, содержавшей 10% изопропанола по объему. Ампулу запаивали на расстоянии 2,5 см от дна и помещали в стакан с горячей водой, где проводили встряхивание в течение 5—6 ч. После это- [c.464]

Широкое развитие и применение хроматографических методов анализа объясняется весьма большой гибкостью и легкой изменяемостью условий осуществления хроматографического процесса при различной физической основе (адсорбция, ионный обмен, распределение, осаждение, комплексообразование, редоиспроцеосы, электронообменные смолы, воздействие теплового или электрического поля и другие возможные случаи). Это позволяет использовать метод для решения ряда практически важных вопросов 1) полного разделения наиболее сложных смесей, например аминокислот 2) испытаний веществ на их однородность 3) концентрирования рассеянных элементов (золота, серебра) 4) разделения лантанидов, актинидов 5) идентификации сплавов (маркировки сплавов) [c.22]

Современные направления в аминокислотном анализе стремятся избегнуть методов разделения с участием твердых фаз, которые медленно достигают равновесия, трудно регулируемы и являются неудобными для повторения фракционирования (например, фракционированной кристаллизации, которая является чрезвычайно трудоемкой процедурой). Аминокислоты в растворах можно перемещать в заданном нап эавлении в электрическо.м поле. Равновесие может быть быстро достигнуто ири использовании ионного обмена или адсорбции из растворов на твердой поверхности, пли распределения между двумя жидкими фазами, позволяющими применить хроматографические методы. Ионофоретический и хроматографический методы имеют особые преимущества, так как с их помощью концентрирование и очистка могут быть проведены сравнительно простылги приемами. В комбинации они, вероятно, представляют собой весьма плодотворный метод анализа. Они имеют особые преимущества перед методами, дающими определение отдельных аминокислот, так как позволяют обнаружить новые неожиданные аминокислоты в смеси. [c.62]

Хроматографическое разделение аминокислот. Концентрированный элюат (30,00-50,00 мм ) микропипеткой наносят на линию старта хроматографической бумаги. Бумагу подсушивают на воздухе и помещают в камеру для нисходящей хроматографии (рис. 51). Проводят хроматографирование с 2-3-кратным пропусканием растворителя. [c.376]

На практике на бумагу наносят несколько микролитров относительно концентрированного раствора образца на расстоянии 1—2 см от края и растворитель испаряют. На одну полоску бумаги можно нанести пятна нескольких образцов и стандартных вен1,еств на расстоянии 1—2 см друг от друга. Следующий этап состоит в хроматографировании. Бумагу помещают в закрытый сосуд с растворителем (слой толщиной 1 см), стараясь, чтобы конец бумаги был опун1,ен в растворитель, но пятна веществ были выше уровня жидкости. Сосуд закрывают для создания в нем атмосферы, насыщенной парами растворителя. Под влиянием капиллярных сил растворитель поднимается вверх по бумаге и переносит компоненты образца со скоростями, определяемыми коэффициентами распределения, в результате чего происходит их разделение. Когда фронт растворителя достигнет необходимой высоты (около 2/3 или 3/4 длины полоски бумаги), хроматографирование считается законченным, бумагу вынимают из сосуда и высушивают. Пятна компонентов проявляют, обрабатывая бумагу раствором реагента. При этом получаются окрашенные или флуоресцирующие продукты. Так, например, для определения аминокислот используют нингидрин. [c.286]