Фоновые клетки

Значение адаптации рецепторов заключается в том, что она позволяет животному получать точную информацию об изменениях в окружающей среде. Если этих изменений нет, то сенсорные клетки молчат , что предотвращает перегрузку ЦНС потоком ненужной информации. Благодаря этому повышается общая эффективность и экономность работы центральных механизмов — они могут игнорировать статическую фоновую информацию и сосредоточиться на восприятии внешних событий, имеющих жизненно важное значение. [c.318]

Некоторые мутации возникают в результате нормальных процессов в клетке или при взаимодействии с окружающей средой. Такие мутации называют спонтанными мутациями они с определенной частотой встречаются у любого организма. Частоту мутаций можно увеличить, воздействуя некоторыми соединениями. Наследственные изменения, возникшие под действием таких соединений, называют индуцированными мутациями, а сами соединения-мутагенами. Большинство мутагенов действует, прямо реагируя с определенными азотистыми основаниями или включаясь в нуклеиновую кислоту. Об эффективности мутагена судят по его способности увеличивать спонтанную ( фоновую ) скорость мутирования. [c.37]

На рис. 12.8 отчетливо выявляется группа немеченых клеток. Такие клетки содержат обычно менее чем одно зерно (в среднем) на клетку, и такое же число зерен обнаруживается над соответствующими участками предметных стекол, не содержащими клеток. Общепринято рассматривать число зерен над такими контрольными участками в качестве меры фонового счета. [c.179]

День проведения -эксперимента по слиянию обозначают как нулевой день — день 0. На Д, 2 и 3-й день после слияния осторожно заменяют по 1 мл среды из каждой лунки на 1 мл среды ГАТ. Важно не потревожить клетки в лунках, в частности, избежать перемещения клеток на одну сторону лунки при добавлении свежей среды. Это существенно по двум причинам. Во-первых, в результате обеспечивается возможность спокойного (без активации) роста фоновых клеток, что способствует росту гибридом. Во-вторых, на более поздних стадиях можно видеть, происходит ли в лунке рост одной или нескольких колоний гибридных клеток. [c.131]

Оставляют клетки селезенки в универсальном контейнере на ночь при комнатной температуре в ламинарном боксе для стерильных работ. Преимущество этой процедуры заключается в том, что она позволяет экспериментатору на следующий день проверить спленоциты под микроскопом и убедиться, что они не загрязнены. Вероятно, это подавляет и рост фоновых клеток селезенки в лунках, где проводят клонирование. [c.142]

Для доказательства того, что антиген не стимулирует пролиферации В-клеток, необходимо включить следующие контроли а) предварительную обработку клеток лимфатических узлов сывороткой анти-Thy-1.2 с комплементом (в этом случае следует ожидать, что включение тимидина не превысит фонового уровня) б) определение в культуре антиген-специфических антителообразующих клеток методом локального гемолиза (следует ожидать незначительного фонового уровня) в) окрашивание стимулированных клеток конъюгированной с флуоресцеином сывороткой к мышиному Ig (пролиферирующие клетки должны быть Ig-). [c.324]

Затем на клетки наносят 10 мкл флуоресцирующей. сыворотки (например, сыворотки кролика против иммуноглобулинов хомяка), разведенной в 10—100 раз PBS, содержащим 5% ЭТС. Такие сыворотки поставляются различными фирмами. Однако в любом случае они должны быть предварительно протестированы для подбора оптимального разведения, позволяющего получить максимальную специфическую флуоресценцию с минимальной фоновой. Стекла инкубируют 30 мин при комнатной температуре, а излишек сыворотки отмывают в трех сменах PBS. Для заключения препарата на чистое, обработанное спиртом предметное стекло наносят смесь глицерина с PBS в соотношении 9 1 (объем на объем). Затем высушенное с обратной стороны фильтровальной бумагой покровное стекло накладывают (клетками вниз) на каплю смеси глицерина с PBS на предметном стекле. Заключенные препараты можно хранить в темноте несколько дней. Если препараты не заключают в смесь глицерина с PBS, их необходимо просматривать немедленно после высушивания. [c.244]

По-видимому, в организме животных и человека присутствуют фоновые клетки, образующие антитела против самых разнообразных антигенов. В крови постоянно обнаруживаются в ничтожных количествах так называемые натуральные антитела против различных бактерий, вирусов, эритроцитарных и клеточных антигенов, гаптенов и других веществ (см. Boyden, 1966 Makela, Yormalainen, 1974). [c.137]

Существует несколько способов сохранения генофонда высших растений заповедники, национальные парки, банки семян. В последнее время большое внимание уделяется созданию и развитию новых способов пересадочных коллекций каллусных клеток, депонированию культур клеток и, наконец, криосохранению, т. е. хранению объектов при очень низкой температуре, обычно это температура жидкого азота (-196 °С). Криосохранение имеет существенные преимущества по сравнению с остальными методами. При сохранении в глубоко замороженном состоянии полностью прекращается обмен веществ, отсутствуют значительные физикохимические молекулярные изменения не только в клетке, но и в окружающей водной среде. Сохраняется генофонд, а следовательно, все свойства замороженного объекта. Единственный негативный фактор, которого не удается избежать, — это фоновая ионизирующая радиация. Однако, по мнению М.Ашвуд-Смита, потребуется примерно 32000 лет для накопления 10% летальных хромосомтлх повреждений. Следовательно, криогенный метод дает возможность неограниченно долго хранить растительный материал без существенных изменений сохраняются жизнеспособность клеток, их свойства, а также способность к морфогенезу и регенерации целых растений. [c.200]

В "фоновых районах выпадение кислотных дождей, очевидно, не столь сильно влияет на процессы в клетках ассимилирующего аппарата растений. По крайней мере, многочисленные исследования действия этого феномена на леса не позво. или выявить негативного эффекта от орошения листвы закисленной водой. Наиболее сильное повреждение растительности происходит в местностях с низкой буферной способностью почв. Помимо косвенного влияния через отмеченное выше изменение микробного ценоза, закисление почв приводит к нарушению поступления азота и ряда других необходимых элементов в корневую систему растений. Напротив, появление избыточных ионов алюминия подавляет некоторые биохимические процессы в корневой системе и тормозит ее развитие. К сказанному следует добавить, что от импактных воздействий и крупномасштабного переноса страдают, конечно, не только леса, но и аг-роценозы. [c.223]

При детектировании по электропроводности возникает проблема, которая заключается в том, что помимо фоновой электропроводности электролита обнаруживается и некоторая электропроводность в зоне вещества. Техника подавления этого нежелательного явления, используемая в ВЭЖХ, здесь не применима. Успешное использование детектора по электропроводности в КЭ описано много раз. С помощью амперометрического детектирования удается прямое обнаружение мейромедиаторов в нервных клетках, причем толщина капилляров, которые применяются для разделения, составляют 5 мкм. [c.40]

Определить количество копий плазмиды в клетках трансформированного штамма можно разными методами, но все эти. методы предполагают выделение суммарной дрожжевой ДНК с последуюш,им определением соотношения плазмидной и геномной ДНК. Относительно простой способ оценить число копий высококопийной плазмиды — сравнение интенсивности окрашивания бромидом этидия рестрикционных фрагментов, соответствующих плазмидной ДНК и ДНК рибосомных повторов в суммарной геномной ДНК. Если суммарную ДНК из трансформированных дрожжей обработать рестриктазой, расщепляющей плазмиду и выщепляющей рибосомный повтор, соответствующие рестрикционные фрагменты можно визуализировать, окрашивая бромидом этидкя агарозный гель после электрофореза. В УФ-свете эти полосы отчетливо высвечиваются над фоновым свечением всех остальных окрашенных бромидом этидия гетерогенных по длине рестрикционных фрагментов. В ДНК гаплоидной дрожжевой клетки содержится приблизительно 140 копий рибосомных последовательностей, содержание же плазмидной ДНК может быть оценено количественно при помощи денситометриче-ск го сканирования фотонегативов, полученных при съемке геля. Интенсивность окрашивания нормализуют относительно длины [c.232]

В покое эксцентрическая клетка обладает фоновой активностью, имеющей вид эпизодических низкоамплитудных волн деполяризации, называвшихся вначале волнами Индла по имени открывшего их исследователя. Они представляют собой реакции фоторецепторов на воздействие одиночных фотонов, переданные в эксцентрическую клетку через электрические синапсы. При световой стимуляции эти дискретные события сливаются в градуальный рецепторный потенциал, который деполяризует мембрану (см. также рис. 17.12 внизу). Имеются свидетельства того, что ионные свойства мембраны, обсуждавшиеся выше для фоторецепторов морского желудя, в большей или меньшей степени приложимы также к случаю генерации рецепторного потенциала у Limulus. [c.429]

Гипотеза матниторецепции, основанной на использовании магнетита,- только одна из многих, предложенных с начала нынешнего столетия, однако лишь в последние несколько лет она стала всерьез рассматриваться при объяснении механизма магниторецепции у животных. Это произошло благодаря выявлению магнетита биологического происхождения в тканях многих животных, увеличению числа животных, у которых обнаружена чувствительность к магнитному полю Земли, и осознанию того, что магнетит может служить реальной основой магнитотаксиса у бактерий. Пример с бактериями показывает, что живые организмы способны очень просто решать проблему детектирования направления магнитного поля. В самом деле, всю проявляемую организмами чувствительность к направлению поля можно объяснить наличием лишь нескольких образований, подобных магнитосоме, связанной с клетками волосков. Однако детальный механизм работы сенсорной системы на основе магнетита нам неизвестен, и это еще более усложняет объяснение наблюдаемой у животных чувствительности к малым геомагнитным флуктуациям и локальным магнитным аномалиям (величина которых может составлять всего 0,1% от фонового поля). [c.292]

Некоторые исследователи предпочитают избегать применения адъюванта Фрейнда. Действительно, он может стимулировать развитие гранулом, клетки которых повышают фоновый рост в культурах после гибридизации. Предпочтительнее использовать адсорбированный на квасцах антиген в смеси с убитыми клетками Bordetella pertussis в качестве адъюванта [9]. Другой способ, который был успешно применен в случае иммуноглобулинов, заключается в связывании антигена с частичками пластика [10] с последующим осуществлением иммунизации в/б, без адъюванта. Относительно небольшие пептиды иногда необходимо конъюгировать с белком-носипелем, но они могут приобрести иммуногенность при введении в полный адъювант Фрейнда. [c.123]

Кот да среда в большинстве лунок станет желтой (что обусловлено ростом клеток, сопровождающимся выделением кислых продуктов метаболизма), то ее полностью заменяют, с тем чтобы удалить фоновые антитела, образуемые еще сохранившими жизнеспособность иммуноглобулин-секретиру-ющими клетками селезенки. Это осуществляют следующим образом. Носик пастеровской пипетки вытягивают в очень, тонкий капилляр, а затем кончик длиной около трех сантиметров загибают под прямым углом. Вытянутые пи петки стерилизуют автоклавированием в алюминиевых контейнерах. [c.127]

Кроме того, чрезвычайно важно избежать перекрестного переноса клеток из одних лунок в другие. Для удаления среды из каждой лунки мы используем диспенсер на 1 мл, снабженный новым наконечником одноразового использования. Когда в лунках происходит интенсивный рост гибридомных клеток, то смена наконечников для каждой лунки гарантирует та кже, что в супернатанты, взятые для анализа, не будут занесены антитела из других лунок. Добавление свежой среды ко всем лункам (по 1 мл) можно производить одним наконечником при условии, что не происходит контакта наконечника со средой в лунках. После, смены культуральной среды на 1, 2 и 3-й день после гибридизации вполне достаточно и удобно заменять 1 мл среды на 1 мл свежей среды ГАТ по понедельникам, средам и пятницам. Благодаря смене среды каждые 2—3 дня фоновые антитела, синтезированные сохра-нивш ими жизнеспособность клетками еелезенки, удаляются. [c.131]

Обычно между 18-м и, 25- м днями супернатанты исследуют на антительну1Ю активность. К этому времени гибридомные клетки практически образуют монослой и среда имеет выра-жен ную желтую окраску. Это гарантирует, что супернатант содержит оптимальное количество антител для скрининга. Скрининг супернатантов из всех 48 лунок, включая и лунки, где не Наблюдается роста, имеет то преимущество,. что позволяет провести положительный отбо р на фоне остаточных антител. Чтобы определить, возрастает или снижается продукция антител данной отдельной культурой, целесообразно проводить последовательное тестирование содержания антител в супернатантах, отбираемых через каждые 2—3 дня. Снижение уровня антител может. быть связано как с проблемой остаточного фонового роста в данной лунке, так и с повышенной ростовой активностью несекретирующих гибридных клеток по сравнению с линией гибридомы. Трудно спасти антителосе кре-тирующие гибридомы из, лунок, где в супернатантах выявляется прогрессивное снижение, продукции антител. Кроме того, целесообразно попытаться клонировать отдельные клетки, но это не всегда приводит к желаемому результату. [c.132]

Клетки культивируют в панелях для микрокультур (3040, Fal on) с 96 плоскодонными лунками. Для реакции с лимфоцитами из лимфоузлов в каждую лунку с помощью серологических пластиковых пипеток (№ 7521, Fal on) вносят по 0,1 мл суспензии отвечающих клеток и 0,1 мл суспензии стимулирующих клеток (т. е. 0,5-10 и 10 клеток соответственно). Каждую комбинацию клеток повторяют 3—4 раза. При работе с клетками селезенки отвечающие и стимулирующие клетки берут в половинном количестве. В каждом опыте, исследуя взаимодействие клеток двух линий мышей, следует убедиться в их стимулирующей или отвечающей активности в СКЛ с клетками какой-либо третьей, контрольной, линии. Необходимо также поставить контрольные СКЛ с аутологичными или сингенными лимфоцитами, чтобы оценить фоновый уровень активации. Кроме этого, следует приготовить культуры каждой суспензии отвечающих лимфоцитов с неспецифическим митогеном для Т-клеток (например, с конканавалином А в конечной концентрации 2 мкг/мл), а также поставить совместное культивирование аллогенных пар всех образцов стимулирующих клеток, чтобы оценить эффективность рентгеновского облучения или обработки митомицином С. В некоторых случаях— в зависимости от числа включенных в опыт линий мышей — лучше заранее смешать в отдельных пробирках суспензии отвечающих н стимулирующих клеток, взятые в двойной концентрации. Это позволяет устранить один из источников различия ре- [c.246]

Планшет инкубируют 30 мин при 37°С во влажной атмосфере, а затем из каждой лунки осторожно отсасывают антитела. Каждую лунку трижды промывают PBS (250 мкл на 1 лунку) и добавляют в них по 10 мкл разбавленных, конъюгированных с флуоресцеином антител против мышиных иммуноглобулинов (кроличьих либо других в зависимости от используемых первых антител). Флуоресцирующая сыворотка должна быть предварительно адсорбирована клетками HeLa. Для этого отмытую суспензию клеток HeLa инкубируют 18 ч на холоду с флуоресцирующими антителами в присутствии ингибиторов протеаз. Готовые для работы антитела, не дающие фоновой флуоресценции, получают центрифугированием (500 g, 5 мин) инкубационной смеси и фильтрацией супернатанта через нитроцеллюлозный фильтр с диаметром пор 300 мкм. [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология